牛种布鲁氏菌ClpS基因突变株的构建及其对毒力的影响

试验旨在探究ClpS基因在布鲁氏菌中的作用,分析比较ClpS基因突变对布鲁氏菌毒力的影响。利用同源重组技术,构建布鲁氏菌ClpS基因突变株,通过检测细菌生长曲线、细菌LPS合成能力及其在巨噬细胞内的存活能力和小鼠模型中的毒力,比较亲本株2308和突变株ΔClpS两者之间的差异。结果显示,在相同的培养条件下,亲本株2308和突变株ΔClpS的细菌浓度无明显差异,且两者提取的LPS银染结果基本一致,表明ClpS基因突变不影响布鲁氏菌生长速度,不影响细菌LPS合成;在细胞感染模型中,突变株ΔClpS在感染后72 h的胞内存活能力极显著低于亲本株2308(P<0.01);小鼠感染试验显示,在感染后1周,亲本株2308感染组和突变株ΔClpS感染组小鼠脾脏重量及细菌含量无显著差异,但在感染后4周,突变株ΔClpS感染组的小鼠脾脏细菌含量为103.93 CFU/g脾脏,显著低于亲本株2308(106.68 CFU/g脾脏,P<0.01),且突变株ΔClpS感染组的小鼠脾脏肿胀程度极显著低于亲本株2308(P<0.01)。综上所述,布鲁氏菌ClpS基因突变不影响细菌生长速度及细菌LPS合成能力,但ClpS基因突变可降低布鲁氏菌在小鼠脾脏内的定殖能力。

枯草芽孢杆菌发酵产物CLPs抗肿瘤活性研究

由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵并分离纯化得到环脂肽(CLPs),研究其对肿瘤细胞MCF-7和正常细胞HELF的细胞毒作用,探索CLPs对LDH释放的影响,并用流式细胞仪检测CLPs对MCF-7细胞凋亡的影响。采用MTT法检测CLPs对肿瘤细胞和正常细胞的细胞毒性,LDH试剂盒检测对LDH释放的影响,AnnexinV/PI染色观察CLPs对肿瘤细胞凋亡的影响。CLPs对肿瘤细胞MCF-7有细胞毒性,CLPs作用24 h时抑制率可达88%,CLPs对正常HELF细胞无细胞毒性;CLPs导致MCF-7细胞LDH释放,CLPs质量浓度100μg/mL,作用24 h时,LDH释放率由5.10%增加到31.67%,CLPs对HELF细胞LDH没有影响;CLPs能导致MCF-7细胞发生凋亡。CLPs能选择性作用于MCF-7细胞,增加MCF-7细胞LDH释放,并导致MCF-7细胞发生凋亡。

定量蛋白质组学分析ClpS在分枝杆菌耐药中的功能

ClpS是原核生物蛋白质降解复合物ClpAPS的重要组成成分,它可以识别某些特定的氨基酸序列并将其呈递给ClpAP以促进其降解。同时,ClpS也抑制了其他蛋白质底物的降解。本研究通过在耻垢分枝杆菌中过度表达ClpS,发现所构建的重组菌株提高了利福平的抗药性。应用定量蛋白质组学技术,我们系统地分析了过度表达ClpS对于细菌蛋白质组的影响,并推测出细菌抗利福平的分子机制:ClpS促进稳态的调整、促进药物沉降以及加速药物代谢。本研究首次通过改变细菌降解复合物的相关蛋白的表达增加细菌的抗药性,并证明蛋白质组学技术是细菌的抗药性研究以及耐药株筛选的重要工具。

瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响

目的探究瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响。方法选用80只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,将大鼠随机分为4组,假手术组20只;其余60只按照盲肠结扎穿刺法(CLP)构建脓毒症小鼠模型,腹腔注射不同剂量瑞香素,分为无瑞香素模型组(0 mg/kg)、低剂量组(2.5 mg/kg)、高剂量组(5 mg/kg),每组20只;模型组及假手术组腹腔注射等量0.1%DMSO。观察CLP建模后的各组大鼠存活率。收集肺、肾、肝和脾组织进行病理组织学分析。ELISA检测大鼠血清炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β),流式细胞术检测外周血中的T淋巴细胞亚群,Western blotting检测STING/TBK1/IRF3信号通路蛋白表达变化。结果与假手术组相比,模型组大鼠生存率降低(P<0.05),各个脏器组织损伤明显,血清炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平上升(P<0.05),外周血CD4^(+)比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值均降低(P<0.05),CD8^(+)比例、Th1/Th2比值均升高(P<0.05),STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3蛋白表达均下调(P<0.05)。与模型组相比,瑞香素高剂量组提高了大鼠生存率(P<0.05),各脏器组织损伤明显减轻,血清炎症因子水平降低(P<0.05),外周血CD4^(+)比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值升高(P<0.05),CD8^(+)比例、Th1/Th2比值降低(P<0.05),STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3蛋白表达升高(P<0.05)。结论瑞香素可通过调节STING/TBK1/IRF3信号通路,改善脓毒症大鼠免疫炎症反应。

