肝功能联合血常规检测对燃煤污染型地方性砷中毒患者肝损伤的诊断价值

目的探讨肝功能联合血常规指标检测对燃煤污染型地方性砷中毒(燃煤型砷中毒)患者肝损伤的诊断价值。方法226例燃煤型砷中毒病区砷中毒患者参考GBZ 59-2010《职业性中毒性肝病诊断标准》分为无肝损伤组(n=114)和肝损伤组(n=112),另选无燃用高砷煤史且其他条件与病区相近的邻村健康居民为对照组(n=95),收集所有观察对象的一般资料(包括年龄、性别、吸烟情况及饮酒情况);取所有观察对象清晨空腹静脉血,采用全自动生化分析仪检测血清肝功能指标[总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及谷氨酰转肽酶(GGT)],采用血细胞分析仪检测血常规指标(包括白细胞计数、淋巴细胞计数、中间细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞数百分比、中间细胞数百分比、中性粒细胞数百分比、血红蛋白浓度、红细胞计数、红细胞压积、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度、血小板计数、平均血小板体积、血小板分布宽度及血小板压积);采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析肝功能与血常规指标联合应用对砷中毒肝损伤的诊断价值。结果肝损伤组砷中毒患者TBIL、ALT、AST、GGT含量较对照组和无肝损伤组均升高(P<0.05);无肝损伤组和肝损伤组砷中毒患者平均血小板体积和血小板分布宽度较对照组升高,血小板计数、血小板压积较对照组降低,砷中毒肝损伤组中性粒细胞计数、中性粒细胞数百分比、血红蛋白浓度、红细胞压积和平均红细胞体积较对照组均升高,淋巴细胞数百分比较对照组降低(P<0.05);肝损伤组砷中毒患者中性粒细胞数百分比、血红蛋白浓度、红细胞计数、红细胞压积、平均红细胞体积和平均血小板体积较无肝损伤砷中毒患者均升高(P<0.05);肝功能与血常规联合检测诊断砷中毒患者肝损伤的AUC、灵敏度和特异度分别为0.940、85.7%、90.40%,识别价值优于肝功能或血常规单独检测。结论肝功能和血常规指标联合检测可提高对燃煤型砷中毒患者肝损伤的诊断价值。

燃煤型砷中毒患者肝损伤的临床病理研究

目的了解燃煤型砷中毒人体肝脏损害后的病理改变情况,为进一步阐明中毒机制提供客观的形态学依据。方法经常规病史询问、生化检查等排除长期酗酒、血吸虫及传染性肝炎等疾病后的自愿者中随机抽选出的39名患者进行常规肝脏穿刺,组织标本用1%中性甲醛固定,切片做HE及Nasson三色染色。对照组为病区12km外非燃用高砷煤20～45岁健康人10例。结果Ⅰ级砷中毒病人主要表现为肝细胞多呈轻至中度肿胀变性,肝窦和汇管区炎细胞浸润,汇管区的纤维组织增生表现轻微,无一例发生肝硬化。Ⅱ级砷中毒病人肝细胞肿胀变性明显加重,汇管区炎细胞及纤维组织较Ⅰ级加重,中度以上纤维组织增生有6例。所有Ⅲ级砷中毒病例均发现有不同程度的纤维组织增生。Ⅲ级砷中毒病人中肝细胞肿胀变性、汇管区的纤维组织增生更为明显,淋巴细胞浸润增加,肝硬化发生数增多。结论燃煤性砷中毒人群的肝组织肝细胞因中毒情况的加重而组织学改变不断加深,砷中毒级别越高纤维组织增生程度越明显(P<0.001)。同时,燃煤型砷中毒对人体的损害是多方面的,这与其它地区由砷引起的中毒反应有相似之处。

