基于细胞代谢组学的柴胡皂苷b2对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的研究柴胡皂苷b2(SSb2)对皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法①将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),CORT(100~800μmol·L^(-1)孵育24 h)组和SSb2(1.5625,3.125,6.25,12.5,25,50和100μmol·L^(-1)孵育24 h)组,MTT法检测细胞存活率。②将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),模型组(CORT 400μmol·L^(-1)孵育24 h)和模型+SSb2组(SSb21.5625,3.125,6.25,12.5和25μmol·L^(-1)预处理3 h,去上清,然后加入CORT 400μmol·L^(-1)及对应浓度SSb2共孵育24 h)。MTT法检测细胞存活率,微板法检测PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率。③将细胞分为细胞对照组、模型组和模型+SSb212.5μmol·L^(-1)组,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)的代谢组学技术检测PC12细胞代谢轮廓变化;比色法检测谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性。结果①与细胞对照组相比,当CORT浓度为400μmol·L^(-1)时,细胞存活率降低至(55±6)%(P<0.01);SSb2浓度>50μmol·L^(-1)时,对PC12细胞有显著的细胞毒性(P<0.01)。②与细胞对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2各浓度组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),LDH释放率显著降低(P<0.01)。③与细胞对照组相比,模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。代谢组学结果表明,SSb2能显著回调谷氨酸、肌酸、N-乙酰天冬氨酸、L-酪氨酸、柠檬酸、L-异亮氨酸、乳酸、谷氨酰胺和胆碱9个差异代谢物。对SSb2调控的关键代谢物进一步富集分析表明,SSb2主要影响5条代谢通路,即D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,酪氨酸代谢和精氨酸生物合成。与细胞对照组相比,模型组谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性显著降低(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞谷氨酸含量(P<0.01)和谷氨酰胺酶活性显著升高(P<0.05)。结论SSb2对CORT诱导的PC12细胞损伤具有神经保护作用,其机制与抑制细胞凋亡和调节代谢紊乱有关。

大柴胡汤加减结合常规西药治疗2型糖尿病的疗效及对临床症状积分、胰岛β细胞功能指标的影响

目的 探讨大柴胡汤加减结合常规西药治疗2型糖尿病的疗效及对临床症状积分、胰岛β细胞功能指标的影响。方法 选择2022年9月—2023年9月辽阳市中心医院收治的98例2型糖尿病患者为研究对象,以随机数表法分为两组,各49例。对照组用常规西药治疗,观察组用大柴胡汤加减结合常规西药治疗,比较两组的疗效及临床症状积分、胰岛β细胞功能指标。结果 观察组有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗12周的临床症状积分低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05);观察组治疗4周、治疗12周胰岛β细胞功能指数高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。不良反应发生率组间比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.178,P=0.674)。结论 大柴胡汤加减结合常规西药治疗2型糖尿病的疗效较高,可降低临床症状积分,改善胰岛β细胞功能指标,且具有较高的安全性。

大柴胡汤加减方治疗2型糖尿病肝胃郁热证对胰岛β细胞功能的影响分析

目的观察在2型糖尿病肝胃郁热证中应用大柴胡汤加减方治疗对患者血糖水平和胰岛β细胞功能的影响。方法选取2022年1月至2023年1月期间宿迁市中医院收治的72例2型糖尿病肝胃郁热证患者,依据随机数字表法分为常规组和试验组,各36例。常规组开展常规短期胰岛素强化治疗,试验组在常规治疗基础上予以大柴胡汤加减方治疗,两组患者均以14 d为1个治疗周期,均开展2个周期的治疗。比较两组患者治疗后临床疗效,治疗前后中医证候积分、血糖水平、胰岛β细胞功能,以及治疗期间低血糖发生情况。结果试验组患者临床疗效优于常规组,治疗总有效率高于常规组(均P<0.05);与治疗前比,治疗后两组患者中医证候积分、餐后2h血糖、空腹血糖、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均降低,且试验组均低于常规组(均P<0.05);与治疗前比,治疗后两组患者胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)水平均升高,且试验组高于常规组(均P<0.05);试验组患者低血糖发生率低于常规组(P<0.05)。结论在常规胰岛素强化治疗的基础上联合大柴胡汤加减方治疗肝胃郁热证2型糖尿病能够改善患者胰岛功能,降低患者血糖水平,改善患者临床症状,提高治疗效果,且能够预防低血糖的发生。

