某国产试剂品牌在西门子Atellica-CH930全自动生化分析仪检测全程C反应蛋白的性能验证

目的:基于WS/T408-2012《临床化学设备线性评价指南》、WS/T492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》以及CNAS-GL037《临床化学定量检验程序性能验证指南》等文件评价某国产品牌在西门子全自动生化分析仪检测全程C反应蛋白的性能,为规范性能验证的实施及全程C反应蛋白的临床推广提供参考。方法:依据中国合格评定国家认可委员会以及国家卫生健康委员会临检中心推荐的方法对乳胶免疫比浊法全程C反应蛋白的正确度、精密度、线性区间、可报告范围、参考区间进行验证,试验结果在厂商规定的范围内或是满足本室的执行标准为性能验证通过。结果:通过选取2种浓度厂商提供的标准溯源物质进行偏移评估,检测结果均符合规定,正确度验证通过。同时验证重复性和精密度,2种浓度的批内标准差和实验室内标准差均小于厂商规定的范围,精密度验证通过。多项式回归最优拟合曲线为一阶线性微分方程y=1.088x–2.884,R2=0.9989,线性区间验证通过。临床可报告范围最高稀释倍数为16倍,高限为340mg/L。20名健康个体的检测结果均在厂商制定的参考范围内。结论:该品牌全程C反应蛋白检测试剂与西门子Atellica-CH930全自动生化分析仪联用性能稳定,可用于临床样品的检测。

金黄色葡萄球菌Cna基因的生物信息学分析及原核表达

[目的]对金黄色葡萄球菌的Cna基因进行生物信息学分析,并进行克隆和原核表达,为金黄色葡萄球菌重组疫苗的研发提供参考数据。[方法]使用Protparam、PSORT、Signal P-5.0、TMpred、Net Phos 3.1 Server、PSIPRED、SWISSMODEL等在线生物信息软件,分析Cna蛋白的理化性质、亚细胞定位、跨膜区域、磷酸化修饰位点、二级结构和三维结构。以基因组DNA为模板扩增Cna基因编码N1-N2子域的片段,扩增产物经酶切回收后与载体pET-32a(+)相连接,构建重组表达质粒,将该重组质粒转化E.coli TG1,经菌落PCR、测序鉴定后,增菌培养并抽提质粒,再转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析。[结果]Cna蛋白由1 183个氨基酸残基组成,相对分子质量为133 006.82 Da,等电点为5.89,负电荷氨基酸残基数为180个,正电荷氨基酸残基数为167个,分子式:C5863H9241-N1569O1936S10,原子总数18 619个,是一种稳定的亲水蛋白质,定位于细胞膜上,第4~23、1 158~1 177位氨基酸残基分别形成一个典型的跨膜区,具有148个潜在的磷酸化修饰位点,二级结构中无规则卷曲和β折叠占较大比例,三维结构与二级结构预测结果相符。成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-Cna,经IPTG诱导后重组蛋白(N1-N2子域)获得了表达,重组蛋白相对分子质量为52.1 kDa。[结论]Cna基因的生物信息学分析及该基因的成功表达,为研究Cna蛋白在免疫保护中的作用奠定了一定的基础。