期刊文献+
共找到3篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
宿主细胞弗林蛋白酶对SARS-CoV-2刺突蛋白切割作用的研究 被引量:1
1
作者 刘晓萌 苏文强 +1 位作者 郑永辉 李苏楠 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期672-681,共10页
严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)S蛋白与宿主表面受体ACE2结合后,S蛋白中的Furin裂解位点RRAR被宿主细胞内的弗林蛋白酶(Furin)识别,并将S蛋白切割为S1/S2亚基。为研究Furin对SARS-CoV-2S蛋白的切割活性、对病毒的感染性及其... 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)S蛋白与宿主表面受体ACE2结合后,S蛋白中的Furin裂解位点RRAR被宿主细胞内的弗林蛋白酶(Furin)识别,并将S蛋白切割为S1/S2亚基。为研究Furin对SARS-CoV-2S蛋白的切割活性、对病毒的感染性及其形成细胞-细胞膜融合(合胞体)的影响,本研究采用套式PCR分别扩增S蛋白Furin裂解位点突变(将裂解位点由RRAR分别突变为RRRR、SRAS和AAAA)的编码基因片段,并分别克隆至pCAGGS载体中,构建重组质粒pRRRR-Flag、pSRAS-Flag、pAAAA-Flag,均经酶切和测序鉴定正确后构建pEGFP-RRRR、pEGFP-SRAS、pEGFP-AAAA质粒并经测序鉴定。采用慢病毒包装系统包装慢病毒后感染Huh7细胞,48 h后采用杀稻瘟菌素筛选共表达ACE2和TMPRSS2的Huh7细胞系Huh7-A+T;利用CRISPR-Cas9方法构建Furin敲除(Furin-KO)细胞系,并均经western blot鉴定。结果显示,上述两种细胞均正确构建。将与Flag融合表达的RRAR、RRRR、SRAS和AAAA质粒分别转染HEK293T细胞,24 h后利用western blot检测S蛋白的表达。将pRRAR-Flag和pFurin-His共转染HEK293T细胞;同时将pRRAR-Flag分别转染HEK293T和Furin-KO细胞,24 h后利用western blot检测上述两种细胞中S蛋白的表达。结果显示,转染pRRAR-Flag的细胞中检测到S蛋白和S2亚基的表达,即Furin能够切割S蛋白,但转染pAAAA-Flag和pSRAS-Flag的细胞中均检测不到S2亚基的表达,转染p RRRR-Flag的细胞中S2亚基的表达量增加。与仅转染pRRAR-Flag的对照细胞相比,在HEK293T细胞中共转染pFurin-His和pRRAR-Flag能够显著增加S蛋白切割为S2亚基的量;而在Furin-KO细胞中未检测到S2亚基的表达。采用假病毒系统包装Furin裂解位点RRAR及其突变体(SRAS、AAAA)的假病毒SARS-CoV-2;利用HEK293T和Furin-KO细胞包装SARS-CoV-2假病毒,通过计算荧光素酶活性Luc与各病毒p24蛋白含量的比值比较不同假病毒对Huh7-A+T细胞及内源性Furin对两种细胞包装的假病毒的相对感染性。结果显示,与pRRAR-Flag及HEK293T细胞包装的假病毒相比,pSRAS-Flag和pAAAA-Flag及Furin-KO细胞包装的假病毒对Huh7-A+T细胞的感染性均极显著降低(P<0.01)。将质粒pEGFP-RRAR、pEGFP-RRRR、pEGFP-SRAS、pEGFP-AAAA与pEGFP-Furin分别转染HeLa细胞,24 h后经激光共聚焦显微镜观察Furin蛋白和S蛋白在细胞中的定位;将前4种质粒与表达Furin-His的质粒共转染HeLa细胞,24 h后经间接免疫荧光试验(IFA)检测Furin蛋白和S蛋白及其突变体在细胞中共定位。观察结果可见,Furin蛋白主要位于细胞浆中,S蛋白与Furin裂解位点突变的S蛋白均位于细胞膜;IFA结果显示,Furin与S蛋白及Furin裂解位点突变为RRRR的S蛋白在细胞浆中均存在共定位,但与Furin裂解位点突变为AAAA的S蛋白不存在共定位。将pRRAR-Flag、pSRAS-Flag分别与pCAGGS-m Cherry共转染HEK293T细胞,同时利用细胞示踪剂(CMFDA)预处理Huh7-A+T细胞1 h后将两种细胞混合培养,24 h后观察结果显示,共转染pRRAR-Flag和pCAGGS-m Cherry的HEK293T中出现明显的合胞体,而当Furin裂解位点突变为SRAS时,合胞体的形成明显减少。本研究首次证实Furin在细胞浆中对S蛋白预切割,且将S蛋白的Furin裂解位点突变为SRAS后能够降低SARS-CoV-2的感染性和细胞合胞体的形成能力。本研究为新冠疫情的防治提供新思路。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 弗林蛋白酶 刺突蛋白 s2亚基切割 共定位
下载PDF
Bimetallic Nickel Cobalt Sulfide as E cient Electrocatalyst for Zn–Air Battery and Water Splitting 被引量:7
2
作者 Jingyan Zhang Xiaowan Bai +5 位作者 Tongtong Wang Wen Xiao Pinxian Xi Jinlan Wang Daqiang Gao John Wang 《Nano-Micro Letters》 SCIE EI CAS CSCD 2019年第1期33-45,共13页