柴胡皂苷D抑制肝星状细胞活化及PSME3表达的实验研究

目的观察柴胡皂苷D对人肝星状细胞LX-2活化及蛋白酶体激活子亚基3(PSME3)mRNA和蛋白表达的影响,探讨柴胡皂苷D治疗肝纤维化的可能作用机制。方法将生长期良好的LX-2细胞分为正常组、模型组和柴胡皂苷D组,空白组不加药物,模型组以10 ng/mL转化生长因子-β1(TGF-β1)处理,柴胡皂苷D组以1μmol/L柴胡皂苷D+10 ng/mL TGF-β1联合处理24 h,采用CCK8检测各组细胞活力,qPCR和Western blot检测纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(COL1A1)和PSME3 mRNA相对表达水平和蛋白表达量。结果与正常组比较,模型组细胞增殖活力显著增加(P<0.05),α-SMA、COL1A1和PSME3的mRNA表达水平和蛋白表达量均显著增加(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷D组细胞增殖活力下降(P<0.05),α-SMA、COL1A1和PSME3 mRNA表达水平和蛋白表达量均显著下降(P<0.05)。结论柴胡皂苷D对LX-2细胞活化有抑制作用,其机制可能与抑制PSME3 mRNA表达水平和蛋白表达量有关。

柴胡皂苷D对紫杉醇耐药乳腺癌细胞耐药性的逆转作用研究

目的:研究柴胡皂苷D对紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/PTX)耐药性的逆转作用及其机制。方法:采用噻唑蓝溴化四唑法(MTT法)测定不同质量分数(0、12.5、25、50、100、200 mg/L)PTX处理MCF-7/PTX细胞和MCF-7细胞48 h的细胞存活率,确定MCF-7/PTX细胞对PTX的耐药程度。采用MTT法测定不同质量分数(0.125、0.25、0.50、1.00 mg/L)柴胡皂苷D处理MCF-7/PTX细胞48 h的细胞增殖抑制率,确定柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞的安全性。采用MTT法测定确定0.125、0.25和0.5 mg/L柴胡皂苷D能否调节MCF-7/PTX细胞对PTX的敏感性。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和流式细胞术分别检测不同质量分数的柴胡皂苷D对Yes相关蛋白(YAP)和P糖蛋白(P-gp)表达的影响。进行罗丹明123(Rh123)积累和外流测定。结果:与0 mg/L PTX对比,MCF-7和MCF-7/PTX细胞存活率随PTX质量分数增加而降低,且呈现依赖性(P<0.05);确立100 mg/L PTX作为MCF-7/PTX细胞的给药质量分数。0.125、0.25和0.50 mg/L柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞无明显毒性,MCF-7/PTX细胞增殖抑制率随柴胡皂苷D质量分数增加而升高。与PTX组对比,0.125、0.25和0.50 mg/L柴胡皂苷D组MCF-7/PTX细胞IC 50、YAP和p-YAP蛋白、P-pg mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。与PTX组对比,柴胡皂苷D处理的MCF-7/PTX细胞积累更多Rh123,降低Rh123外排速度(P<0.01)。结论:柴胡皂苷D可能通过下调Hippo/YAP通路逆转P-gp介导的乳腺癌耐药。

柴胡加龙骨牡蛎汤联合五行音乐治疗非小细胞肺癌化疗后患者焦虑抑郁状态临床研究

目的:观察柴胡加龙骨牡蛎汤联合五行音乐治疗非小细胞肺癌化疗后患者焦虑抑郁状态的临床疗效。方法:选择78例非小细胞肺癌化疗后焦虑抑郁患者,根据随机数字表法分为观察组与对照组各39例。对照组给予西医常规治疗,观察组给予柴胡龙骨牡蛎汤联合五行音乐治疗。比较2组临床疗效,比较2组治疗前后贝克抑郁自评量表评分、抑郁自评量表(SDS)评分、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分、焦虑自评量表(SAS)评分、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分及血清5-羟色胺(5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平。结果:治疗后观察组总有效率为92.31%,高于对照组74.36%(P<0.05)。治疗后,2组贝克抑郁自评量表、SDS、HAMD评分均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组SAS、HAMA评分均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组血清5-HT、GABA水平均升高(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05);2组血清GFAP水平降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤联合五行音乐可有效改善非小细胞肺癌化疗后患者焦虑抑郁状态,临床疗效显著。

