脂酰CoA脱氢酶基因在2型糖尿病大鼠中的表达

[目的 ]从基因水平探讨 2型糖尿病发病机制。[方法 ]SD雄性大鼠 2 2只 ,小剂量链脲佐菌素加高脂饲料组12只 ,对照组 10只 ;从脂肪组织中抽取总RNA ,纯化mRNA并逆转录为cDNA ,用Cy5标记实验组cDNA ,用Cy3标记对照组cDNA ,获得两组动物来源的cDNA探针 ;cDNA探针与基因表达谱芯片杂交 ,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。[结果 ]脂酰CoA脱氢酶基因在 2型糖尿病大鼠脂肪组织表达水平上调。[结论 ]游离脂肪酸氧化增加 ,在 2型糖尿病胰岛素抵抗和

长链脂肪酸氧化酶LCHAD胎盘表达与早发型重度先兆子痫的研究

目的：探讨线粒体长链脂肪酸氧化酶-长链-3-羟酰基辅酶A脱氢酶（10ngchain3-hydroxyacyl-CoAdehydrogenase，LCHAD）在重度先兆子痫（severepreeclampsia，S-PE）不同发病时期中的作用。方法：用免疫组化SP法，检测70例重度先兆子痫不同发病时期的伴或不伴有肝损害的胎盘组织中LCHAD蛋白的表达特点，并与54例正常妊娠早、中、晚期的绒毛和胎盘组织比较。统计学方法采用t检验。结果：正常妊娠和重度先兆子痫胎盘组织均有LCHAD表达。正常胎盘组织LCHAD表达强度随妊娠孕周的增加逐渐降低，妊娠晚期的表达强度较妊娠早期明显降低，差异有显著性（P〈0．05）。发病孕周小于28周的重度先兆子痫组LCHAD表达强度明显低于对照组，差异有显著性（P=0．019）。孕28～32周发病的重度先兆子痫伴有肝损害组LCHAD的表达强度明显低于对照组，差异有显著性（P=0．010）；无肝损害组LCHAD表达强度降低，但与相同孕周对照组比较，差异无显著性（P=0．093）。大于32孕周发病的重度先兆子痫各组LCHAD表达强度与对照组比较无明显变化。结论：LCHAD在正常妊娠及重度先兆子痫胎盘组织中均有明确表达，进一步揭示胎盘的发生和发展需要脂肪酸氧化供能，对维持胎盘正常功能和保证胎儿正常生长发育可能起重要作用。脂肪酸氧化代谢异常与早发型重度先兆子痫尤其是伴有肝损害有关。

α-LA对大鼠股四头肌线粒体抗氧化能力与能量代谢标志酶活性的影响

选用SD雄性大鼠,分为安静对照组(QC组)、运动对照组(EC组)和运动加α-硫辛酸组(EPL组),每组8只。第6周最后1天取股四头肌,制备线粒体样品,分别测试大鼠股四头肌线粒体抗氧化指标、表征线粒体功能的标志酶活性,探讨线粒体营养素α-硫辛酸(ɑ-LA)对大鼠股四头肌线粒体抗氧化能力与能量代谢标志酶活性的影响。结果显示,EC组、EPL组抗氧化酶活性与QC组比较下降(P<0.01或P<0.05);与EC组比较,EPL组抗氧化酶活性上升(P<0.05或P<0.01)。与QC组比较,EC组、EPL组MDA和H2O2含量升高(P<0.01);与EC组比较,EPL组MDA和H_2O_2的含量下降(P<0.01)。与QC比较,EC组和EPL组三种ATPase活性下降(P<0.01或P<0.05);与EC组比较,EPL组三种ATPase活性上升(P<0.05或P<0.01)。与QC组比较,EC组功能标志酶活性下降(P<0.05或P<0.01),EPL组功能标志酶活性下降(P<0.05);与EC组比较,EPL组功能标志酶活性上升(P<0.05或P<0.01)。EPL组大鼠运动至疲劳的时间延长30.05%。结果表明,α-LA对运动训练大鼠体重增长无不良影响,对线粒体的结构与功能具有维护作用,可保证线粒体的氧化供能效率,提高大鼠的有氧运动水平,具有较强的抗疲劳功效。

