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^(60)Co照射法饲养细胞的制备
1
作者
邹征云
刘宝瑞
《放射免疫学杂志》
CAS
2004年第1期25-27,共3页
目的 :选择合适的60 钴 (60 Co)照射剂量制备饲养细胞。方法 :采用 0Gy、2Gy、5Gy、1 0Gy、2 0Gy、30Gy的60钴 (60 Co)照射人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,然后将其继续培养 ,加入CD3 单克隆抗体 (OKT3 )、白细胞介素 - 2(IL - 2 )、植...
目的 :选择合适的60 钴 (60 Co)照射剂量制备饲养细胞。方法 :采用 0Gy、2Gy、5Gy、1 0Gy、2 0Gy、30Gy的60钴 (60 Co)照射人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,然后将其继续培养 ,加入CD3 单克隆抗体 (OKT3 )、白细胞介素 - 2(IL - 2 )、植物血球凝集素 (PHA)等 ,观察照射后第 1天、第 7天及第 1 5天细胞的凋亡情况及活细胞的细胞周期分布情况。结果 :γ射线照射剂量的加大会导致PBMC增殖能力的下降、存活细胞 (Annexin -V-/PI-)的减少、凋亡 (Annexin -V+ /PT-)与死亡 (Annexin -V+ /PT+ )的细胞数增加。结论 :采用60 Co照射法制备饲养细胞时 ,1
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关键词
^60
co
照射法
饲养细胞
外周血单个核细胞
单克隆抗体
免疫活性细胞
细胞扩增
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职称材料
辐照后的AlloMNCs诱导NK细胞体外扩增
被引量:
1
2
作者
马杰
赵卫东
+5 位作者
周虎
张丽娜
丁玉兰
宣恒华
桂云
金夏
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期54-57,共4页
目的探讨照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs)对人自然杀伤细胞(NK)体外扩增的影响,为NK细胞的过继免疫治疗奠定基础。方法 Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单个核细胞(PBMCs),30、50和70 Gyγ射线...
目的探讨照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs)对人自然杀伤细胞(NK)体外扩增的影响,为NK细胞的过继免疫治疗奠定基础。方法 Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单个核细胞(PBMCs),30、50和70 Gyγ射线照射后的AlloMNCs作为饲养细胞,分别加入上述PBMCs,在添加细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中进行培养扩增,同时选择未添加饲养细胞的作为对照组;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD56+CD3-NK细胞纯度;MTT法检测细胞杀伤活性。结果加入饲养细胞的PBMCs在添加了细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中可培养21 d,30 Gy照射后的AlloMNCs作为饲养细胞时细胞扩增最明显,在第21天时扩增了270.3±10.4倍,CD56+CD3-NK细胞纯度由培养前的(9.7±2.4)%提高到扩增后的(56.5±7.8)%,与无饲养细胞的对照组相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,添加30Gy照射后的AlloMNCs刺激扩增的NK细胞对K562和HO8910的杀伤率平均达到59.7%、63.2%,分别与对照组的28.3%、32.2%相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 30 Gy照射后的AlloMNCs可作为饲养细胞在体外促进NK细胞的增殖,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。
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关键词
自然杀伤细胞
扩增
饲养细胞
照射后的AlloMNCs
免疫治疗
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职称材料
γ射线预处理制备胚胎干细胞滋养层的实验研究
被引量:
1
3
作者
刘尧
杨明
+3 位作者
王惠
杨卫兵
秦茂林
李红丽
《医学研究杂志》
2010年第4期33-37,126,共6页
目的筛选并建立稳定、高效的胚胎干细胞滋养层细胞体外培养的最佳条件,利于胚胎干细胞的培养。方法清洁级昆明系孕12.5天、14.5天、18.5天雌鼠和新生(P0)昆明小鼠各5只。无菌取上述各孕龄小鼠胚胎分离培养原代鼠胚成纤维细胞(MEF)并传代...