“Anti-UV Clone”柴胡细胞提取物对HaCaT和HepG2细胞生长的影响研究

实验利用噻唑蓝比色分析法(MTT法)研究"Anti-UV Clone"柴胡细胞株不同溶剂提取物对人角质上皮细胞(HaCaT细胞)和人肝癌细胞(HepG2细胞)生长的影响.实验表明,75%乙醇提取剩余物在低浓度时对HaCaT细胞的生长具有显著的促进作用,其中以加入质量浓度为2.50mg/L时效果最好,添加后HaCaT细胞的生长速率比空白对照高(43.71±1.23)%.表明该提取物中存在促进HaCaT细胞生长的活性物质.而"Anti-UVClone"柴胡细胞株石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯提取物则都会抑制HaCaT细胞和HepG2细胞的生长.其中石油醚和乙酸乙酯提取物对HaCaT细胞生长的抑制作用最强,在加入质量浓度为7.50mg/L时对HaCaT细胞的抑制率分别达(39.70±0.61)%和(40.20±0.95)%;而石油醚提取物对HepG2细胞生长的抑制作用最强,在加入质量浓度为7.50mg/L时对HepG2细胞生长的抑制率达(44.97±1.01)%.

柴胡加龙骨牡蛎汤含药血清调控NLRP3/Caspase-1通路介导心肌细胞焦亡的研究

目的探讨柴胡加龙骨牡蛎汤含药血清对缺血/缺氧诱导的心肌细胞焦亡的保护作用及对NLRP3/Caspase-1信号通路的影响。方法体外培养H9c2心肌细胞,采用CCK-8法检测不同浓度基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)干预下H9c2心肌细胞活性,筛选合适的SDF-1α浓度。将细胞随机分为3组:模型组心肌细胞采用缺血缺氧培养基培养,SDF-1α组心肌细胞采用缺血缺氧培养基+SDF-1α培养,含药血清组心肌细胞采用缺血缺氧培养基+SDF-1α+柴胡加龙骨牡蛎汤含药血清培养。TUNEL法检测3组H9c2心肌细胞凋亡情况;Western blot技术检测3组心肌细胞中焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达情况。结果在100 ng/mL SDF-1α浓度干预下,H9c2心肌细胞活性最高,细胞增殖率最高。SDF-1α组和含药血清组心肌细胞凋亡率及细胞中NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),且含药血清组均明显低于SDF-1α组(P均<0.05)。结论柴胡加龙骨牡蛎汤能抑制由缺血/缺氧诱导的H9c2心肌细胞焦亡,其机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1通路有关。

柴胡皂苷A对噪声诱发听力损失小鼠受损毛细胞及氧化应激的影响

【目的】探讨柴胡皂苷A对噪声诱发听力损失小鼠的干预作用及机制。【方法】将45只C57BL/6小鼠随机分为正常组、噪声暴露组、柴胡皂苷A组,每组15只。柴胡皂苷A组接受噪声暴露的同时给予柴胡皂苷A 10.0 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃;噪声暴露组接受噪声暴露,给予等体积生理盐水灌胃;正常组不接受噪声暴露,给予等体积生理盐水灌胃。每日1次灌胃,连续4周。给药结束后,检测小鼠听力脑干反应(ABR),采用Hoechst荧光染色法和扫描电镜分别对应观察耳蜗毛细胞数量、形态,采用8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)免疫荧光染色法观察耳蜗组织氧化应激损伤情况,Western Blot法检测耳蜗组织4-羟基壬烯醛(4-HNE)及3-硝基酪氨酸(3-NT)表达。【结果】(1)与正常组比较,噪声暴露组小鼠ABR域值明显增加(P<0.001);与噪声暴露组比较,柴胡皂苷A组小鼠ABR域值明显降低(P<0.01)。(2)正常组小鼠耳蜗毛细胞核完整、纤毛排列有序;噪声暴露组耳蜗毛细胞核部分丢失,纤毛出现倾斜、部分破裂;柴胡皂苷A组耳蜗毛细胞核完整性、纤毛形态较噪声暴露组得到明显改善。(3)与正常组比较,噪声暴露组小鼠耳蜗毛细胞中8-OHdG及耳蜗组织4-HNE、3-NT表达水平明显升高(P<0.001);与噪声暴露组比较,柴胡皂苷A组小鼠耳蜗毛细胞中8-OHdG及耳蜗组织4-HNE、3-NT表达水平明显降低(P<0.01)。【结论】柴胡皂苷A可有效干预小鼠噪声性听力损失,其机制与抑制氧化应激、保护耳蜗毛细胞有关。

