A Preliminary Study on Effects of Zhuang Medicine Clerodendrum japonicum(Thunb.)Sweet on Acute Tonsillitis

[Objectives]To study the effect of Zhuang medicine Clerodendrum japonicum(Thunb.)Sweet on acute tonsillitis.[Methods]The antibacterial,antipyretic,anti-inflammatory and analgesic effects of the extract of Zhuang medicine C.japonicum(Thunb.)Sweet were observed.[Results]Zhuang medicine C.japonicum(Thunb.)Sweet showed a good inhibitory effect onα-hemolytic streptococcus,β-hemolytic streptococcs,Staphylococcus citreus,Staphylococcus epidermidis,Staphylococcus aureus,Pseudomonas aeruginosa,Proteus and Escherichia coli;it showed a good inhibitory effect on the infection of Staphylococcus aureus andβ-hemolytic streptococcs in vivo;it could significantly reduce the elevated body temperature of rabbits injected with the triple vaccine and significantly increase the pain threshold of thermally stimulated mice.[Conclusions]Zhuang Medicine C.japonicum(Thunb.)Sweet has positive significance in the treatment of acute tonsillitis instead of antibiotics.

Process Optimization and Content Determination of Total Flavonoids of Zhuang Medicine Clerodendrum japonicum(Thumb.)Sweet

[Objectives]To optimize the extraction process of total flavonoids of Zhuang medicine Clerodendrum japonicum(Thumb.)Sweet and establish a method for its extraction and content determination.[Methods]The total flavonoids of C.japonicum were extracted by reflux extraction method.Through a single factor experiment,the effects of extraction method,extraction solvent concentration,extraction volume and extraction time on the total flavonoids content of medicinal materials were investigated to select the optimal extraction process of the total flavonoids of C.japonicum.[Results]The optimal extraction process of the total flavonoids of C.japonicum was 75%ethanol,1∶20 solid-to-liquid ratio,and 50 min reflux extraction time.[Conclusions]This method can effectively determine the content of total flavonoids in C.japonicum and provide a certain scientific basis for the study of the quality standard of this Zhuang medicine.This method has high reproducibility.It is stable and feasible in extraction of total flavonoids from Zhuang medicine C.japonicum.

Study on the Chemical Constituents of Clerodendrum japonicum,a Zhuang Medicine

[Objectives]To make a preliminary study on the chemical constituents of Clerodendrum japonicum,a Zhuang medicine,so as to provide theoretical support and scientific basis for exploring its medicinal value and comprehensive development and utilization.[Methods]The compounds were separated by macroporous adsorption resin,silica gel,Sephadex LH-20,ODS chromatographic column and preparative high performance liquid chromatography,and their structures were identified by NMR and MS data.[Results]8 compounds were isolated and identified from Clerodendrum japonicum extract with 80%ethanol solution:(1)fumaric acid,(2)trans-p-hydroxycinnamic acid,(3)cis-p-hydroxycinnamic acid,(4)ethyl caffeate,(5)acteoside,(6)kaempferol,(7)apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside,(8)caffeic acid.[Conclusions]8 compounds were isolated and purified from the ethanol extract of Clerodendrum japonicum.

Plackett-Burman结合Box-Behnken响应面法优化赪桐中类叶升麻苷纯化工艺及其稳定性分析

为优化赪桐中类叶升麻苷的纯化工艺,并分析其稳定性,试验对8种不同型号的大孔树脂进行吸附-解吸能力比较,筛选出最优的大孔树脂型号;采用Plackett-Burman结合Box-Behnken响应面法,考察上样液浓度、上样液流速、洗脱液浓度等因素水平,优化赪桐中类叶升麻苷的纯化工艺。通过高效液相测定纯化物在不同温度、光照、pH、抗氧化剂等环境条件下类叶升麻苷的含量。结果表明:赪桐中类叶升麻苷最佳纯化工艺条件为ADS-7型号大孔吸附树脂、上样液浓度9.0 mg/mL、上样液流速3.0 m L/min、洗脱液浓度58%,验证试验中的类叶升麻苷回收率可达到76.04%,与所建模型预测接近;稳定性试验表明,温度越高、光照时间越久、pH越高、类叶升麻苷的稳定性越差。同时,添加抗氧化剂可以明显增强其稳定性。故纯化后的类叶升麻苷应在低温、避光、酸性环境中贮藏和使用,且可通过添加不同种抗氧化剂延长其使用期限。采用Plackett-Burman结合Box-Behnken响应面法优化赪桐中类叶升麻苷纯化工艺稳定可行,可为后续抗奶牛乳房炎中草药型饲料添加剂产品的研发及产品稳定性使用提供理论依据。