优化围术期管理制作盲肠穿孔法小鼠脓毒症模型

目的通过模拟贴近临床围术期的护理技巧、管理经验和注意事项,建立标准化和规范化的小鼠盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症动物模型术后管理模式,评价其对于模型建立的影响。方法将BALB/C雄性小鼠随机分为对照组和实验组,每组15只,制作CLP模型(盲肠结扎长度1 cm,12 G针头贯穿2孔)。术前2组小鼠给予常规喂养,实验组小鼠术后采用保温、补液、伤口护理等方式处理;对照组小鼠术后不作处理。记录2组小鼠术后7 d的体质量、采食量、动物状态、存活率。结果实验组小鼠建模后在体质量恢复、采食量和动物状态方面均明显优于对照组(P<0.05);同时实验组小鼠术后7 d存活率为80.0%,显著高于对照组的53.3%(P<0.05)。结论将围术期管理经验用于小鼠脓毒症模型的建立,有助于提升动物实验的质量和效率,可避免因术后意外事件导致模型动物的非计划死亡,干扰对结果的判断,同时也更为贴近临床脓毒症患者的治疗管理措施,为标准化脓毒症动物模型的建立与应用提供借鉴。

花生Clp蛋白酶基因(AhClpP)的克隆与序列分析

Clp蛋白酶通过蛋白质水解作用来清除细胞内由逆境引起的异常和具有潜在毒性的蛋白或多肽,从而保证细胞正常的生理功能。从优质大花生鲁花14种子不同发育时期混合cDNA文库中发现一条序列,全长为1 212 bp,3′端含有polyA尾,通过blastx搜索得知其为Clp蛋白酶基因。该序列与GenBank中EZ736390.1的序列相似性达到99%。以该花生cDNA序列为模板设计引物,以花生幼嫩种子cDNA为模板克隆得到花生Clp蛋白酶基因。序列分析表明,AhClpP基因的开放阅读框长度为843 bp,编码280个氨基酸,预测其分子量为30.9 kDa,等电点为9.07,编码的蛋白包含S14-ClpP-2保守结构域,无信号肽,定位于线粒体。通过与其他植物Clp蛋白酶的氨基酸序列比对,发现与拟南芥、蓖麻的Clp蛋白酶同源性较高。花生AhClpP基因的克隆为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础。

欧盟CLP法规对我国输欧化学品贸易影响

分析了我国输欧化学品贸易情况,就欧盟(EC)1272/2008"关于物质和混合物分类、标签和包装法规"(CLP法规)的分类要求、标签要求、包装要求、通报要求及引发的REACH义务对我国化学品输欧贸易产生的影响进行了论述,并从政府层面和企业层面提出了对策建议。

欧盟化学品分类、标签及包装(CLP)新法规剖析

文章介绍了欧盟(EC)1272/2008"关于物质和昆合物分类、标签和包装法规"(CLP)的形成背景、适用范围、内容、实施时间、适用对象和义务及其与联合国GHS制度和欧盟原有化学品分类、标签与包装体系之间的区别,并就该法规对我国的影响进行了论述。

体感交互技术支持的“CLP模式”研究——以“运动障碍评估与训练”课程为例

为解决目前课程教学中面临的师资缺乏、理论课及实验课教学资源匮乏、实践课开展困难等问题,文章从虚拟现实技术、体感交互技术与教育康复教学的关系阐述出发,构建了体感交互技术支持的"CLP模式"。该模式由C—在线课堂、L—虚拟实验室、P—智慧实践基地三个核心部件组成,具有多重特色。最后,文章以"运动障碍评估与训练"课程为例,对"CLP模式"在课程中的2个应用案例进行了解析。文章的研究表明,体感交互技术应用于运动障碍评估和训练已逐渐成为一种发展趋势。

故障定位新算法CLP的研究与仿真

针对输电线路故障定位因线路参数变化对定位准确度的影响,提出了能够对线路的参数和长度进行动态修正(CLP)的新算法,并可利用修正后的参数来求解两端的不同步相角差。通过大量仿真及与其他算法比较,该算法可明显提高故障定位的准确度。