柴胡加龙骨牡蛎汤对卒中后抑郁大鼠小胶质细胞极化及突触可塑性的影响

目的探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对脑卒中后抑郁(PSD)模型大鼠行为学和小胶质细胞极化及神经突触可塑性的影响。方法将50只SD大鼠分为假手术组,模型组,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组,大脑中动脉栓塞(MCAO)手术后进行慢性不可预知性温和应激(CUMS)4周,后进行柴胡加龙骨牡蛎汤治疗。治疗结束后进行Longa神经功能评分测定,通过糖水偏好测试和强迫游泳实验检测大鼠抑郁样表现,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定海马区炎症因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平,免疫荧光及蛋白免疫印迹法(Western blot)标记并定量大鼠海马区中CD16/CD32、CD206、突触后致密蛋白-95(PSD95)蛋白表达水平,透射电镜检测突触超微结构并可视化海马神经元的突触结构。结果与假手术组比较,模型组大鼠糖水偏好率降低(P<0.01),强迫游泳实验静止时间延长(P<0.01),海马区炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达水平及M1表型CD16/CD32蛋白荧光强度升高(P<0.01),PSD-95、CD206蛋白水平明显降低(P<0.05,P<0.01),CD16蛋白水平升高(P<0.01);与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组上述各指标均明显改善(P<0.05,P<0.01)。结论柴胡加龙骨牡蛎汤可以改善PSD模型大鼠的卒中后抑郁的相关行为学变化,其机制可能与调节小胶质细胞极化抗炎从而改善突触可塑性有关。

“Anti-UV Clone”柴胡细胞提取物对UV-B照射HaCaT细胞的影响

利用噻唑蓝比色分析法(MTT法)研究"Anti-UV Clone"柴胡细胞株不同溶剂提取物对UV-B照射HaCaT细胞活性的影响.实验结果表明,"Anti-UV Clone"柴胡细胞株乙醇和乙酸乙酯提取物均抑制HaCaT细胞的活性,而水提取物则能提高HaCaT细胞的活性.因此,"Anti-UV Clone"柴胡细胞株水提取物进一步被用于HaCaT细胞紫外线照射研究.与UV-B照射组相比,在照射前或照射后加入"Anti-UV Clone"柴胡细胞株水提取物均能不同程度提高细胞的活性(p<0.05);在照射前或照射后加入0.2 U/mL的"Anti-UV Clone"柴胡细胞株水提取物,细胞活性分别比照射组提高10.54%或14.95%.说明"Anti-UV Clone"柴胡细胞株水提取物中可能含有UV-B保护物质.

柴胡皂苷D对人肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的探讨柴胡皂苷D(SSD)对人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。方法将人肾小管上皮细胞HK-2细胞分为对照组、空白溶剂对照组、肾间质纤维化(RIF)组(5μg/L TGF-β1)、阳性对照组(5μg/L TGF-β1+10μmol/L贝那普利)、SSD组(5μg/L TGF-β1+10.00μmol/L SSD)、SSD+DKK-1组(5μg/L TGF-β1+10.00μmol/L SSD+100μg/L DKK-1)。光学显微镜观察各组细胞形态变化,免疫荧光检测细胞E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,Western blotting检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达,qRT-PCR检测细胞胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)相对表达量。结果对照组、空白溶剂对照组细胞有序、紧密排列,RIF组细胞呈现出长梭形且细胞排列分散;阳性对照组、SSD组和SSD+DKK-1组中长梭形细胞较RIF组减少且细胞分散程度降低。RIF组E-cadherin荧光斑低于对照组(P<0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达、CollagenⅠ基因相对表达量高于对照组(P<0.05)。阳性对照组、SSD组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于RIF组(P<0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、CollagenⅠ基因相对表达量低于RIF组(P<0.05)。SSD+DKK-1组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于SSD组(P<0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、CollagenⅠ基因相对表达量低于SSD组(P<0.05)。结论SSD可抑制人肾小管上皮细胞转分化,可能与抑制Wnt/β-catenin途径活化有关。