目的筛选并建立稳定、高效的胚胎干细胞滋养层细胞体外培养的最佳条件,利于胚胎干细胞的培养。方法清洁级昆明系孕12.5天、14.5天、18.5天雌鼠和新生(P0)昆明小鼠各5只。无菌取上述各孕龄小鼠胚胎分离培养原代鼠胚成纤维细胞(MEF)并传代;以60Coγ射线(30Gy,20℃)分别照射10、20、25min后制备滋养层细胞。结果胚龄及60Coγ射线照射对MEF的细胞活性、生长增生和分泌功能有影响。(1)细胞活性状态:①E12.5天、E14.5天、E18天鼠胚和P0来源的第3~5代MEF活性均较好。E18.5天鼠胚和P0来源的第6代MEF,后期深染变形细胞的比例增多达32%,与E14.5天鼠胚来源同代细胞相比有显著差异(P<0.05);②E14.5天来源的第3~6代细胞采用60Coγ射线照射10min组,细胞仍生长迅速。照射20min组,细胞可维持存活达20天以上,细胞密度无显著变化。照射25min组,细胞存活14天左右且细胞密度无显著增加。(2)细胞分泌功能:①E14.5天鼠胚来源的第3~6代MEF以及用60Coγ射线照射10min组和20min组并培养5天时均可见较多数目的Ⅰ型胶原蛋白免疫阳性细胞,且染色较深;②60Coγ射线照射25min组,培养5天后第3~4代MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目与正常组相比无明显差异;但第5代后MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目减少,染色浅淡。结论 E14.5天鼠胚来源的第3~6代是用于制备滋养层的最佳来源;60Coγ射线(30Gy,20℃)照射20min可作为预处理制备滋养层细胞的最佳条件。
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关键词
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)
胚胎干细胞(ESC)
滋养层
60
co
γ射线
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职称材料
题名
^(60)Co照射法饲养细胞的制备
1
作者
邹征云
刘宝瑞
机构
南京大学医学院附属南京市鼓楼医院肿瘤科
出处
《放射免疫学杂志》
CAS
2004年第1期25-27,共3页
文摘
目的 :选择合适的60 钴 (60 Co)照射剂量制备饲养细胞。方法 :采用 0Gy、2Gy、5Gy、1 0Gy、2 0Gy、30Gy的60钴 (60 Co)照射人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,然后将其继续培养 ,加入CD3 单克隆抗体 (OKT3 )、白细胞介素 - 2(IL - 2 )、植物血球凝集素 (PHA)等 ,观察照射后第 1天、第 7天及第 1 5天细胞的凋亡情况及活细胞的细胞周期分布情况。结果 :γ射线照射剂量的加大会导致PBMC增殖能力的下降、存活细胞 (Annexin -V-/PI-)的减少、凋亡 (Annexin -V+ /PT-)与死亡 (Annexin -V+ /PT+ )的细胞数增加。结论 :采用60 Co照射法制备饲养细胞时 ,1
关键词
^60
co
照射法
饲养细胞
外周血单个核细胞
单克隆抗体
免疫活性细胞
细胞扩增
Keywords
co irradiation
,
pbmc
,
feeder cells
分类号
Q813.1 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
辐照后的AlloMNCs诱导NK细胞体外扩增
被引量:
1
2
作者
马杰
赵卫东
周虎
张丽娜
丁玉兰
宣恒华
桂云
金夏
机构
安徽医科大学附属省立医院妇产科
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期54-57,共4页
基金
安徽省科技攻关课题(08010302101)
文摘
目的探讨照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs)对人自然杀伤细胞(NK)体外扩增的影响,为NK细胞的过继免疫治疗奠定基础。方法 Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单个核细胞(PBMCs),30、50和70 Gyγ射线照射后的AlloMNCs作为饲养细胞,分别加入上述PBMCs,在添加细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中进行培养扩增,同时选择未添加饲养细胞的作为对照组;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD56+CD3-NK细胞纯度;MTT法检测细胞杀伤活性。