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重组C型肉毒梭菌毒素的表达与免疫保护性分析
被引量:
1
1
作者
杜吉革
姚文生
+7 位作者
刘莹
薛麒
李倩琳
朱真
李启红
印春生
陈小云
李旭妮
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第4期1381-1387,共7页
本研究旨在获得重组C型肉毒梭菌毒素蛋白,并评价其免疫保护性。将麦芽糖蛋白(MBP)和C型肉毒梭菌毒素重链C末端(CHC)的编码基因序列进行优化和串联,获得基因片段GMBPCHC。将GMBPCHC克隆至pET28a-(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,...
本研究旨在获得重组C型肉毒梭菌毒素蛋白,并评价其免疫保护性。将麦芽糖蛋白(MBP)和C型肉毒梭菌毒素重链C末端(CHC)的编码基因序列进行优化和串联,获得基因片段GMBPCHC。将GMBPCHC克隆至pET28a-(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,分别在15和37℃两种温度条件下诱导表达。利用Ni-IDA亲和层析方法对可溶性表达的目的蛋白进行纯化,从而获得重组蛋白rMBPCHC。将rMBPCHC与Montanide ISA 201佐剂混合制备成疫苗,免疫4只家兔,剂量为100μg/只。根据《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测一免后21 d及二免后14 d家兔血清的中和抗体效价。同时,在二免后14 d对家兔进行攻毒。结果表明,rMBPCHC在37℃的诱导温度下,主要以包涵体的形式表达;在15℃的诱导温度下,可溶性表达的比例可达50%。一次免疫后,免疫组4只家兔血清对C型肉毒梭菌天然毒素(简称天然毒素)的中和效价均可达到1(0.1 mL血清中和1个小鼠最小致死量(MLD)的天然毒素)。二免后,家兔血清的中和抗体效价可达到4~8。用10个家兔MLD的天然毒素攻毒后,免疫组家兔得到了100%(4/4)的保护,而用1个家兔MLD的天然毒素攻毒后,对照组家兔100%(2/2)死亡。以上结果说明,rMBPCHC具有良好的免疫原性,从而为C型肉毒梭菌病基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。
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关键词
c
型肉毒梭菌毒素
c
末端
可溶表达
免疫保护
下载PDF
职称材料
C型肉毒梭菌的鉴定及其神经毒素基因全序列测定
被引量:
5
2
作者
高建军
张超
+1 位作者
毛晓燕
曹馨匀
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2011年第12期1425-1429,共5页
目的对3株C型肉毒梭菌进行鉴定,并选择其中1株进行基因全序列测定。方法对3株C型肉毒梭菌(C6514、C314/91和CAXA)进行生化鉴定、检出试验、确证试验、毒力测定、毒素定型试验,并对C6514株进行神经毒素基因全序列测序。结果 3株菌均能发...