p53介导的线粒体凋亡通路在燃煤型砷中毒大鼠肝损伤中的作用

目的了解燃煤型砷中毒大鼠肝细胞凋亡情况及p53介导的线粒体凋亡通路在砷致肝损伤中的作用。方法 Wistar大鼠喂饲含砷量分别为0,25,50和100 mg·kg-1的饲料,连续90 d。采用氢化物发生-电感耦合等离子发射光谱法检测尿砷、毛发砷含量;采用末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法检测肝细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR检测外周血和肝组织p53,Bax,Bcl2 mRNA表达水平;采用Western blot检测肝组织p53,Bax,Bcl2蛋白水平。结果随染砷剂量增加,大鼠尿砷、毛发砷含量逐渐增高,与正常对照组比较,差异有统计学意义。砷50,100 mg·kg-1组肝细胞凋亡率(分别为16.49±2.06,15.83±1.28)高于砷0,25 mg·kg-1组(分别为9.00±0.59,9.27±0.36),差异有统计学意义(P<0.05)。砷100 mg·kg-1组外周血p53 mRNA相对表达量(2.69±1.84)和砷25,50,100 mg·kg-1组肝组织p53 mRNA相对表达量(分别为1.63±0.28,1.91±0.38,1.71±0.18)均高于正常对照组(分别为0.86±0.15,1.22±0.12);砷50,100 mg·kg-1组外周血Bax mRNA相对表达量(分别为1.36±0.30,1.94±0.65)和砷100 mg·kg-1组肝组织Bax mRNA相对表达量(1.34±0.23)均高于正常对照组(分别为0.77±0.15,0.84±0.34);砷100 mg·kg-1组肝组织Bcl2 mRNA相对表达量(0.98±0.50)低于正常对照组(2.14±1.15),差异有统计学意义(P<0.05)。砷25,50和100 mg·kg-1组肝组织p53蛋白相对表达量(分别为1.06±0.56,1.15±0.77和0.74±0.27),砷50和100 mg·kg-1组肝组织Bax蛋白相对表达量(分别为0.74±0.43和0.69±0.37),均高于正常对照组(分别为0.36±0.19和0.25±0.09),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论燃煤砷暴露所致肝损伤可能与砷通过p53调控Bax和Bcl2的表达水平诱导肝细胞凋亡机制有关。

智能选煤系统煤矸检测问题的研究

针对煤在传送带传送过程中会夹杂着一些煤矸,利用视觉机器人检测传送带上的煤,判断煤矸位置,结合传送带速度确定煤矸到达机器人所在位置所需时间,当煤和煤矸的混合物经过机器人时,机器人把煤矸分离出来,剩下的煤随传送带送到指定位置。机器人之间利用无线模块实现信息共享,将摄像头拍摄的信息反馈到机器人之间,可避免多块煤矸经过机器人时把煤矸漏掉,从而提高煤的纯度。

综合防控9年后贵州燃煤型砷中毒患者肝损害情况分析

目的:追踪调查贵州雨樟燃煤型砷中毒患者肝损害情况,分析综合防控9年后砷中毒患者肝生化指标随病情的改变情况。方法:以贵州雨樟燃煤型砷中毒病区为调查点,按《地方性砷中毒诊断标准》(WS/T211—2001)确定362例砷暴露者,按皮肤损伤程度分为病区非病人组(n=81)和砷中毒组(n=281),砷中毒组再分为轻度砷中毒组(n=97)、中度砷中毒组(n=100)及重度砷中毒组(n=84);以相邻生活习惯和经济条件与病区人群相近的63名非砷暴露者居民为对照组,采用生物化学法检测调查对象清晨空腹血清中血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、胆碱酯酶(CHE)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰胺转移酶(γ-GT)、总胆汁酸(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及A/G值,并计算其超标率。结果:与对照组比较,病区非病人组ALB含量显著降低(P <0. 05),砷中毒组ALB、TP含量和A/G显著降低(P <0. 05),TBA、ALP和γ-GT含量显著升高(P <0. 05);与病区非病人组比较,砷中毒组ALB、TP含量和A/G显著降低(P<0. 05),TBA和ALP含量显著升高(P <0. 05); PA、CHE、AST、ALT活性在各组间比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05);与对照组相比,病区非病人组及轻、中、重度砷中毒组ALB含量显著降低(P <0. 05),轻、中、重度砷中毒组TP含量和A/G显著降低、TBA和ALP含量显著升高(P <0. 05),γ-GT在中、重度砷中毒组显著升高(P <0. 05);与病区非病人组比较,各砷中毒组ALB含量和A/G显著降低,TBA含量显著升高(P <0. 05),中、重度砷中毒组TP含量显著降低(P <0. 05),重度砷中毒组ALP含量显著升高(P <0. 05);病区非病人组血清TP、CHE、AST、ALT、ALP和γ-GT超标率高于对照组,砷中毒患者血清TP、ALB、A/G、ALP、TBA、γ-GT、PA和AST超标率高于对照组。结论:综合防控9年后,贵州燃煤型砷中毒病区的非砷中毒病人肝功能有所好转,但砷中毒患者部分指标仍超过临床正常参考范围。

