君子兰(Clivia miniata Regel)花粉贮藏寿命和受精过程的研究

利用花粉低温冷藏技术与常规石蜡制片技术研究了大花君子兰的花粉贮藏寿命以及受精过程,为其杂交育种提供基础资料。结果如下:新鲜花粉结籽率为35%;-21℃贮藏70d的花粉结籽率为22%;贮藏140d的花粉结籽率为4%;贮藏180d的花粉结籽率为0。两个精细胞具有二型性。成熟胚囊里次生核位于反足细胞端。胚珠发育不同步,胚珠没有受精与胚珠败育成为结籽率低的内部原因。君子兰受精过程经历时间为:人工异花授粉2h左右花粉萌发;花粉管在花柱中生长26h左右;花粉管在子房腔内生长12h左右;授粉后42～50h雌雄性细胞融合;授粉后44～46h初生胚乳核分裂;授粉后的第6～7天,合子进行分裂,合子休眠期为4～5d。

君子兰花粉生活力测定及贮藏方法筛选

以大花君子兰品种胜利为试材,利用单因子试验比较了固体培养基中蔗糖、硼、钙、镁、钾及琼脂质量浓度对花粉萌发的影响,在此基础上进行正交试验。结果表明,适宜的花粉培养基为蔗糖100 g/L+H3BO3150 mg/L+CaCl2100 mg/L+琼脂4 g/L,新鲜花粉萌发率最高达91.4%。用醋酸洋红染色法和I-KI染色法测定君子兰花粉生活力分别为88.1%和89.4%,比培养基法(78.7%)略高。不同贮藏方法对君子兰花粉生活力影响差异较大,最佳贮藏方法为-20℃冷冻干燥贮藏,贮藏120 d后花粉生活力为24.4%。

君子兰花丝离体培养影响因素研究

以君子兰（Clivia miniata Regel.）品种油匠的花丝为外植体进行离体培养,结果表明：君子兰花丝离体培养能通过愈伤组织和直接再生不定芽两条途径成苗。适宜花丝愈伤组织诱导与分化的花蕾长度为0.6~1.0 cm;培养基中加入活性炭加速了外植体的褐化,对花丝诱导和分化不利;暗培养和接种前4℃低温预处理明显降低了外植体的诱导率和分化率,在花丝离体培养中不宜采用;花丝诱导和分化的最佳培养基为MS＋BA2.0mg·L-1＋NAA3.0mg·L-1＋IBA1.0mg·L-1,诱导率与分化率分别为16.3%和50.0%。

赤霉素对君子兰花期调控的研究

应用赤霉素不同浓度和不同处理频率对君子兰品种"油匠"进行处理。结果表明:与对照相比各浓度赤霉素(GA3)处理对植株提高抽葶率、提早花期、促进叶生长都有明显作用。每天喷施1次200mg/L赤霉素后植株的抽葶率高于其他处理,50mg/L赤霉素可以明显促进君子兰的花葶生长。应用50mg/L和200mg/L赤霉素均可使君子兰提前21d开花,经过50mg/L赤霉素处理后,花朵和果实数量多于其他处理。

君子兰组织培养研究

[目的]筛选适宜君子兰叶片离体的条件。[方法]选取君子兰(Clivia miniata Regel)品种"油匠"的叶片为外植体进行离体培养,在MS培养基中附加不同浓度的2,4-D、BA、NAA和KT,对外植体采用不用时间的低温预处理,并对接种后的外植体分别进行不同时长的暗培养,研究不同培养条件对外植体愈伤组织诱导和分化的影响。[结果]叶片诱导分化的最佳培养基为MS+BA2.0 mg/L+NAA3.0 mg/L+KT1.0 mg/L+蔗糖3.0%,诱导与分化率分别为59.2%和55.2%;暗培养10d后外植体诱导与分化率较高,为13.8%和25.0%。[结论]培养基中加入活性炭对叶片诱导与分化不利;接种前低温预处理1 d,叶片诱导与分化率较高,分别为33.3%和25.0%。

大花君子兰幼胚培养研究

用授粉后１０８天的大花君子兰幼胚离休培养表明，幼胚发芽力与胚大小有关。ＭＳ＋ＫＴ１．０ｍｇ／ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／ｌ的培养基有利幼胚发芽。１／２ＭＳ培养基中添加ＩＢＡ０．１ｍｇ／ｌ、ＩＢＡ０．５ｍｇ／ｌ＋活性炭３ｇ／ｌ或ＩＢＡ１．０ｍｇ／ｌ＋活性炭３ｇ／ｌ都能使幼苗生根。试管培养具有促进幼胚发芽、缩短育苗时间的显著效果。

