Clk1基因对Aβ诱导的阿尔茨海默病自噬水平的影响

目的探讨siRNA转染沉默Clk1基因对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)模型细胞自噬水平的影响。方法采用MTT法及siRNA转染沉默Clk1基因技术,观察Aβ25-35、Clk1基因对细胞存活率的影响。细胞免疫荧光观察自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达情况。Western blot检测Clk1、HIF-1α、PI3K/AKT/mTOR、自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62表达情况。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测Beclin1、LC3、p62 mRNA水平的变化。结果与NC+NS组相比,NC+Aβ组HT22细胞的活力明显降低(P<0.01),而沉默Clk1后siClk1+Aβ组细胞活力较NC+Aβ组明显升高(P<0.01)。细胞免疫荧光结果显示NC+Aβ组LC3表达较NC+NS组明显升高(P<0.01),siClk1+Aβ组LC3表达较NC+Aβ组明显降低(P<0.01)。Western blot结果显示与NC+NS组相比,NC+Aβ组Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显增加(P<0.01),p62、PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显降低(P<0.01);与NC+Aβ组相比,siClk1+Aβ组Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显降低(P<0.01),p62、PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显增加(P<0.01);加入LY294002和YC-1可以逆转沉默Clk1对Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白的影响。RT-qPCR结果显示siClk1+Aβ+YC-1组与siClk1+Aβ组相比,Beclin1、LC3、p62 mRNA水平无差异(P>0.05),其余各组间比较Beclin1、LC3、p62 mRNA与蛋白水平变化一致。结论沉默Clk1表达可以缓解Aβ25-35诱导的HT22细胞过度自噬引发的细胞存活率降低,其机制可能与PI3K/AKT/mTOR信号通路及HIF-1α相关。

衰老相关基因Clk1的研究进展

Clk1 编码一种参与辅酶Q 生物合成的线粒体酶,在机体的衰老过程中起着重要作用。研究发现,Clk1/Mclk1 基因的缺失会导致线虫和小鼠寿命的延长,但其具体机制尚未清楚,该文就近年来Clk1 与衰老的相关研究作一总结,全面阐述和讨论Clk1 基因在机体内发挥的作用。

应用原位杂交技术研究CLK1在早期鸡胚胎发育中的表达

试验旨在探讨蛋白激酶CLK1在早期鸡胚胎发育过程中的表达情况。应用分子克隆技术构建CLK1/p MD18-T重组质粒,制备地高辛标记的CLK1 RNA原位杂交探针,利用Real-time PCR和原位杂交技术检测CLK1 mRNA在早期鸡胚胎发育中的表达及分布。Real-time PCR结果显示,CLK1 mRNA在早期鸡胚各时期中均有不同程度的表达;原位杂交结果显示,CLK1的mRNA在鸡胚的不同时期不同部位均有不同程度的表达,且在头部和尾部表达明显。本研究阐明了CLK1在早期鸡胚胎发育过程中的表达及分布,为进一步研究CLK1在鸡胚中的功能及作用机制奠定基础。