牦牛睾丸组织能量代谢相关酶活力的分析

为了解牦牛Bos grunniens睾丸组织在性成熟前后与能量代谢相关的几种酶活力变化,对九龙牦牛睾丸组织中参与糖酵解、三羧酸循环、脂肪酸β-氧化和线粒体呼吸链中几种酶活力做了测定。结果显示,性未成熟的九龙牦牛睾丸组织中β-羟脂酰CoA脱氢酶(HAD)活力显著高于成年九龙牦牛(P<0.01),而乳酸脱氢酶(LDH)、异柠檬酸脱氢酶(ICDH)、细胞色素氧化酶(COX)活力未见显著差异,提示脂肪酸β-氧化在性成熟前的牦牛睾丸组织能量代谢中可能发挥重要作用。

短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症新生儿筛查、临床特征及基因突变分析

目的 了解新生儿短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（SCADD）患病率、临床特征及基因突变特点.方法 采用串联质谱技术,对2009年1月到2015年10月1 430 024例新生儿进行遗传代谢病筛查,对筛查出的疑似SCADD患儿通过尿有机酸分析,酰基辅酶A脱氢酶编码基因（ACADS）进行确诊,对确诊病例分析其临床、生化改变及基因突变特点,进行饮食指导、生活管理及补充左旋肉碱,随访观察其生长及智能发育情况.结果 确诊SCADD 17例,患病率为1/84 117.患儿无临床症状,血丁酰基肉碱（C4）及其与乙酰基肉碱（C2）,丙酰基肉碱（C3）比值均增高,C40.71 ～3.14 μmol/L（正常值0.03 ～0.48 μmol/L）,C4/C20.07～0.23（正常值0.01 ～0.04）,C4/C30.65 ～2.04（正常值0.05 ～0.39）.尿有机酸分析13例,乙基丙二酸均增高[9.30 ～ 90.99 mg/g肌酐（正常值0～6.20mg/g肌酐）],1例伴甲基琥珀酸增高[12.33 mg/g肌酐（正常值0～6.40 mg/g肌酐）],1例伴乙酰甘氨酸增高[3.52 mg/g肌酐（正常值0～0.70 mg/g肌酐）].发现ACADS基因突变13种,其中12种为错义突变,1种为移码突变,均为已知突变.1例为纯合突变（c.1031A＞ G）,其余为复合杂合突变.常见突变为c.1031A ＞G（35.3％）与c.164C＞ T（20.6％）,ACADS基因型与乙基丙二酸以及C4浓度水平无明显相关.对患儿随访8 ～42个月,均未出现临床症状,体格及智力发育正常.结论 SCADD在新生儿人群中患病率为1/84 117.通过新生儿筛查确诊的SCADD无临床症状.常见基因突变为c.1031A＞G与c.164C＞T.

EHHADH是肝细胞癌脂肪酸代谢通路的关键基因:基于转录组分析

目的基于多数据库数据探索肝细胞癌(HCC)发生发展的驱动基因并挖掘HCC治疗的新生物靶点。方法采用从TCGA、GEO和ICGC数据库中获取的858例HCC组织数据与493例癌旁组织数据(共1351例转录组和基因组数据),运用GSEA筛选HCC与癌旁的差异通路,进而筛选差异通路中显著富集的基因,获得Hub基因3-hydroxyacyl CoA脱氢酶(EHHADH)。基于TCGA的HCC数据集分析与EHHADH转录组水平下调相关的基因突变,发现TP53突变最显著相关。利用相关性分析探究TP53突变导致EHHADH表达下调的机制。基于Metascape数据库预测EHHADH参与HCC发展的信号通路,发现与铁死亡信号通路显著相关。对30例HCC癌组织及配对的癌旁正常组织进行免疫组化染色,验证EHHADH的表达情况。结果三个HCC数据集均显示EHHADH在癌组织中相对于癌旁组织显著低表达(P<0.05),且和肝细胞去分化程度显著相关(P<0.01)。TCGA的HCC数据集体细胞突变景观分析显示HCC患者基因组中TP53突变率比例最高。EHHADH上游基因PPARGC1A转录组水平在TP53突变的HCC患者组中较未突变组显著下调(P<0.05),并与EHHADH表达水平相关。GO和KEGG富集分析结果显示EHHADH参与到肿瘤脂肪酸代谢通路中。免疫组化结果验证HCC组织中EHHADH表达水平下调,且其表达水平与肝细胞去分化程度及铁死亡进程相关。结论HCC组织中TP53突变可能诱导EHHADH上游基因PPARGC1A表达异常从而下调EHHADH表达。EHHADH在HCC癌组织中低表达与HCC癌组织的去分化程度加重及出现铁死亡逃逸现象密不可分,有可能成为HCC潜在治疗靶点。