结果加入饲养细胞的PBMCs在添加了细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中可培养21 d,30 Gy照射后的AlloMNCs作为饲养细胞时细胞扩增最明显,在第21天时扩增了270.3±10.4倍,CD56+CD3-NK细胞纯度由培养前的(9.7±2.4)%提高到扩增后的(56.5±7.8)%,与无饲养细胞的对照组相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,添加30Gy照射后的AlloMNCs刺激扩增的NK细胞对K562和HO8910的杀伤率平均达到59.7%、63.2%,分别与对照组的28.3%、32.2%相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 30 Gy照射后的AlloMNCs可作为饲养细胞在体外促进NK细胞的增殖,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。
关键词
自然杀伤细胞
扩增
饲养细胞
照射后的AlloMNCs
免疫治疗
Keywords
Natural killer
cells
Expansion
feeder cells
Irradiated AlloMNCs
Immunotherapy
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
γ射线预处理制备胚胎干细胞滋养层的实验研究
被引量:
1
3
作者
刘尧
杨明
王惠
杨卫兵
秦茂林
李红丽
机构
解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室
解放军第一八一医院皮肤科
出处
《医学研究杂志》
2010年第4期33-37,126,共6页
基金
广西壮族自治区科学研究与技术开发基金资助(桂科攻0592007-1G)
解放军第一八一医院科研基金
文摘
目的筛选并建立稳定、高效的胚胎干细胞滋养层细胞体外培养的最佳条件,利于胚胎干细胞的培养。方法清洁级昆明系孕12.5天、14.5天、18.5天雌鼠和新生(P0)昆明小鼠各5只。无菌取上述各孕龄小鼠胚胎分离培养原代鼠胚成纤维细胞(MEF)并传代;以60Coγ射线(30Gy,20℃)分别照射10、20、25min后制备滋养层细胞。结果胚龄及60Coγ射线照射对MEF的细胞活性、生长增生和分泌功能有影响。(1)细胞活性状态:①E12.5天、E14.5天、E18天鼠胚和P0来源的第3~5代MEF活性均较好。E18.5天鼠胚和P0来源的第6代MEF,后期深染变形细胞的比例增多达32%,与E14.5天鼠胚来源同代细胞相比有显著差异(P<0.05);②E14.5天来源的第3~6代细胞采用60Coγ射线照射10min组,细胞仍生长迅速。照射20min组,细胞可维持存活达20天以上,细胞密度无显著变化。照射25min组,细胞存活14天左右且细胞密度无显著增加。(2)细胞分泌功能:①E14.5天鼠胚来源的第3~6代MEF以及用60Coγ射线照射10min组和20min组并培养5天时均可见较多数目的Ⅰ型胶原蛋白免疫阳性细胞,且染色较深;②60Coγ射线照射25min组,培养5天后第3~4代MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目与正常组相比无明显差异;但第5代后MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目减少,染色浅淡。结论 E14.5天鼠胚来源的第3~6代是用于制备滋养层的最佳来源;60Coγ射线(30Gy,20℃)照射20min可作为预处理制备滋养层细胞的最佳条件。
关键词
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)
胚胎干细胞(ESC)
滋养层
60
co
γ射线
Keywords
Mouse embryonic fibroblast ( MEF )
Embryonic stem cell ( ESC )
feeder
layers
^60
co
γ-
irradiation
分类号
R967 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
^(60)Co照射法饲养细胞的制备
邹征云
刘宝瑞
《放射免疫学杂志》
CAS
2004
0
下载PDF
职称材料
2
辐照后的AlloMNCs诱导NK细胞体外扩增
马杰
赵卫东
周虎
张丽娜
丁玉兰
宣恒华
桂云
金夏
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
下载PDF
职称材料
3
γ射线预处理制备胚胎干细胞滋养层的实验研究
刘尧
杨明
王惠
杨卫兵
秦茂林
李红丽
《医学研究杂志》
2010
1
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职称材料
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