小柴胡汤联合四妙勇安汤对难治性全身型幼年特发性关节炎的影响

目的:观察小柴胡汤联合四妙勇安汤对难治性全身型幼年特发性关节炎(systemic juvenile idiopathic arthritis,SJIA)的影响。方法:将20例难治性SJIA患儿按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组10例。对照组给予甲氨蝶呤片,每次10~15 mg/m^(2),每周1次顿服;醋酸泼尼松片,每次1.5~2 mg/kg,晨起顿服;托珠单抗注射液,体质量≥30 kg者静脉滴注8 mg/kg,体质量<30 kg者静脉滴注12 mg/kg,首次给药后每2周给药1次。12周后根据个体化情况调整为每4周1次。治疗组在对照组治疗基础上给予小柴胡汤合四妙勇安汤(药物组成:柴胡、黄芩、金银花、蒲公英、连翘、玄参、薏苡仁、当归、萆薢、茯苓、白术、川牛膝、甘草片)加减治疗,以上中药配方均为颗粒剂,1 d 1剂,每剂分成2份,以50~70℃开水100 mL冲泡,早晚温服。每周连续服用5 d,休息2 d。两组均治疗24周。对比两组临床症状,白细胞(white blood cell,WBC)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、血清铁蛋白(serum ferritin,SF)、免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)G、IgA、IgM和免疫细胞水平,以及疾病活动度。结果:两组治疗4周、12周的临床症状发生例数均少于治疗前(P<0.05),治疗组治疗4周的各项例数均少于同期对照组(P<0.05),治疗组治疗12周的各项例数少于同期对照组但差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗12周和治疗24周时,实验室各项指标水平均较治疗前降低(P<0.01);且治疗组在治疗12周、24周时各指标改善程度均优于对照组(P<0.01)。治疗后,两组CD3+、CD8+水平较治疗前升高,CD4+、CD3-CD19+、CD3-CD16+56+、IgA、IgG和IgM水平较治疗前降低(P<0.01),且治疗组均低于对照组(P<0.05);两组ACR Ped 30改善率均为100%(10/10),治疗组ACR Ped 50改善率为100%(10/10)、ACR Ped 70改善率为90.00%(9/10),均高于对照组的60.0%(6/10)和40.0%(4/10)(P<0.05)。治疗期间发生上呼吸道感染者,治疗组1例,对照组3例,两组均对症治疗后痊愈,未发生严重不良事件。结论:小柴胡汤联合四妙勇安汤可改善难治性SJIA患儿全身症状,抑制机体炎症反应,调节免疫系统,控制疾病进展。

基于UPLC-Q-TOF/MS及CORT诱导的低分化PC12抑郁细胞模型的柴胡抗抑郁活性成分研究

目的分析鉴定柴胡水提物中的化学成分,探究柴胡抗抑郁活性成分。方法利用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)分析鉴定柴胡水提物中的化学成分。采用皮质酮(CORT)诱导低分化PC12抑郁细胞模型,给予柴胡单体成分预处理PC12细胞24 h,利用CCK-8试剂盒检测细胞活力;利用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞LDH释放率。结果共鉴定出53个化学成分,主要为Ⅰ型、Ⅱ型及Ⅲ型柴胡皂苷类成分。其中,柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F和6″-O-乙酰基柴胡皂苷A对柴胡代谢轮廓的贡献度最大,并可增强CORT诱导PC12细胞活力(P<0.05、P<0.01);柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F可降低CORT诱导PC12细胞LDH释放率(P<0.05、P<0.01)。结论柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F可能为柴胡抗抑郁的主要活性成分,为柴胡质量控制及药效物质基础研究提供依据。