永城煤矸石污染区水域对鲫鱼肝脏的影响

为了探讨永城煤矸石污染区水域对鲫鱼(Carassius auratus)肝脏的影响,选用15条污染区的鲫鱼样本,对其肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、三磷酸腺苷酶(ATPase)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)4种酶活性及DNA损伤进行检测。结果发现,与对照组相比,试验组SOD、CAT活性均显著降低,ATPase、GSH-Px活性也下降,但差异不显著;试验组细胞彗星图像尾长和尾矩显著增加。表明煤矸石污染区水域降低了鲫鱼肝脏功能。

基准剂量在燃煤砷暴露人群肝损害研究中的应用及其意义探讨

目的探讨燃煤砷暴露人群肝损害的生物接触限值，筛选监测砷致肝损害的敏感生物学标志。方法以燃煤污染型地方性砷中毒病区118例砷暴露者为砷暴露组．非砷污染区50例居民为对照组。以尿砷、发砷（Ag—DDC法测定）作为接触指标；总胆汁酸（TBA，酶循环法测定）、谷胱甘肽硫转移酶（Gsrrs，化学比色法测定）和γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT，重氮试剂比色法测定）作为肝细胞损害效应指标；血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PC—Ⅲ）和Ⅳ型胶原（Ⅳ·C）作为肝纤维化效应指标（均用放射免疫法测定）。运用基准剂量（BMD）法计算各效应指标对应的尿砷和发砷的BMD及其95％可信区间下限值（BMDL），并根据BMD和BMDL大小判断各效应指标的敏感性。结果砷暴露组的砷接触指标尿砷（98．50mg／kgCr）、发砷（7．42mg／kg）和肝损害效应指标TBA、GSTs、γ-GT、HA、PC—Ⅲ、Ⅳ·c的几何均数（6．78μmol／L、22．05U／L、48．04U／L、85．19μg／L、89．76μg／L、86．85μg／L）均明显高于对照组的尿砷（22．98mg／kgCr）、发砷（1．28mg／kg）和肝损害效应指标（4．63μmol／L、13．76U／L、36．45U／L、54．62μg／L、74．45μg／L、54．81μg/L，P〈0．01），尿砷、发砷与肝损害效应指标间存在剂量-效应关系（P〈0．05或〈0．01）。尿砷的BMD和BMDL范围分别为49．53～101．96、39．02～70．15mg／kgCr，发砷的BMD和BMDL范围分别为3．04～5．02、2.36～3．25mg／kg。肝细胞损害指标的敏感顺序均为GSTs〉TBA〉γ-GT；而肝纤维化指标的敏感顺序均为HA〉Ⅳ·C〉PC—Ⅲ。结论根据肝损害生物学标志的最低尿砷、发砷BMDL值，结合当地健康人群尿砷、发砷平均值，建议燃煤砷暴露者肝损害的生物接触限值尿砷为35．00mg／kgCr，发砷为2．50mg／kg。GSTs、TBA、γ-GT和HA、Ⅳ·C、PC—Ⅲ分别能不同程度地反映燃煤砷污染对人体的肝细胞损害和肝纤维化情况；GSTs、HA分别是其相对最敏感的生物学标志。