5种马鞭草科药用植物的抗补体活性

采用细胞溶血法考察了千解草(Pygmaeopremna herbacea)、白花灯笼(Clerodendrum fortunatum L.)、尖尾枫[Callicarpa longissima(Hemsl.)Merr.]、赪桐[Clerodendrum japonicum(Thunb.)Sweet]及臭茉莉(Clerodendrum philippinum Schauer var.simplex Moldenke)等5种马鞭草科药用植物提取物经典途径和旁路途径的抗补体活性。结果表明:千解草水提取物、白花灯笼水提取物和醇提取物、尖尾枫水提取物和醇提取物、赪桐醇提取物及臭茉莉醇提取物有较强的经典途径抗补体活性,对经典途径的抗补体活性(CH50)分别为0.092±0.008,0.074±0.008,0.088±0.006,0.134±0.017,0.123±0.010,0.380±0.080及0.200±0.015 g/L;仅千解草和尖尾枫水提取物及白花灯笼醇提取物具有旁路途径抗补体活性,对旁路途径的抗补体活性(AP50)分别为0.533±0.033,0.758±0.031和0.362±0.029 g/L。因此,5种植物均具有不同程度的抗补体活性,其中白花灯笼醇提取物抗补体活性最强。

基于多种分析模式建立赪桐根HPLC指纹图谱

目的:建立不同产地赪桐根75%乙醇提取物HPLC指纹图谱。方法:色谱柱为Thermo ODS-2 HYPERSIL(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.05%冰醋酸溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为320 nm;柱温为30℃;进样量为15μL;建立指纹图谱,分别采用相似度评价、聚类分析和主成分分析法对数据进行分析。结果:建立的指纹图谱共确定12个共有峰,指认其中3个成分,10批赪桐根HPLC指纹图谱与对照图谱相似度均大于0.960,聚类分析和主成分分析均将赪桐根分为4类。结论:建立的不同产地赪桐根75%乙醇提取物指纹图谱方法稳定、可靠,可为赪桐根的进一步开发利用和质量评价提供依据。

HPLC同时测定赪桐根3种不同极性部位咖啡酸、毛蕊花糖苷及山柰酚的含量

目的采用高效液相色谱法(HPLC法)对赪桐根3种不同极性部位咖啡酸、毛蕊花糖苷及山柰酚的含量进行测定,比较3种不同极性部位含量差异。方法采用HPLC法,色谱柱为Thermo ODS-2 HYPERSIL(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇-0.05%冰醋酸为流动相,梯度洗脱,检测波长为320 nm,流速1.0 m L/min,柱温30℃,进样量为15μL。结果 HPLC法测定咖啡酸、毛蕊花糖苷及山柰酚,分别在2.01~100.50μg/m L(R=0.9996)、101.50~3022.50μg/m L(R=0.9997)、7.61~761.25μg/m L(R=0.9999)的线性范围内呈良好线性关系。赪桐根不同极性部位中同种成分的含量具有明显的差异,不同产地药材所含同种成分的含量亦有很大的差异。结论建立了HPLC法测定赪桐根3种不同极性部位咖啡酸、毛蕊花糖苷及山柰酚的含量测定方法,该方法可为制定赪桐根的质量控制方法提供科学的依据。