JAK2/STAT3信号通路在柴胡皂苷D调控非小细胞肺癌H460细胞增殖、凋亡过程中的作用研究

目的观察柴胡皂苷D对非小细胞肺癌(NSCLC)H460细胞增殖、凋亡的影响,并探讨可能机制。方法取对数期H460细胞,随机分为对照组,实验A、B、C组,对照组常规培养,实验A组加入柴胡皂苷D(20μmol/L),实验B组加入colivelin[Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活子3(STAT3)通路激活剂](0.5μmol/L),实验C组加入柴胡皂苷D(20μmol/L)与colivelin(0.5μmol/L)。MTT法检测细胞增殖能力;双染法检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)mRNA表达量;Western blotting法检测细胞p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表达量。结果与对照组比较,实验A组24、48、72 h MTT实验吸光度值、细胞IL-10 mRNA表达量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3降低,细胞凋亡率、IL-2 mRNA表达量升高(P<0.05),实验B组24、48、72 h MTT实验吸光度值、细胞IL-10 mRNA表达量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3升高,细胞凋亡率、IL-2 mRNA表达量降低(P<0.05);与实验A组比较,实验C组24、48、72 h MTT实验吸光度值、细胞IL-10 mRNA表达量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3升高,细胞凋亡率、IL-2 mRNA表达量降低(P<0.05);与实验B组比较,联合组24、48、72 h MTT实验吸光度值、细胞IL-10 mRNA表达量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3降低,细胞凋亡率、IL-2 mRNA表达量升高(P<0.05)。结论柴胡皂苷D可抑制NSCLC细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

基于ROS/TXNIP/NLRP3通路的柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的观察柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞焦亡的影响,从ROS/TXNIP/NLRP3通路探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组和柴胡三参胶囊低、中、高剂量组,每组10只。柴胡三参胶囊低、中、高剂量组分别按0.15、0.3、0.6 g/kg灌胃,曲美他嗪组按5.4 mg/kg灌胃,假手术组和模型组予等体积生理盐水灌胃,28 d后造模。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型。HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构,ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β含量,DCFH-DA荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,免疫荧光染色检测心肌细胞焦亡,Western blot和RT-PCR分别检测心肌组织硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)蛋白和mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维结构不完整,细胞出现脂肪样变、间质水肿及出血,伴有少量炎性细胞浸润,胞质疏松,胞膜破裂严重、有大量孔隙形成;血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著增加;心肌组织ROS含量显著增加,细胞焦亡率显著升高,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠心肌纤维结构均有不同程度改善,心肌细胞脂肪样变减少,间质水肿及出血程度减轻,无明显炎性细胞浸润,胞质较致密,胞膜相对完整、孔隙减少;柴胡三参胶囊中、高剂量组和曲美他嗪组大鼠血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著减少,心肌组织ROS含量显著减少,细胞焦亡率显著降低,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论柴胡三参胶囊可有效减轻MIRI大鼠心肌细胞损伤,其机制可能与下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,抑制心肌细胞焦亡有关。

基于Nrf2/HO-1通路的柴胡皂苷A对A549细胞顺铂敏感性的影响

目的观察柴胡皂苷A与顺铂联用对非小细胞肺癌A549细胞的影响,并探讨其相关作用机制。方法将A549细胞分为对照组、顺铂组、柴胡皂苷A组及联用组(顺铂+柴胡皂苷A),分别加入相应药物培养24 h,CCK8法检测细胞存活率,克隆形成实验检测细胞增殖,C11-BODIPY荧光探针检测细胞脂质过氧化水平,FeRhonox-1荧光探针检测Fe^(2+)含量,谷胱甘肽(GSH)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒分别检测细胞GSH和上清液LDH含量,RT-PCR和Western blot检测细胞溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、转铁蛋白(Transferrin)、溶质载体家族40成员1(SLC40A1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,柴胡皂苷A组和联用组细胞存活率显著降低,克隆数目显著减少(P<0.05,P<0.01),细胞内脂质过氧化水平和Fe^(2+)含量显著升高(P<0.01),细胞内GSH含量显著减少(P<0.05),细胞上清液LDH含量显著增加(P<0.01),SLC7A11、GPX4、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),联用组细胞Transferrin mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),顺铂组细胞SLC40A1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与顺铂组比较,联用组细胞存活率显著降低,克隆数目显著减少(P<0.01),细胞内脂质过氧化水平和Fe^(2+)含量显著升高(P<0.05,P<0.01),细胞内GSH含量显著减少(P<0.01),细胞上清液LDH含量显著增加(P<0.01),SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),Transferrin mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论柴胡皂苷A与顺铂联用能诱导肺癌A549细胞铁死亡,其机制与提高细胞内脂质过氧化水平及Fe^(2+)浓度,降低GSH含量及SLC7A11、GPX4、SLC40A1表达,上调Transferrin表达,抑制Nrf2/HO-1通路有关。