PKCδ、Nrf2表达在燃煤污染型砷中毒大鼠肝损伤中的作用

目的观察燃煤污染型砷中毒大鼠肝组织中蛋白激酶Cδ(PKCδ)、核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达,并探讨其作用。方法采用成组设计,将30只Wistar大鼠(雌雄各半)按体质量(80~100 g)采用随机数字表法分为对照组、饮水型砷中毒组(水砷组)和低、中、高砷粮食污染组(低、中、高砷组),每组6只。对照组常规喂养,水砷组自由饮用100 mg/L三氧化二砷(As2O3)水溶液,低、中、高砷组分别喂饲病区高砷煤烘烤玉米粉所配制的饲料(砷含量分别为25、50、100 mg/kg),均喂养3个月。大鼠处死前,抽取外周静脉血2 ml,检测血清丙二醛(MDA)含量,铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力;处死后,分离肝脏,检测肝脏二酯酰甘油(DAG)含量、PKCδ和Nrf2 mRNA和蛋白表达;采用Pearson相关分析方法,对蛋白表达进行相关性分析。结果大鼠血清MDA含量,SOD1、GPx活力组间比较差异有统计学意义(F=26.441、3.327、120.645,P均< 0.05),其中各染砷组血清MDA含量均高于对照组(P均< 0.05);SOD1、GPx活力均低于对照组(P均< 0.05)。大鼠肝组织DAG含量,Nrf2 mRNA表达组间比较差异有统计学意义(F=8.237、8.656,P均< 0.05),其中各染砷组肝组织DAG含量分别为(2.67 ± 0.25)、(2.36 ± 0.19)、(2.54 ± 0.22)、(2.69 ± 0.32)μg/L,均高于对照组[(2.05 ± 0.24)μg/L,P均< 0.05];各染砷组肝组织Nrf2 mRNA表达分别为1.16 ± 0.09、1.09 ± 0.12、1.14 ± 0.15、1.27 ± 0.16,均明显高于对照组(0.94 ± 0.08,P均< 0.05)。大鼠肝组织细胞膜和细胞质中磷酸化PKCδ(pPKCδ)蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=15.925、6.699,P均< 0.05),各染砷组肝组织细胞膜pPKCδ蛋白表达分别为0.49 ± 0.06、0.33 ± 0.05、0.37 ± 0.06、0.50 ± 0.08,除低砷组外均高于对照组(0.28 ± 0.04,P均< 0.05);各染砷组肝组织细胞质中pPKCδ蛋白表达分别为0.38 ± 0.06、0.31 ± 0.05、0.35 ± 0.05、0.36 ± 0.05,均高于对照组(0.24 ± 0.05,P均< 0.05)。大鼠肝组织细胞质及细胞核Nrf2、磷酸化Nrf2(pNrf2)蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=9.024、9.709、10.396、25.532,P均< 0.05),其中各染砷组肝组织细胞质Nrf2蛋白表达分别为0.76 ± 0.09、0.58 ± 0.07、0.64 ± 0.09、0.73 ± 0.07,除低砷组外均高于对照组(0.52 ± 0.08,P均< 0.05);pNrf2蛋白表达分别为0.50 ± 0.07、0.43 ± 0.06、0.48 ± 0.06、0.54 ± 0.07,均高于对照组(0.32 ± 0.06,P均< 0.05)。各染砷组肝组织细胞核中Nrf2蛋白表达分别为0.44 ± 0.07、0.41 ± 0.06、0.47 ± 0.06、0.54 ± 0.09,均高于对照组(0.30 ± 0.05,P均< 0.05);pNrf2蛋白表达分别为0.35 ± 0.04、0.29 ± 0.04、0.41 ± 0.05、0.43 ± 0.06,均高于对照组(0.20 ± 0.03,P均< 0.05)。相关性分析显示,DAG含量与肝细胞膜和细胞质pPKCδ蛋白表达均呈正相关(r=0.663、0.604,P均< 0.05);细胞膜pPKCδ蛋白表达与细胞质和细胞核pNrf2蛋白表达均呈正相关(r=0.642、0.670,P均<0.05)。结论砷可诱导氧化应激性肝损伤;同时,砷可上调Nrf2 mRNA表达和蛋白表达、增加pPKCδ蛋白表达和DAG含量,促进pPKCδ发生膜转位后活化,进而磷酸化Nrf2使其发生核转位激活,从而调节机体的氧化应激反应。

