菊花TAS3 tasi-RNA靶基因CmARF4的鉴定及表达分析

[目的]本文旨在鉴定菊花TAS3 tasi-RNA的靶基因生长素响应因子CmARF4,并探讨该基因的表达特性。[方法]以菊花品种‘神马’为材料,利用高保真PCR方法克隆CmARF4基因全长,采用5′RLM-RACE技术验证CmARF4基因是否含有TAS3剪切位点,通过qPCR分析CmARF4基因在不同组织器官中和生长素处理及盐处理条件下的表达水平。[结果]CmARF4为TAS3 tasi-RNA的靶基因,其剪切位点位于TAS35′端的第10与第11位碱基之间。CmARF4基因包含开放阅读框(ORF)2322 bp,编码773个氨基酸,预测其蛋白质相对分子质量为85.7×103,理论pI为6.44,且与刺菜蓟的同源性最高(78.63%)。在营养生长期,芽中CmARF4的表达量最高,茎中次之;在盛花期舌状花中CmARF4的表达量最高,其次是茎。亚细胞定位与转录激活活性分析结果显示:CmARF4蛋白定位在细胞核上,且无转录激活活性。CmARF4响应生长素处理,当萘乙酸(NAA)浓度为5μmol·L^-1时,CmARF4基因的相对表达量在12 h时明显升高;当NAA浓度为15μmol·L^-1时,CmARF4的相对表达量呈上升趋势。200 mmol·L^-1 NaCl处理下,CmARF4的相对表达量在盐胁迫1 h时升至最高,之后逐渐下降。[结论]CmARF4基因为TAS3 tasi-RNA的靶基因,CmARF4的转录水平受生长素及盐处理的诱导。