目的对3株C型肉毒梭菌进行鉴定,并选择其中1株进行基因全序列测定。方法对3株C型肉毒梭菌(C6514、C314/91和CAXA)进行生化鉴定、检出试验、确证试验、毒力测定、毒素定型试验,并对C6514株进行神经毒素基因全序列测序。结果 3株菌均能发酵葡萄糖,不能发酵乳糖,不能发酵牛奶和形成吲哚;3株菌均为产毒株;C6514株毒力较高,为2×104 LD50/ml;加C型或混合型肉毒诊断血清或加明胶磷酸盐缓冲液(GPB)煮沸均可中和或灭活C型肉毒梭菌产生的毒素;BoNT/C测得的序列拼接后与GenBank中序列号为D90210的基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为99%。结论 3株肉毒梭菌均为典型的C型肉毒梭菌。
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关键词
肉毒梭菌
c
型
生物学鉴定
神经毒素类
序列分析
原文传递
题名
重组C型肉毒梭菌毒素的表达与免疫保护性分析
被引量:
1
1
作者
杜吉革
姚文生
刘莹
薛麒
李倩琳
朱真
李启红
印春生
陈小云
李旭妮
机构
中国兽医药品监察所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第4期1381-1387,共7页
基金
科技部“十三五”“牛羊重要疾病免疫防控新技术研究”重点专项子课题(2017WFD0500903)。
文摘
本研究旨在获得重组C型肉毒梭菌毒素蛋白,并评价其免疫保护性。将麦芽糖蛋白(MBP)和C型肉毒梭菌毒素重链C末端(CHC)的编码基因序列进行优化和串联,获得基因片段GMBPCHC。将GMBPCHC克隆至pET28a-(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,分别在15和37℃两种温度条件下诱导表达。利用Ni-IDA亲和层析方法对可溶性表达的目的蛋白进行纯化,从而获得重组蛋白rMBPCHC。将rMBPCHC与Montanide ISA 201佐剂混合制备成疫苗,免疫4只家兔,剂量为100μg/只。根据《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测一免后21 d及二免后14 d家兔血清的中和抗体效价。同时,在二免后14 d对家兔进行攻毒。结果表明,rMBPCHC在37℃的诱导温度下,主要以包涵体的形式表达;在15℃的诱导温度下,可溶性表达的比例可达50%。一次免疫后,免疫组4只家兔血清对C型肉毒梭菌天然毒素(简称天然毒素)的中和效价均可达到1(0.1 mL血清中和1个小鼠最小致死量(MLD)的天然毒素)。二免后,家兔血清的中和抗体效价可达到4~8。用10个家兔MLD的天然毒素攻毒后,免疫组家兔得到了100%(4/4)的保护,而用1个家兔MLD的天然毒素攻毒后,对照组家兔100%(2/2)死亡。以上结果说明,rMBPCHC具有良好的免疫原性,从而为C型肉毒梭菌病基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。
关键词
c
型肉毒梭菌毒素
c
末端
可溶表达
免疫保护
Keywords
clostridium botulinum neurotoxin type c
c
-terminal
soluble expression
immunogeni
c
ity
分类号
S852.616.3 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
C型肉毒梭菌的鉴定及其神经毒素基因全序列测定
被引量:
5
2
作者
高建军
张超
毛晓燕
曹馨匀
机构
兰州生物制品研究所免疫室
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2011年第12期1425-1429,共5页
文摘
目的对3株C型肉毒梭菌进行鉴定,并选择其中1株进行基因全序列测定。方法对3株C型肉毒梭菌(C6514、C314/91和CAXA)进行生化鉴定、检出试验、确证试验、毒力测定、毒素定型试验,并对C6514株进行神经毒素基因全序列测序。结果 3株菌均能发酵葡萄糖,不能发酵乳糖,不能发酵牛奶和形成吲哚;3株菌均为产毒株;C6514株毒力较高,为2×104 LD50/ml;加C型或混合型肉毒诊断血清或加明胶磷酸盐缓冲液(GPB)煮沸均可中和或灭活C型肉毒梭菌产生的毒素;BoNT/C测得的序列拼接后与GenBank中序列号为D90210的基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为99%。结论 3株肉毒梭菌均为典型的C型肉毒梭菌。
关键词
肉毒梭菌
c
型
生物学鉴定
神经毒素类
序列分析
Keywords
clostridium
botulinum
type
c
Biologi
c
al identifi
c
ation
neurotoxin
s
Sequen
c
ing
分类号
R378.83 [医药卫生—病原生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组C型肉毒梭菌毒素的表达与免疫保护性分析
杜吉革
姚文生
刘莹
薛麒
李倩琳
朱真
李启红
印春生
陈小云
李旭妮
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021
1
下载PDF
职称材料
2
C型肉毒梭菌的鉴定及其神经毒素基因全序列测定
高建军
张超
毛晓燕
曹馨匀
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2011
5
原文传递
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