硫化氢在脓毒症大鼠肺损伤中的作用

目的探讨硫化氢（H2S）在脓毒症大鼠肺损伤中的作用。方法雄性SD大鼠60只，随机分为4组：对照组（Ⅰ组）15只，脓毒症组（Ⅱ组）15只，脓毒症＋PAG（H：S代谢酶CSE抑制剂）组（Ⅲ组）15只，脓毒症＋NariS（H：S供体）预处理组（Ⅳ组）15只。采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症大鼠模型，观察各组动物的行为学特征，测定肺组织H2S浓度、肺组织CSEmRNA的表达、肺组织湿干重比（W／D）、肺组织MPO水平、肺组织TNF-α和IL-1β的表达，观察肺组织形态学改变。结果CLP模型组动物出现呼吸加快，与I组比较，Ⅱ组动物肺组织H2S、W／D、TNF—α、IL-1β水平明显升高（P〈0．01），MPO活性明显增加（P〈0．01），肺组织CSEmRNA的表达明显升高（P〈0．01）；与Ⅱ组比较，Ⅲ组动物呼吸频率接近，肺组织H2s、W／D、TNF-α、IL-1β水平明显降低（P〈0．01），MPO活性明显减弱（P〈0．01），肺组织CSEmRNA的表达明显降低（P〈0．01）；与Ⅱ组比较，Ⅳ组动物呼吸频率明显加快，少数出现呼吸衰竭，肺组织W／D、TNF-α、IL-113水平明显升高（P〈0．01），MPO活性明显增强（P〈0．01），肺组织CSEmRNA的表达有所降低，但差异无统计学意义（P〉0．05）；四组肺组织光镜下损伤由轻到重依次为：Ⅰ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅳ。结论给予内源性H2S抑制剂可以使脓毒症大鼠肺组织W／D、TNF—α、IL-1β、MPO水平明显降低，减轻肺组织炎症及水肿损伤，给予外源性H2S可以加重肺炎症损伤。

Clp蛋白酶研究进展

Clp蛋白酶在生物蛋白质代谢调控中发挥重要的作用,它通过调节代谢途径中限速酶的水平来控制代谢的过程,同时可以及时清除细胞内一些具有潜在毒性的不可逆损伤蛋白质,从而保证细胞正常的生理功能。文章对Clp蛋白酶的结构,作用机制以及生物学功能等方面的研究进展进行了综述。

枯草芽孢杆菌3610 ClpQY基因缺失突变株的构建及其功能

为了验证枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中Clp QY基因的功能,以枯草芽孢杆菌基因组为模板,PCR扩增出Clp QY基因上下游同源序列840 bp和983 bp的片段,并与自杀质粒p MAD载体连接,构建重组质粒p MADup-down,运用化学转化法通过枯草芽孢杆菌菌株PY79,采用LOOP IN和LOOP OUT的方法,获得不带抗性,且Clp QY完全敲除的枯草芽孢杆菌3610菌株。产孢试验表明,该基因在芽孢生成中为非必需基因,而在生物膜的形成过程中具有调节作用。高温生长试验显示,该基因对细胞逆境条件下的生长存在一定的调控功能。

胰岛素目标血糖管理对脓毒症大鼠心肌损伤的影响

目的 探讨胰岛素不同目标血糖管理对脓毒症心肌损伤的保护作用及其可能机制.方法 SD大鼠40只随机分为五组（n=8）：假手术组（sham组）、CLP组、控制A组、控制B组和控制C组.盲肠结扎穿孔（CLP）术后12 h处死,双抗夹心ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I（cTnI）的含量;光镜及电镜观察左室心肌组织形态学变化并行组织病理积分及线粒体损伤评分分析.结果.CLP组cTnI浓度、病理积分及线粒体损伤评分均明显高于sham组及各控制组（P均〈0.05）;控制A组较B、C组明显降低（P均〈0.05）;B组低于C组,但P〉0.05.CLP组线粒体损伤评分与cTnI水平及病理积分均有显著正相关（P均〈0.01）.光镜及电镜可见各控制组较CLP组心肌形态及细胞超微结构改变均明显减轻.结论.不同水平的胰岛素强化血糖控制都可改善脓毒症心肌损伤,其机制可能为抑制心肌线粒体损伤而实现.与6.1～8.3 mmol/L及8.3～10.0 mmol/L相比,血糖控制在4.4～6.1 mmol/L对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用最为明显.