妊娠合并HELLP综合征发病机理的新进展

HELLP综合征是产科严重并发症之一 ,它可能是一种独立的疾病 ,也可能是先兆子痫的严重并发症形式 ,其发病机理目前尚不清楚。现将HELLP综合征发生的有关因素进行综述 。

HELLP综合征的研究进展

HELLP综合征是妊娠期高血压疾病的严重并发症,常危及母婴生命,是导致孕产妇及围生儿死亡的原因之一。近年来,国内外学者对其发病机制进行了大量研究,有母胎免疫失衡,血小板聚集与消耗,血管内皮功能障碍及先天性固有脂肪酸氧化失调等学说,但其发病机制目前尚未阐明,可能是子痫前期或子痫的严重并发症,也可能是一种独立的疾病。

肝刺激因子在MCD饮食喂养小鼠非酒精性脂肪性肝炎中的作用

目的探讨肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)对蛋氨酸胆碱缺乏饲料(methionine and choline-deficient diet,MCD)饮食引起的小鼠非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的保护作用。方法采用MCD饮食进行小鼠NASH模型的制备,股静脉注射腺病毒包装HSS表达载体pAdxsi-Flag-HSS,用HE染色观察肝细胞组织改变,油红O染色观察肝内脂质沉积,并检测β-羟脂酰CoA脱氢酶(β-hydroxyacyl-COA dehydrongenase,HAD)的活性。结果 HSS的表达能显著减少MCD引起NASH小鼠肝细胞的脂滴的形成,并提高HAD的活性。结论 HSS对MCD造成的NASH肝损伤起到保护作用,这种保护作用可能部分通过提高HAD的活性而实现的。

重度子痫前期与长链脂肪酸氧化酶基因蛋白表达异常的相关性

目的探讨重度子痫前期与参与长链脂肪酸氧化的长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）mRNA和蛋白表达异常的相关性。方法通过体外无血清培养胎盘滋养细胞，然后分为4组，分别用正常妊娠孕妇（NP组）、早发型重度子痫前期（E—PE组）、晚发型重度子痫前期（L—PE组）、重度子痫前期伴发HELLP综合征（HELLP组）患者血清刺激胎盘滋养细胞。采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测各组LCHAD基因和蛋白的表达。结果（1）LCHAD的mRNA表达变化：NP、E—PE、L-PE及HELLP组LCHADmRNA相对表达量分别为1．00±0．00、3．08±0．22、1．62±0．23、3．36±0．18。与NP组比较，E—PE、L-PE及HELLP组LCHAD的mRNA相对表达量均明显降低（P〈0．05）；与L．PE组相比较，E．PE、HELLP组LCHAD的mRNA相对表达量也有明显降低（P〈0．05）；而E—PE与HELLP组两组间LCHAD的mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）LCHAD蛋白表达变化：NP、E—PE、L—PE及HELLP组LCHAD／β-肌动蛋白比率分别为4．94±0．02、2．93±0．13、4．14±0．06、2．80±0．09。与NP组比较，E-PE、L—PE及HELLP组LCHAD蛋白表达均明显降低（P〈0．05）；E．PE、HELLP组LCHAD蛋白表达比L-PE组都有明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；而E—PE与HELLP组两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论重度子痫前期对胎盘滋养细胞中LCHAD的基因蛋白表达异常存在一定的影响，其中以早发型重度子痫前期和HELLP综合征的影响更为明显。脂肪酸氧化与子痫前期发生发展的相互影响和作用机制值得深入探讨。