大花君子兰叶中挥发油成分GC-MS分析

用气相色谱-质谱法对大花君子兰叶中挥发油成分进行分析。采用水蒸气蒸馏法从大花君子兰叶中提取挥发油,用气相色谱-质谱法对其化学成分进行鉴定,并用归一化法测定其百分含量。共鉴定了其中15种成分,占挥发油总量的66.43%。本方法稳定可靠,重现性好,适合用于中药挥发油的化学成分分析。

四种不同品系大花君子兰的离体组织培养研究

以四种不同品系大花君子兰的幼子房为外植体进行了离体组织培养研究.结果表明:大花君子兰幼子房愈伤诱导和分化成苗的能力与品系、外植体时期、光照强度、低温处理时间、植物生长调节剂种类和质量浓度及酸水解酪素质量浓度等有关.愈伤诱导的最佳培养基为MS+蔗糖35g/L+酸水解酪素0.4g/L+BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L;分化成苗的最佳培养基为MS+蔗糖35g/L+NAA 0.5mg/L+KT 3.0mg/L;生根的最佳培养基为1/2 MS培养基.

大花君子兰总生物碱抗肿瘤作用的研究

采用MTT法观察大花君子兰总生物碱(简写为TACMR)对体外培养的人肺癌细胞NCI-H446、人胃癌细胞SGC-7901、人乳腺癌细胞MCF-7和人肝癌细胞SMMC-7721 4种细胞株的增殖抑制作用;用小鼠移植性肿瘤法检测TACMR对小鼠H22肝癌的生长抑制作用,并通过脾指数和胸腺指数等指标综合考察TACMR对肿瘤小鼠免疫机能的影响。体外MTT结果显示TACMR对NCI-H446、SGC-7901、MCF-7和SMMC-7721均具有明显的细胞增殖抑制作用,均呈现良好的量效关系,并且TACMR作用于4种不同人肿瘤细胞48 h的IC50值分别为38.55,12.08,8.85,7.04μg/mL;体内试验结果表明TACMR对H22肝癌生长具有一定的抑制作用。TACMR剂量在34 mg/kg时,抑瘤率为35.2%,脾指数与阳性对照组相比显著增加(P<0.01)。TACMR剂量在136 mg/kg时,抑瘤率仅为3.7%,与阴性对照组比较,胸腺指数和脾指数明显减少(P<0.01),与阳性对照组比较,胸腺指数明显减少(P<0.01)。上述体内外试验结果表明:TACMR具有抗肿瘤作用,同时对免疫功能有一定的影响。

大花君子兰大小孢子发生与雌雄配子体发育的研究

该研究运用常规石蜡切片技术,对大花君子兰(Clivia miniata Regel)大、小孢子发生及雌、雄配子体发育进程进行解剖学观察分析,以探讨君子兰生殖生物学解剖特征,为君子兰种子发育和育种提供理论依据。结果表明:(1)大花君子兰花药4室,具分泌型绒毡层。(2)小孢子母细胞减数分裂的胞质分裂为连续型,小孢子四分体为左右对称型,成熟花粉为二细胞型。(3)倒生胚珠,双珠被,厚珠心和雌配子体发育为蓼型。(4)记录了雌雄配子体发育的对应关系,发现雄配子体发育趋于同步,雌配子体发育不同步。(5)开花散粉时,雌配子体尚有处于四核、八核胚囊的时期;成熟胚囊阶段,中央细胞的2个极核位于反足细胞端,反足细胞呈退化状态。具承珠盘结构。

君子兰未成熟胚四倍体诱导及染色体数鉴定

以君子兰(Clivia miniata Regel.)品种‘胜利’为试材,采用一种新型外植体未成熟胚,利用秋水仙素与组织培养相结合的方法,研究秋水仙素浓度、处理时间和不同胚龄对未成熟胚诱导加倍的影响。结果表明:在MS+NAA 2.0 mg.L-1+BA 1.5 mg.L-1培养基上,0.01%秋水仙素处理180 d胚龄的未成熟胚20 d诱变效果最佳,四倍体诱变率最高,达30.8%,形态变化率达36.5%,死亡率为34.1%。经0.03%秋水仙素处理120 d胚龄的未成熟胚30 d诱变效果也较好,四倍体诱变率较高,达24.0%,形态变化率达21.1%,死亡率为46.7%。经染色体数观察,加倍处理后代中存在2x、4x和混倍体植株。随机调查了267株加倍处理植株,得到30株四倍体(2n=4x=44)、194株二倍体(2n=2x=22)和43株混倍体,平均四倍体诱变率为11.2%。秋水仙素处理出现的植株生长缓慢,生根明显较晚,叶片变宽变短等形态变化可以作为加倍的初期有效判断指标。