星点设计-效应面法优化赪桐根总黄酮提取工艺及含量测定

目的研究赪桐根中总黄酮提取工艺的优化及含量测定,为赪桐药材的资源开发利用提供理论和实验基础。方法以赪桐根中总黄酮的含量为考察指标,通过单因素试验考察复合酶的用量、酶解温度、酶解时间等因素对赪桐根总黄酮含量的影响。在单因素试验的基础上,再采用星点设计-效应面法考察复合酶的用量、酶解温度、酶解时间3个自变量之间相互作用对提取赪桐根中总黄酮含量的影响。通过对以上3个自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用星点设计-效应面法选取最佳的提取工艺,并进行预测分析。同时,采用星点设计-效应面法优化赪桐总黄酮得到的最佳提取工艺制备不同产地赪桐根的供试样品,经显色后,以芦丁做对照,在波长为500 nm下测定吸光度。结果赪桐根总黄酮最佳提取工艺为酶的用量是0.35%,酶解温度为62℃,酶解时间为125.7 min。在此优化条件下,总黄酮含量的预测值为10.37 mg/g。总黄酮含量测定结果说明不同产地的赪桐根中的总黄酮含量有较大的差异。结论采用星点设计-效应面法优化复合酶酶解赪桐根总黄酮提取工艺条件合理、稳定可行,操作简便、快捷,为测定赪桐根中总黄酮的提取工艺提供科学依据。不同产地药材因生长环境、湿度、阳光、温度等因素对赪桐根中总黄酮含量有较大的影响。

基质配比对野生花卉状元红扦插繁殖的影响

为研究不同插穗基质对状元红[Clerodendrum japonicum(Thunb.)Sweet]扦插生长的影响,采用黄泥和腐殖质混合配比对野生花卉状元红进行扦插试验。结果表明,7种不同基质的扦插苗生根率、生根个数、根长、新梢长之间存在明显差异。高比例腐殖质混合基质扦插苗生根效果最佳,黄泥∶腐殖质=1∶3(V∶V)的混合基质最适合状元红插穗的生长,因此建议在生产上推广应用。

赪桐根的化学成分预试验研究

[目的]采用系统预试法对赪桐根可能含有的化学成分进行预试验,初步探索赪桐根的化学成分类型。[方法]采用化学反应鉴别方法,对赪桐根石油醚、水、95%乙醇提取液可能含有的化学成分类型进行初步研究。[结果]赪桐根可能含有蛋白质、糖、鞣质、有机酸、皂苷、黄酮类、酚类、香豆素与内酯、植物甾醇、三萜类和挥发油等化学成分。[结论]初步确定赪桐根含有多种成分,为赪桐根的进一步开发利用提供了实验基础。

壮药赪桐质量标准初步研究

目的:对赪桐药材质量标准进行初步研究。方法:按2010年版《中华人民共和国药典》附录方法对赪桐的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行测定,并对赪桐进行薄层色谱鉴别。结果:初步拟定赪桐药材水分不得超过9%、总灰分不得超过9%、酸不溶性灰分不得超过0.5%、浸出物不得少于16.0%,并建立薄层色谱鉴别方法。结论:建立的方法可为赪桐药材质量标准的制定提供实验依据。

不同处理方法对赪桐种子萌发的影响

以发芽率、平均发芽时间为指标,研究不同清水浸泡时间、热水处理、烘焙处理、破壳处理、激素处理和低温层积等因素对赪桐种子萌发的影响。结果表明:采用破壳处理方法能极显著地提高种子发芽率,其发芽率达到92%;在不同烘焙处理中,6 h处理为最佳,其发芽率达74%;在不同的浸泡处理中,以自然水浸泡72 h处理为最佳,其发芽率达60%;在不同播种深度处理中,以3 cm播种处理为最佳,其发芽率达60%;激素处理能明显提高种子的发芽率,浓度为30 mg/L的萘乙酸、25 mg/L赤霉素、30 mg/L的6-BA溶液的浸泡处理最佳,发芽率均为63.33%。