重度子痫前期患者及其新生儿线粒体三功能蛋白酶α亚单位G1528C基因突变的研究

目的探讨线粒体三功能蛋白酶(MTP)α亚单位G1528C基因突变,在重度子痫前期及溶血、肝酶升高和低血小板计数(HELLP综合征)孕妇及其新生儿中的携带情况。方法北京地区汉族重度子痫前期(子痫前期组)孕妇及其新生儿130例(其中合并肝损害18例),HELLP综合征(HELLP组)孕妇及其新生儿10例,同期无妊娠期特发性肝损害等并发症及其他代谢性疾病的正常孕妇90例及新生儿560例作为对照组。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析3组孕妇外周血及其新生儿脐血中MTPα亚单位G1528C基因突变的携带情况。实验中阳性对照标准为西方白种人的G1528C杂合子标本。结果3组孕妇外周血及其新生儿脐血中的MTPα亚单位G1528C基因电泳图中均无与阳性对照标本中相应分子质量的条带出现。结论MTP的α亚单位G1528C基因突变可能不是北京汉族人种常见的突变位点;MTP缺陷在北京汉族人与西方白种人之间可能存在着种族差异。

不同临床发病特征子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD表达与氧化应激、炎性反应及血清游离脂肪酸和甘油三酯水平的相关性

目的探讨不同临床发病特征的子痫前期孕妇胎盘组织中长链脂肪酸氧化酶表达与氧化应激、炎性反应及其与血清游离脂肪酸（FFA）、甘油三酯（TG）水平的相关性。方法采用前瞻性队列研究方法，选择2012年1月1日至5月31日在北京市海淀区妇幼保健院行产前检查的单胎孕妇，于孕22～24周行B超检查，发现有子宫动脉舒张早期切迹（简称切迹）的101例孕妇纳入有切迹组，无切迹的377例孕妇为无切迹组，随访两组孕妇的妊娠结局及妊娠期高血压疾病发病情况。检测两组孕早中期血清FFA、TG水平，采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶P47-phox亚基（NADPH P47-phox）、p38丝裂原活化蛋白激酶α（p38MAPK-α）和环氧合酶2（COX-2） mRNA和蛋白的表达；分析孕妇血清FFA、TG水平与胎盘组织中LCHAD、NADPH P47-phox、p38MAPK-α和COX-2 mRNA 和蛋白表达的相关性。结果（1）有切迹组发生早发型子痫前期9例，晚发型子痫前期15例，妊娠期高血压10例；无切迹组发生晚发型子痫前期8例，妊娠期高血压18例。随机选取两组孕妇中血压正常者各15例共计30例为对照组。（2）有切迹组早发型子痫前期、晚发型子痫前期及妊娠期高血压孕妇TG水平分别为（2.0±0.8）、（1.8±0.6）及（1.9±0.7）mmol/L，FFA水平分别为（0.68±0.26）、（0.52±0.10）及（0.52±0.17）mmol/L；无切迹组晚发型子痫前期及妊娠期高血压孕妇TG水平分别为（1.6±0.6）及（1.4±0.4）mmol/L，FFA水平分别为（0.49±0.11）及（0.48±0.05）mmol/L；对照组TG及FFA水平分别为（1.4±0.5）及（0.52±0.06）mmol/L；有切迹组孕妇TG水平均显著高于对照组（P〈0.05）；有切迹组早发型子痫前期孕妇FFA水平显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.05）。（3）有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD mRNA表达水平均显著低于有切迹组和无切迹组的晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织中NADPH P47-phox mRNA表达水平均显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织中p38MAPK-α mRNA表达水平均显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织COX-2 mRNA表达水平显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。（4）有切迹组早发型子痫前期、晚发型子痫前期、妊娠期高血压孕妇胎盘组织中LCHAD蛋白表达水平均显著低于对照组（P〈0.01）；有切迹组早发型子痫前期显著低于无切迹组晚发型子痫前期（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织中NADPH P47-phox蛋白表达水平高于无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.05）。有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中p38MAPK-α蛋白表达水平显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期、晚发型子痫前期及妊娠期高血压孕妇，及无切迹组孕妇胎盘组织中COX-2蛋白表达水平均显著高于对照组（P〈0.01）。（5）有切迹组早发型子痫前期孕妇血清FFA 水平与胎盘组织中LCHAD mRNA 和蛋白表达呈显著负相关（r=-0.810、-0.932，P〈0.01），两组孕妇血清TG水平与胎盘组织中LCHAD mRNA和蛋白表达均无显著相关性（P〉0.05）。（6）有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD mRNA表达水平与NADPH P47-phox mRNA、COX-2 mRNA 表达呈显著负相关（r=-0.877、-0.762，P〈0.05）；对照组胎盘组织中 LCHAD mRNA表达水平与COX-2 mRNA表达呈显著负相关（r=-0.565，P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD蛋白表达水平与NADPH P47-phox蛋白表达呈显著负相关（r=-0.818， P〈0.01）；对照组胎盘组织中LCHAD蛋白表达水平与COX-2蛋白表达呈显著负相关（r=-0.502，P〈 0.01）。结论不同临床发病特征子痫前期孕妇胎盘组织中长链脂肪酸氧化酶mRNA和蛋白表达水平不同，伴有切迹的早发型子痫前期孕妇的长链脂肪酸氧化酶mRNA和蛋白表达水平较晚发型降低更为明显，且与早中孕期升高的血清FFA水平以及显著增强的氧化应激和炎性反应有负相关性，与血清TG水平无相关性。