The development of e cient earth-abundant electrocatalysts for oxygen reduction, oxygen evolution, and hydrogen evolution reactions(ORR, OER, and HER) is important for future energy conversion and energy storage devic... The development of e cient earth-abundant electrocatalysts for oxygen reduction, oxygen evolution, and hydrogen evolution reactions(ORR, OER, and HER) is important for future energy conversion and energy storage devices, for which both rechargeable Zn–air batteries and water splitting have raised great expectations. Herein, we report a single-phase bimetallic nickel cobalt sulfide((Ni,Co)S_2) as an e cient electrocatalyst for both OER and ORR. Owing to the synergistic combination of Ni and Co, the(Ni,Co)S_2 exhibits superior electrocatalytic performance for ORR, OER, and HER in an alkaline electrolyte, and the first principle calculation results indicate that the reaction of an adsorbed O atom with a H_2O molecule to form a *OOH is the potential limiting step in the OER. Importantly, it could be utilized as an advanced air electrode material in Zn–air batteries, which shows an enhanced charge–discharge performance(charging voltage of 1.71 V and discharge voltage of 1.26 V at 2 mA cm^(-2)), large specific capacity(842 mAh g_(Zn)^(-1) at 5 mA cm^(-2)), and excellent cycling stability(480 h). Interestingly, the(Ni,Co)S_2-based Zn–air battery can e ciently power an electrochemical water-splitting unit with(Ni,Co)S_2 serving as both the electrodes. This reveals that the prepared(Ni,Co)S_2 has promising applications in future energy conversion and energy storage devices. 展开更多
关键词 (Ni co)s2 NANOSHEET arrays DFT calculations Zn–air batteries Water SPLITTING
下载PDF
Ni-MoS_2/γ-Al_2O_3催化剂的制备及其光催化性能研究 被引量:1
3
作者 单爽 杨占旭 +2 位作者 高培玉 贠丽敏 邱继一承 《人工晶体学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第1期211-216 223,223,共7页
采用共沉淀结合水热合成方法,以γ-Al_2O_3为载体,制备出Ni-MoS_2/γ-Al_2O_3复合催化剂。采用X射线粉末衍射仪(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)等方法对样品的结构与形貌进行表征。研究了MoS_2负载量、煅烧温度对NiMoS_2/γ-Al_2O_3复合催... 采用共沉淀结合水热合成方法,以γ-Al_2O_3为载体,制备出Ni-MoS_2/γ-Al_2O_3复合催化剂。采用X射线粉末衍射仪(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)等方法对样品的结构与形貌进行表征。研究了MoS_2负载量、煅烧温度对NiMoS_2/γ-Al_2O_3复合催化剂光催化降解罗丹明B性能的影响,并考察了催化剂的循环使用性能。结果表明:负载量为30wt%,煅烧温度为300℃的复合催化剂Ni-MoS_2/γ-Al_2O_3表面的MoS_2纳米片兼具有良好的结晶度和均匀分散性,其纳米片尺寸约为200 nm。可见光下,Ni-MoS_2/γ-Al_2O_3(MoS_2 30wt%/Ni 5wt%)复合催化剂对罗丹明B的降解效率能达到100%,且循环使用5次后,对罗丹明B的降解效率仍能够达到88.9%。 展开更多
关键词 NI-MO s2/γ-Al2O3 罗丹明B 光催化 共沉淀法 水热法
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部