赪桐石油醚提取物的化学成分及其对斜纹夜蛾的杀虫活性

为斜纹夜蛾生物农药的研发及拓展赪桐植物资源在生物农药方面的应用提供参考,采用气相色谱-质谱(GC-MS)研究赪桐石油醚提取物化学成分组成,并采用浸虫浸叶法,测试赪桐石油醚提取物对斜纹夜蛾幼虫的杀虫活性。结果表明:该提取物主要包含21种化学成分,分别为脂肪族、萜类和芳香族等,其中脂肪族化合物占56.967%,萜类化合物和芳香族化合物分别占11.763%和2.617%;提取物对斜纹夜蛾幼虫有较强的杀虫活性,其LC 50为12.534 mg/mL;棕榈酸甲酯、芳樟醇和六氢法尼基丙酮可能一定程度上代表赪桐石油醚提取物的杀虫活性成分。

不同激素处理对鼎湖山状元红扦插繁殖的影响

[目的]研究不同激素处理对状元红扦插繁殖的影响。[方法]采用不同质量浓度(0、50、100、150、200、250 mg/L)的植物激素NAA或IBA浸泡状元红插穗;并在固定浓度的条件下分别浸泡0、1、10、30、60、120 min,然后进行扦插,比较NAA或IBA在不同浓度、不同浸泡时间对状元红扦插生根的影响。[结果]NAA或IBA浓度在100~200 mg/L时明显促进状元红生根;浸泡30~60 min能有效地促进状元红插穗生根和壮苗。[结论]该研究可为状元红的人工繁殖提供参考。

壮药赪桐乙酸乙酯部位及流份对LPS诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用

目的筛选赪桐乙酸乙酯部位及不同洗脱梯度二氯甲烷-甲醇部位对炎症反应的抑制作用最强的流份。方法使用MTT法确定壮药赪桐乙酸乙酯部位及不同洗脱梯度二氯甲烷-甲醇部位对RAW264.7细胞安全给药浓度范围,通过ELISA法测定赪桐乙酸乙酯部位及不同洗脱梯度二氯甲烷-甲醇部位对LPS诱导RAW264.7细胞分泌NO、TNF-a、IL-12、IL-6、IL-1β含量,筛选对炎症反应的抑制作用最强的流份。结果赪桐乙酸乙酯部位及流份在0.06~2.0 mg/ml浓度范围内,赪桐乙酸乙酯部位及流份对细胞活力的抑制作用逐渐增强,浓度在0.5 mg/ml以上具有明显的细胞毒性,在0.5 mg/ml以下对细胞活力具有增强作用。二氯甲烷-甲醇洗脱部位高剂量能抑制炎症因子IL-12、IL-6、TNF-a、IL-1β释放,对NO的分泌没有抑制作用。结论赪桐乙酸乙酯部位及不同洗脱梯度的二氯甲烷-甲醇部位抗炎机制是通过抑制NO、TNF-a、IL-12、IL-6、IL-1β炎症因子的分泌,二氯甲烷-甲醇(50:1)洗脱部位和二氯甲烷-甲醇(30:1)洗脱部位的抗炎能力较强。

基于神经网络和响应面法优化赪桐中类叶升麻苷提取工艺及其抑菌活性研究

试验旨在优化赪桐中类叶升麻苷的提取工艺并研究其抑菌活性。通过单因素试验、响应面试验、神经网络法以赪桐中类叶升麻苷的得率为考察指标,优化提取工艺;研究最佳工艺提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、耻垢分枝杆菌、无乳链球菌的抑菌效果。结果显示:最佳提取工艺条件为粒度目数100目、提取温度80℃、液料比13 mL/g、乙醇浓度63%、提取时间90 min、提取3次,此条件下类叶升麻苷得率为12.27 mg/g。最佳工艺提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有明显的抑制作用,对耻垢分枝杆菌、无乳链球菌则无明显的抑制作用。研究表明,提取工艺优化后赪桐中类叶升麻苷得率相对较高,具有良好的抑菌效果。