柴胡皂苷d对SH-SY5Y细胞体外抑制作用及机制

目的探究柴胡皂苷(SS)d对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的体外抑制作用及分子机制。方法体外常规培养神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分别在浓度0、4、8、10μmol/L SSd的杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)中作用48 h,设为对照组及4、8、10μmol/L SSd组,荧光探针(DCFH-DA)法检测各组细胞中活性氧(ROS)的产生情况,试剂盒检测不同浓度SSd对SH-SY5Y细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量的影响;Western印迹法检测细胞内细胞周期蛋白(Cyclin)D1、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2及Bcl-2相关X基因(Bax)表达水平。结果与对照组相比,8、10μmol/L SSd组ROS水平、MDA含量显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),且有浓度依赖趋势;4、8、10μmol/L SSd组LDH活性、Bax蛋白表达明显升高,CyclinD1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论SSd能够通过提高细胞的氧化应激水平,抑制CyclinD1信号转导通路而促进SH-SY5Y细胞凋亡。

小柴胡汤加味治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期疗效及对患者细胞免疫状态的影响

目的:探究小柴胡汤加味对于慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)(少阳合并血瘀证)患者的治疗效果和对患者免疫细胞状态的影响。方法:选取120例AECOPD患者作为观察对象并分为两组(观察组和对照组),分组方法采用区组随机化法,每组60例。对照组采用常规西医方法进行治疗,观察组在其基础上采用小柴胡汤加味治疗,两组患者均治疗10 d。比较治疗后两组患者治疗有效率,对比治疗前和治疗1个月后两组患者中医症候积分、肺功能[用力第一秒呼气量(FEV1)、用力肺活量(FVC)、呼气峰值流速(PEF)]、免疫功能(CD4^(+)、CD8^(+)、NK细胞比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值)、生活质量[生活质量测定表(WHOQOL-BREF)]的变化。结果:在治疗1个月后,观察组治疗效果明显优于对照组(P<0.05),两组治疗总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05);两组患者在治疗1个月后中医症候积分、WHOQOL-BREF、FEV1、FVC、PEF水平均明显升高(均P<0.05),且观察组显著高于对照组(均P<0.05);治疗后两组患者CD4^(+)、NK比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值均明显升高,且观察组显著高于对照组(均P<0.05),CD8^(+)比例明显降低,观察组CD8^(+)比例显著低于对照组(均P<0.05)。结论:小柴胡汤加味能显著改善AECOPD患者的肺功能和免疫功能,提高患者生活质量,有利于其预后。

小柴胡汤加减方治疗传染性单核细胞增多症患儿的临床观察

目的 观察小柴胡汤加减方治疗传染性单核细胞增多症(IM)患儿的临床疗效。方法 将60例IM患儿按照随机数字表法分为2组,2组均给予对症支持治疗,并根据细菌感染指征酌情予抗生素治疗,西药组30例予注射用更昔洛韦治疗10~14天,中药组30例在西药组治疗的基础上给予小柴胡汤加减方治疗14天。比较2组治疗前后T细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)、CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)值变化,天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、颈淋巴结大小、中医证候积分,记录临床症状、体征及异常淋巴细胞恢复时间,并统计2组疗效。结果 中药组总有效率96.7%(29/30),西药组总有效率73.3%(22/30),中药组临床疗效优于西药组(P<0.05)。2组治疗后CD8^(+)、CD3^(+)均较本组治疗前降低(P<0.05),且中药组均低于西药组(P<0.05);2组治疗后CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均较本组治疗前升高(P<0.05),且中药组均高于西药组(P<0.05)。2组治疗后ALT、AST均较本组治疗前降低(P<0.05),且中药组治疗后均低于西药组(P<0.05)。2组治疗后颈部淋巴结直径均较本组治疗前降低(P<0.05),且中药组治疗后低于西药组(P<0.05)。2组治疗后中医证候积分均较本组治疗前降低(P<0.05),且中药组治疗后低于西药组(P<0.05)。中药组完全热退时间、乏力、咽痛消失时间、肝脾肿大恢复正常时间、异常淋巴细胞恢复正常时间均短于西药组(P<0.05)。结论 小柴胡汤加减方可缩短IM患儿病程,改善免疫功能,提高疗效。