花生Clp蛋白酶基因(AhClpP)的克隆与序列分析

Clp蛋白酶通过蛋白质水解作用来清除细胞内由逆境引起的异常和具有潜在毒性的蛋白或多肽,从而保证细胞正常的生理功能。从优质大花生鲁花14种子不同发育时期混合cDNA文库中发现一条序列,全长为1 212 bp,3′端含有polyA尾,通过blastx搜索得知其为Clp蛋白酶基因。该序列与GenBank中EZ736390.1的序列相似性达到99%。以该花生cDNA序列为模板设计引物,以花生幼嫩种子cDNA为模板克隆得到花生Clp蛋白酶基因。序列分析表明,AhClpP基因的开放阅读框长度为843 bp,编码280个氨基酸,预测其分子量为30.9 kDa,等电点为9.07,编码的蛋白包含S14-ClpP-2保守结构域,无信号肽,定位于线粒体。通过与其他植物Clp蛋白酶的氨基酸序列比对,发现与拟南芥、蓖麻的Clp蛋白酶同源性较高。花生AhClpP基因的克隆为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础。

Clp蛋白酶研究进展

Clp蛋白酶在生物蛋白质代谢调控中发挥重要的作用,它通过调节代谢途径中限速酶的水平来控制代谢的过程,同时可以及时清除细胞内一些具有潜在毒性的不可逆损伤蛋白质,从而保证细胞正常的生理功能。文章对Clp蛋白酶的结构,作用机制以及生物学功能等方面的研究进展进行了综述。

小麦Clp蛋白酶基因(TaClpP)的克隆与序列分析

Clp蛋白酶(ClpP)普遍存在于各种生物体内,在蛋白质代谢调控过程中发挥着极为重要的作用。本研究利用同源克隆和RACE方法从小麦叶片中获得了TaClpP基因(GenBank No.KJ541961)的全长cDNA序列。序列分析表明,该基因含有897 bp的完整阅读框,编码蛋白含有298个氨基酸,预测相对分子量为32.6 kD,等电点为9.79。该蛋白含有一个保守的S14-ClpP-2结构域,无信号肽,定位于叶绿体。与其他植物Clp蛋白酶的氨基酸序列比对发现,TaClpP与节节麦、乌拉尔图小麦的Clp蛋白酶相似性较高。另外,以小麦基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得了TaClpP的基因组序列,长度为3 256 bp,包含9个外显子、8个内含子。

结核分枝杆菌Clp蛋白酶复合体研究进展

Clp蛋白酶复合体在结核分枝杆菌蛋白质的代谢调控过程中发挥着极其重要的作用,维持结核分枝杆菌感染宿主后的正常生存和繁殖的功能。对Clp蛋白酶复合体的组成、作用机制及其生物学功能等方面的最新研究进展进行综述。

烟草蛋白酶NtClpR2基因的克隆、分析和功能的初步探究

在植物体内Clp蛋白酶可水解叶绿体内错误折叠和非正常状态的蛋白或多肽维持细胞内环境的稳态。本研究克隆了烟草ClpR2蛋白酶基因,并对其基因和编码的蛋白序列进行了分析。结果表明:该基因编码序列全长890 bp,由9个外显子剪接组成,编码由289个氨基酸残基构成的亲水性碱性蛋白结合而成,理论等电点为9.31。该基因的启动子区域含有多种顺势作用元件,显示其表达模式和功能的复杂性。该基因所编码的蛋白二级结构包括α螺旋、β转角、无规卷曲和延伸链,其亚细胞定位于叶绿体,但是不含明显的转运肽。初步功能分析表明,过表达NtClpR2的烟草植株叶绿素含量低于野生型,整个植株也明显变得矮小。上述发现表明NtClpR2在叶绿素合成中起到负向调节作用,为进一步研究其功能提供了帮助。

脾气虚证模型大鼠股四头肌线粒体未折叠蛋白反应及CHOP蛋白表达的研究

目的:通过观察脾气虚证模型大鼠股四头肌线粒体应激反应元件(CHOP)及线粒体未折叠蛋白反应(UPRmt)的变化,从UPRmt方面研究"脾气虚四肢不用"的机制。方法:运用饮食失节+劳倦法复制脾气虚证大鼠模型,随机分为对照组和脾气虚模型组(模型组),造模成功后取股四头肌,比色法检测三磷酸腺苷(ATP)、过氧化氢(H2O2)水平及呼吸链复合体(CⅠ~CⅣ)酶活性;免疫印迹(Western blot)法检测CⅠ~CⅣ、热休克蛋白70/60(HSP70/60)、Lon蛋白酶(LonP)/Clp蛋白酶(ClpP)及CHOP蛋白表达。结果:比色结果显示,与对照组比较,模型组股四头肌ATP含量下降(P<0.05)、H2O2含量升高(P<0.05);CⅡ、CⅣ酶活性下降(P<0.05,P<0.01)。Westernblot结果显示,与对照组比较,模型组股四头肌CⅠ蛋白表达升高(P<0.01),CⅡ蛋白表达下降(P<0.01),HSP60蛋白表达下降(P<0.01),ClpP蛋白表达升高(P<0.01);CHOP蛋白表达下降(P<0.05)。结论:"脾气虚四肢不用"可能与CHOP抑制所致UPRmt紊乱有关。