赪桐提取物抗菌活性及其对金黄色葡萄球菌的抗菌机理

【目的】揭示赪桐提取物(Extracts from Clerodendrum japonicum,EFC)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抗菌机理,为临床抗病原菌感染药及植物杀菌剂的研发提供理论依据。【方法】采用纸片扩散法和微量肉汤稀释法测定金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌和枯草芽孢杆菌对EFC的敏感性,明确EFC的抗菌活性;通过试剂盒、流式细胞仪及扫描电镜等测定EFC作用后金黄色葡萄球菌细胞膜、细胞壁、三羧酸(TCA)循环、可溶性蛋白、胞内活性氧(ROS)水平、细胞凋亡及形态结构的变化,研究EFC的抗菌机理。【结果】EFC对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌和枯草芽孢杆菌3种供试细菌均具有抗菌活性,其中对金黄色葡萄球菌的抗菌活性最强,其抑菌圈(IZ)、最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)分别为19.04 mm、0.50 mg/mL和1.00 mg/mL。经EFC作用10 h后,金黄色葡萄球菌的乳酸脱氢酶(LDH)、钾离子(K+)及碱性磷酸酶(AKP)外泄分别显著增加72.0%、43.0%和78.0%(P<0.05,下同),琥珀酸脱氢酶(SDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)活性分别显著下降80.0%和36.4%。金黄色葡萄球菌经EFC作用24 h后,与对照组相比,5MIC(2.50 mg/mL)、10MIC(5.00 mg/mL)和20MIC(10.00 mg/mL)组的胞外蛋白含量分别上升28.6%、41.8%和61.5%,胞内蛋白含量分别下降40.9%、61.3%和82.5%,胞内ROS水平分别增加9.1%、33.5%和51.0%,细胞凋亡率分别增加24.0%、50.6%和72.8%。经EFC作用24 h后,扫描电镜下的菌体形态结构不规则、萎缩、畸形。【结论】EFC通过破坏金黄色葡萄球菌细胞壁和细胞膜的完整性及通透性,影响蛋白合成,导致TCA循环减慢而发挥抑菌作用。

光照强度对赪桐生长及光合特性的影响

以赪桐(Clerodendrum japonicum)扦插苗为材料,研究了3种光照强度:100%光照强度(CK)、36.1%光照强度(3针遮荫网遮荫)和17.8%光照强度(6针遮荫网遮荫)处理条件下的生长及光合特性。结果表明:遮荫处理下,赪桐苗高、地径增长量、地下部分干质量和地上部分干质量显著增加(P<0.05);随着光照强度的减弱,赪桐的叶面积、叶周长、根长、根表面积、根体积和SPAD值显著增加(P<0.05);与对照处理相比,17.8%光强处理下赪桐的表观量子效率(AQY)增加,光补偿点(LCP)和暗呼吸速率(R_d)降低。该研究表明,赪桐具有较强的耐荫性及对弱光的利用能力;遮荫能促进赪桐生长;100%光照条件会抑制其生长,17.8%光照强度更适宜赪桐生长。

傣药红花臭牡丹根饮片质量标准研究

目的:建立红花臭牡丹根饮片质量标准。方法:观察红花臭牡丹根性状和显微鉴别特征;参照《云南省中药材标准》(2005年版第三册·傣族药)及《中国药典》(2015年版四部)建立薄层鉴别方法;照《中国药典》(2015年版四部)测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、砷盐、重金属、有机氯农药残留量、浸出物;采用分光光度法通过线性关系、准确度、精密度、不同产地以及试验条件的考察来建立红花臭牡丹根中总黄酮的含量测定方法,检测波长为357 nm。结果:性状及鉴别方法专属性好,3个不同产地10批红花臭牡丹根饮片水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物及总黄酮的含量的平均值分别为5.93%、2.24%、0.12%、13.57%、5.47%。砷盐均符合规定、重金属均小于百万分之十、有机氯农药残留量均未检出。结论:所建立方法可应用于红花臭牡丹根饮片的质量控制。

壮药赪桐的生药学与质量分析及临床研究进展

从壮药赪桐的资源分布、生药学特征、药材鉴定方法、化学成分研究、含量测定方法以及临床研究等方面进行综述。赪桐分布很广,主要生长在我国的南方地区,资源极其丰富,化学成分复杂多样,含有黄酮类、甾体、香豆素等成分。赪桐民间用药历史悠久,具有重要的临床应用价值。