竹节花黄斑驳病毒启动子的缺失分析及功能

竹节花黄斑驳病毒（ＣｏＹＭＶ）是侵染单子叶植物竹节花的一种双链环状ＤＮＡ病毒，它的启动子可介导外源基因在烟草韧皮部特异表达。为了研究其组织特异性表达的最佳启动子区域，对ＣｏＹＭＶ启动子进行了５′端五种不同长度的缺失分析，用不同长度的启动子片段与ＧＵＳ基因及ＮＯＳ３′端转录中止序列构建了全长启动子及５个缺失启动子序列的六个嵌合ＧＵＳ基因植物表达载体。利用农杆菌将上述嵌合基因转化烟草外植体后，每种表达载体都获得了一批转基因烟草植株。转化再生烟草植株的ＰＣＲ分析、ＧＵＳ酶活测定及ＧＵＳ组织染色的结果表明六种类型的嵌合基因已整合到烟草染色体中，并有五种表达出ＧＵＳ活性。缺失到８７０ｂｐ的启动子比全长启动子（１０４０ｂｐ）的活性约高７８％，８７０ｂｐ比５８５ｂｐ启动子介导的ＧＵＳ活性略高但差别不明显，缺失到４４７和２３２时ＧＵＳ活性有明显下降，但仍具有韧皮部特异表达的特性。当缺失到ＴＡＴＡｂｏｘ附近的４４ｂｐ时启动子丧失组织特异性，ＧＵＳ活性也降低到测不出来的水平。以上结果表明ＣｏＹＭＶ启动子从转录起始位点上游８７０ｂｐ～２３０ｂｐ及２３２ｂｐ下游区分别与启动子的活性和韧皮部组织特异性密切相关，８７?

将GNA基因导入宁夏枸杞及其表达的研究

为了解决枸杞蚜虫侵害的难题,以宁夏枸杞主栽品种“宁杞1号”叶片为外植体,通过农杆菌介导的转化方法,将改造后的雪花莲凝集素GNA基因转入枸杞,以抗性愈伤组织诱导率作为转化效率的指标,对影响转化效率的因素进行了研究,初步建立了转化频率较高的转化系统。对获得的70个转基因株系进行PCR检测,阳性率为60%。运用Western blot杂交检测了2个转化子叶片和果实中GNA的表达,结果表明,其中一个转化株系在维管组织成分较高的叶片、青果中得到了GNA的表达,而在维管束成分极少的红果中未检测到GNA蛋白的表达。

竹节花黄斑驳病毒启动子在棉花维管组织中是一个强启动子

用竹节花黄斑驳病毒 (CommelinaYellowMottleVirus,CoYMV)启动子_gus嵌合基因和CaMV 35S_gus嵌合基因通过根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)LBA44 0 4介导分别转入棉花 (Gossypiumhir sutumL .cv .Jingmian 7,J7G) ,诱导再生了棉花转基因植株。GUS活性的组织化学定位检测表明 ,在 5 97bpCoYMV启动子的驱动下 ,gus基因在棉花植株的叶、叶柄、苞叶、茎、根、下胚轴的维管组织及花的大部分组织的维管束中高表达。在含有较多维管组织细胞的叶脉和根中 ,CoYMV启动子_gus的表达活性与CaMV 35S_gus相当或更高 ,但在维管组织细胞含量相对较少的叶片、子叶和下胚轴中 ,CoYMV启动子_gus的表达活性仅为CaMV 35S_gus的 1/3～ 1/5。转CaMV 35S_gus基因棉花植株的叶脉与叶片GUS活性比例为 0 .5 ,而转CoYMV启动子_gus基因棉花约为 2 .0。随着转基因棉花的生长发育 ,gus基因在叶维管束中的表达活性有增强的趋势。以上结果表明CoYMV启动子在转基因棉花中具有维管束特异性。

将GNA基因导入宁夏枸杞(Lycium bararum L．)及其表达的研究

以宁夏枸杞主栽品种“宁杞1号”叶片为外植体,通过农杆菌介导的转化方法,将1个改造后的雪花莲凝集素(GNA)基因转入枸杞,以抗性愈伤组织诱导率作为转化效率的粗略指标,对影响转化效率的因素进行了研究,初步建立了转化频率较高的转化系统。对获得的70个转基因株系进行PCR检测,阳性率为60％。运用Western blot杂交检测了两个转化子叶片和果实中GNA的表达,结果表明其中一个转化株系在维管组织成分较高的叶片、青果得到了GNA的表达,而在维管束成分极少的红果未检测到GNA蛋白的表达。