早发重度子痫前期、HELLP综合征及抗磷脂综合征对胎盘滋养细胞LCHAD基因甲基化的影响及其与基因mRNA表达相关性的研究

目的探讨早发重度子痫前期、HELLP综合征及抗磷脂综合征（APS）对胎盘滋养细胞线粒体长链3．羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）基因甲基化程度的影响及其与基因mRNA表达的相关性。方法采集2013年1月至2015年3月在北京大学第三医院产前检查及住院治疗的病理妊娠孕妇的血清，其中早发重度子痫前期14例（子痫前期组）、HELLP综合征12例（HELLP组）及APS14例（APS组）为病理妊娠组，以正常妊娠的14例孕妇的血清为对照（对照组）；原代绒毛滋养细胞来自于2014年3月至8月在北京大学第三医院自愿要求人工流产、胚胎正常、无妊娠合并症和并发症妇女40例的绒毛组织。在体外培养原代绒毛滋养细胞和永久性滋养细胞系HTR-8／Svneo细胞，分别加入相同浓度（10％）的4组孕妇的血清，孵育24h后收集各组滋养细胞。（1）采用在线生物信息学预测软件（MethPrimer软件）预测滋养细胞中LCHAD基因启动子区二核苷酸胞嘧啶（CpG）岛甲基化位点的数量及位置；（2）通过MassARRAY甲基化DNA定量分析平台检测4组滋养细胞中LCHAD基因启动子区各位点的甲基化程度；（3）采用实时荧光定量逆转录（RT）-PCR技术检测4组滋养细胞中LCHADmRNA的表达水平；（4）采用Pearson相关系数对4组滋养细胞中LCHAD基因启动子区各位点的甲基化程度与LCHADmRNA的表达水平进行相关性分析。结果因原代滋养细胞和HTR．8／Svneo细胞两种细胞的实验结果完全一致，故将两种细胞合并用“滋养细胞”表述。（1）滋养细胞中LCHAD基因启动子区目标CpG岛（长度558bp）中，含有17个胞嘧啶鸟嘌呤（cG）位点，获得其中11个（11／17）位点的甲基化程度，其位置分别为：-984、-960、-899、-853、-811、-796、-774、-727、-615、-595、-579位点，其中-899、-796及-774位点为复合位点（含有2个及以上CG序列），另外8个为单独位点（含有1个CG序列）。（2）病理妊娠组滋养细胞中甲基化程度较高的位点为-899、-853、-615及-595位点，子痫前期组、HELLP组-899、-853及-615位点的甲基化程度均明显高于对照组（P〈0．01），子痫前期组-853位点的甲基化程度明显高于HELLP组（P〈0．05）；HELLP组、APS组及对照组-595位点均呈无甲基化状态，分别与子痫前期组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（3）子痫前期组滋养细胞中LCHADmRNA的表达水平为0．048±0．005，HELLP组为0．045±0．006，APS组为0．044±0．004，均显著低于对照组的0．076±0．009（P〈0．01）。（4）子痫前期组滋养细胞中LCHAD基因启动子区-899、-853、-727、-615及-579位点的甲基化程度与基因mRNA的表达水平均呈明显负相关（P〈0．05）；HELLP组滋养细胞中LCHAD基因启动子区-899、-853、-615位点的甲基化程度与基因mRNA的表达水平均呈明显负相关（P〈0．05）；而APS和对照组滋养细胞中两者均无显著相关性（P〉0．05）。结论早发重度子痫前期、HELLP综合征、APS对滋养细胞中LCHAD基因启动子区的甲基化修饰存在差异，早发重度子痫前期、HELLP综合征滋养细胞中LCHAD基因启动子区甲基化修饰程度明显升高，并与LCHADmRNA表达水平呈明显负相关性，进一步揭示了长链脂肪酸氧化改变在不同病理妊娠中的分子学基础。