欧盟化学品分类、标签制度的诠释与研究

欧盟CLP法规是全球第一部基于联合国GHS制度的化学品分类、标签和包装法规,该法规已于2009年1月20日正式生效,并将逐渐取代欧盟指令67/548/EEC和1999/45/EC。CLP法规与REACH法规相辅相成,共同构成了欧盟完整的化学品安全管理法规体系。从3方面对CLP法规进行了研究与论述:CLP法规介绍、CLP法规与GHS制度的对比研究、CLP法规与REACH法规的关系研究。

RTL数据通路模拟矢量自动生成方法研究与实现

针对已有的RTL数据通路模拟矢量自动生成方法的不足 ,提出一种利用约束逻辑编辑 (CLP)自动生成数据通路模拟矢量的新方法 该方法首先对给定的VerilogRTL描述采用程序切片进行设计化简 ,然后对化简后的结果基于位向量算术原理生成CLP约束 ,并利用CLP求解器GProlog进行约束求解 ,最终生成满足输出要求的模拟矢量 该方法约束求解速度快 ,生成的约束是统一的 ,得到的模拟矢量较完备 ,能满足模拟验证的要求 实验结果表明 。

欧盟化学品分类、标签及包装法规(CLP)标签要求解读

欧盟《物质和混合物分类、标签和包装法规》(CLP法规)是欧盟继《化学品注册、评估、授权和限制法规》(REACH法规)后针对化学品监管出台的又一重要法规,对物质和混合物的分类、标签和包装的准则与责任提出了明确规定。本文从CLP法规的实施时间,CLP标签的各项要素、尺寸布局及其与运输标签关系等方面,就CLP法规对化学品标签的要求进行了解读,并就该法规对我国的影响进行了论述。

花生Clp家族成员的筛选、聚类和盐胁迫响应分析

Clp蛋白酶是一种ATP依赖的丝氨酸型蛋白酶,广泛存在于原核和真核生物中,在生物抗逆胁迫中发挥重要作用。为分析花生中Clp基因的情况,我们构建了花生叶片转录组数据库,通过生物信息学手段鉴定出28个Clp基因,分别位于花生A组野生种的9条染色体上;聚类分析表明,花生的28个Clp基因分别聚到已报道的Clp B、C、D、X、P、R和S 7个亚类中。利用花生耐盐突变体(S2)和对照(S4)构建了盐胁迫处理前后各时间段的表达谱数据,进行Clp基因盐胁迫表达分析,结果表明16个Clp基因在S2和(或)S4中受盐胁迫诱导表达。该研究为花生Clp基因的功能研究与利用奠定基础。

IL-27在小鼠CLP-急性肺损伤模型中的作用

目的研究细胞因子IL-27在急性肺损伤中发挥的作用和相关机制。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立小鼠急性肺损伤模型。ELISA和荧光实时定量PCR法检测CLP-急性肺损伤小鼠模型的肺组织、支气管灌洗液、外周血单个核细胞及血清中IL-27及其亚单位的表达。同时,小鼠行CLP术前吸入给药IL-27中和抗体,经组织学检测小鼠肺组织炎症水平的改变,并检测支气管灌洗液中IL-6、CXCL10、IFN-γ的水平和小鼠存活率。结果 CLP-小鼠的肺组织和外周单个核细胞中IL-27的2个亚单位(EBI3和p28)均增加,支气管灌洗液和血清中的IL-27水平也较对照组显著增加(P<0.01)。抗IL-27多克隆抗体的使用降低了CLP-急性肺损伤小鼠肺组织的炎症水平,支气管灌洗液中IL-6、CXCL10、IFN-γ水平下降(P<0.05),同时提高了小鼠存活率。结论IL-27在急性肺损伤中发挥重要作用,抑制IL-27的表达可能成为预防和治疗急性肺损伤的新途径。

客户全生命周期利润预测方法的研究

客户全生命周期利润 (CLP)是判别客户对公司价值大小的标准 ,但如何预测CLP是一个至今没有很好解决的问题。提出了依据客户历史利润与以往客户利润曲线案例的拟合情况来预测客户未来利润模式 ,进而预测CLP的拟合法。该方法基于交易数据进行预测 ,克服了现有客户事件法预测结果过多依赖于预测者主观判断的缺陷 ;可评估每个客户对公司的价值并据此分配公司资源 ,克服了现有Dwyer法只能按组预测而不能在客户级上预测CLP的缺陷。本文详细讨论了拟合法预测CLP的原理和数学模式。