子痫前期对滋养细胞脂肪酸氧化的影响及其与p38MAPK信号通路的相关性

目的 探讨重度子痫前期对胎盘滋养细胞线粒体长链脂肪酸氧化酶——长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）表达的影响及其与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路的相关性.方法 体外培养胎盘滋养细胞,分别用早发型重度子痫前期、晚发型重度子痫前期、重度子痫前期伴发HELLP综合征及正常妊娠妇女的血清刺激胎盘滋养细胞（分别命名为早发组、晚发组、HELLP组、正常对照组）,每组再分别加入DMEM/F12培养基、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶抑制剂（NADPH-Ⅰ）和p38MAPK抑制剂（p38-Ⅰ）处理细胞.采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测各组滋养细胞LCHAD mRNA和蛋白的表达.结果 （1）LCHAD mRNA的表达：正常对照组＋培养基、早发组＋培养基、早发组＋ NADPH-Ⅰ、早发组＋p38-Ⅰ、晚发组＋培养基、晚发组＋NADPH-Ⅰ、晚发组＋p38-Ⅰ、HELLP组＋培养基、HELLP组＋NADPH-Ⅰ、HELLP组＋p38-Ⅰ滋养细胞LCHAD mRNA的相对表达量分别为1.00±0.03、0.14±0.08、0.95±0.20、1.43±1.02、0.37±0.18、1.51 ±0.36、1.60±0.31、0.10 ±0.04、0.49 ±0.10、0.44±0.21.早发组＋培养基、晚发组＋培养基、HELLP组＋培养基与正常对照组＋培养基比较,LCHAD mRNA的相对表达量均明显降低,分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与正常对照组比较,晚发组＋ NADPH-Ⅰ、晚发组＋p38-Ⅰ LCHADmRNA的相对表达量均有明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）,而HELLP组LCHAD mRNA的相对表达量均有明显降低,差异也有统计学意义（P＜0.05）.（2） LCHAD蛋白的表达：正常对照组＋培养基、早发组＋培养基、早发组＋ NADPH-Ⅰ、早发组＋p38-Ⅰ、晚发组＋培养基、晚发组＋NADPH-Ⅰ、晚发组＋ p38-Ⅰ、HELLP组＋培养基、HELLP组＋NADPH-Ⅰ、HELLP组＋p38-Ⅰ组LCHAD蛋白的相对表达量分别为19.4±2.2、10.7±1.1、17.9±3.3、19.1 ±2.9、16.4±2.3、20.3±2.3、20.9 ±4.3、12.4±2.3、17.6±2.6、17.7 ±2.0.与正常对照组比较,早发组＋培养基、晚发组＋培养基及HELLP组LCHAD蛋白的相对表达量均明显降低,分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,而早发组＋NADPH-Ⅰ、早发组＋p38-Ⅰ、晚发组＋NADPH-Ⅰ、晚发组＋p38-Ⅰ LCHAD蛋白的相对表达量无明显变化（P＞0.05）.早发组、晚发组、HELLP组中,NADPH-Ⅰ亚组、p38-Ⅰ亚组与培养基亚组比较,LCHAD蛋白的相对表达量均有明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 重度子痫前期对胎盘滋养细胞中的脂肪酸氧化代谢有一定的影响,尤其以HELLP综合征最为明显.NADPH-Ⅰ、p38-Ⅰ能缓解早、晚发型重度子痫前期和HELLP综合征中的脂肪酸氧化代谢障碍,p38MAPK信号通路可能参与了该过程.

线虫β-氧化循环的结构生物学研究

β-氧化循环是生物体脂肪酸的氧化分解的主要途径。在真核细胞内脂肪酸经过活化生成脂酰CoA,而后在线粒体基质中进入β氧化循环被逐步氧化分解。

不同途径建立的子痫前期模型孕鼠胎盘组织中LCHAD基因位点甲基化水平的差异性研究

目的 通过检测不同诱发途径建立的子痫前期模型孕鼠胎盘组织中长链脂肪酸β氧化关键酶长链-3-羟酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）基因位点甲基化程度的差异,探讨多因素和多通路在子痫前期病理机制中的分子实验基础.方法 按不同途径建立子痫前期孕鼠模型并分组如下：（1）左硝基精氨酸甲酯（L-NAME）组：给予孕鼠皮下注射L-NAME的方法建模;（2）脂多糖（LPS）组：给予孕鼠腹腔注射LPS的方法建模;（3）载脂蛋白C3（ApoC3）组：给予存在脂代谢障碍的孕鼠皮下注射L-NAME的方法建模型;（4）β2糖蛋白Ⅰ（β-2GPI）组：给予孕鼠皮下注射β-2GPI不完全弗氏佐剂的方法建模.根据建模时间对L-NAME组、LPS组及ApoC3组孕鼠于妊娠第3、11、16天分别定为胚胎植入前期、子痫前期早发期和晚发期3个不同实验阶段,β-2GPI组孕鼠仅有植入前期,对不同实验阶段的孕鼠胎盘LCHAD基因位点的甲基化水平进行检测.同时设生理盐水对照组,以及应用ApoC3高表达转基因孕鼠作为对照的转基因对照组.结果 （1）各组孕鼠LCHAD基因发生甲基化的位点：在LCHAD基因转录起始位点上游728 bp的范围内,共发现存在45个CG位点,其中LCHAD基因CG-5、12、13、14、15、16、19、24、25、27、28、29、30、31、32、34、35、43为含有2个及以上CG序列的复合位点,其他位点为仅含有1个CG序列的单一位点.L-NAME组、LPS组、ApoC3组和β-2GPI组孕鼠均有13个LCHAD基因位点发生甲基化改变,其中,LCHAD基因CG-3、5、6、11、13、14、18、28位点呈不同程度的高甲基化状态;LCHAD基因CG-16、25、31、42、44位点呈不同程度的低甲基化状态;其余32个位点无甲基化改变.（2）各组孕鼠胎盘LCHAD基因位点甲基化水平比较：L-NAME组、LPS组、ApoC3组、β-2GPI组和转基因对照组孕鼠胎盘LCHAD基因CG-3、11、13、14、18位点的甲基化水平显著高于生理盐水对照组,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;而LCHAD基因CG-42、44位点的甲基化水平显著低于生理盐水对照组,分别比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.（3）各组孕鼠LCHAD基因相同位点的甲基化水平比较：①L-NAME组孕鼠早发期LCHAD基因CG-3、11、18位点的甲基化水平显著低于植入前期及晚发期,LPS组孕鼠植入前期显著低于早发期及晚发期;而ApoC3组孕鼠植入前显著高于早发期及晚发期,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.②L-NAME组、LPS组不同实验阶段孕鼠LCHAD基因CG-5位点甲基化水平均显著高于生理盐水对照组,而ApoC3组仅植入前及早发期高于生理盐水对照组,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.③L-NAME组孕鼠不同实验阶段LCHAD基因CG-6位点甲基化水平显著高于其他各组,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.④L-NAME组孕鼠LCHAD基因CG-13、14位点甲基化水平在植入前、早发期、晚发期呈逐渐升高趋势,LPS组孕鼠在植入前显著高于早发期、晚发期,而ApoC3组孕鼠早发期的甲基化水平最高,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.⑤L-NAME组孕鼠LCHAD基因CG-28位点甲基化水平在植入前、早发期、晚发期呈逐渐降低趋势,LPS组孕鼠早发期、晚发期甲基化水平高于植入前期,ApoC3组孕鼠早发期甲基化水平最高,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.⑥ApoC3组孕鼠LCHAD基因CG-16、25、31位点甲基化水平显著高于其他各组,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.⑦β-2GPI组孕鼠LCHAD基因CG-42位点未检测到甲基化,而其他各组CG-42位点呈低甲基化状态,β-2GPI组与其他各组的CG-42位点甲基化水平比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论 LCHAD基因CG-6、42位点甲基化可能分别与L-NAME、β-2GPI诱导的子痫前期孕鼠胎盘中LCHAD基因表达变化相关;LCHAD基因表达和甲基化在LPS和ApoC3转基因孕鼠中未见明显联系.不同诱发途径的子痫前期孕鼠LCHAD甲基化水平和表达存在的差异,进一步揭示了多因素和多通路在子痫前期发病机制中的分子实验基础.