Nrf2和Keapl mRNA表达在燃煤型砷中毒肝损伤中作用

目的探讨Nrf2和Keapl mRNA表达在燃煤型砷中毒肝损伤中的作用。方法选择贵州省燃煤污染型砷中毒病区133例砷暴露者为砷暴露组(包括病区非病人组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组),以非砷污染村34名健康居民为对照组;实时荧光定量PCR检测外周血Nrf2和Keapl mRNA表达,化学法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活力和丙二醛(MDA)含量。结果对照组、病区非病人组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组Nrf2 mRNA表达量分别为0.650 5、0.690 4、0.877 8、1.283 4和1.393 5,Keapl mRNA表达量分别为1.569 1、1.451 0、1.395 4、1.048 9和0.882 0;与对照组、病区非病人组和无明显肝病组比较,轻度和中重度肝病组Nrf2 mRNA表达上调,Keapl mRNA表达下调,SOD活力降低(P<0.05);中重度肝病组GSH-Px和TrxR活力降低,MDA含量升高(P<0.05)。Nrf2 mRNA表达与酶活力呈负相关、与MDA含量呈正相关,Keapl mRNA表达与酶活力呈正相关(P<0.05)。结论燃煤砷可能通过调控Nrf2和Keapl mRNA表达量,调节机体氧化应激水平,参与砷中毒肝损伤的发生发展。

基于DNA损伤与修复抑制初探银杏叶片对燃煤污染型砷中毒患者肝损伤的影响

目的探讨DNA损伤和修复抑制在银杏叶片对燃煤污染型砷中毒患者肝损伤影响中的作用。方法2017年3月在贵州省兴仁县雨樟镇交乐村砷中毒病区,按照《地方性砷中毒诊断》(WS/T 211-2015)标准和《职业性中毒性肝病诊断标准》(GBZ 59-2010),筛选出52例砷中毒患者作为银杏叶片干预组,49例砷中毒患者作为干预对照组。银杏叶片按照临床常用方法给药,口服3个月(1片/次,3次/d),所有对象干预期间未给予其他药物,干预对照组给予安慰剂,方法同银杏叶片干预组。选择12 km以外非燃用高砷煤、临床检测无肝功能异常的41例居民作为正常对照组。干预前和3个月干预结束时进行体检。在获得本人知情同意并签署知情同意书的情况下,收集晨尿及外周静脉血,分别采用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)检测尿砷含量,全自动生化分析仪检测肝功能生化指标[白蛋白(ALB)、白蛋白/球蛋白比值(A/G)、胆碱酯酶(CHE)、总胆汁酸(TBA)],单细胞凝胶电泳实验检测DNA损伤情况,荧光定量PCR法检测miR-145(修复抑制指标)的表达。结果共纳入研究对象116人,正常对照组41人、银杏叶片干预组39人、干预对照组36人,银杏叶片干预组和干预对照组在年龄、性别比例、吸烟习惯及饮酒方面与正常对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。干预前银杏叶片干预组尿砷含量、TBA水平、DNA损伤程度[彗星尾DNA百分含量(TailDNA%)和彗星尾矩(OTM)]、血浆miR-145表达水平[(38.75±19.09)μg/g Cr、(11.13±1.55)μmol/L、8.50±0.88、7.43±0.68、5.78±0.75]均高于正常对照组[(11.62±5.33)μg/g Cr、(5.36±0.87)μmol/L、5.24±0.33、4.71±0.29、2.05±0.27],差异均有统计学意义(P均<0.05);ALB、A/G和CHE水平均低于正常对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。干预后,银杏叶片干预组尿砷含量、TBA水平、DNA损伤程度(TailDNA%和OTM)、血浆miR-145表达水平均低于干预前,差异均有统计学意义(P均<0.05);ALB、A/G和CHE水平均高于干预前,差异均有统计学意义(P均<0.05)。干预对照组干预前后上述指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。相关性分析结果显示,干预后银杏叶片干预组DNA损伤程度(TailDNA%和OTM)与ALB、A/G、CHE水平均呈负相关(r=-0.34、-0.33、-0.48,-0.31、-0.31、-0.42,P均<0.05),与TBA水平呈正相关(r=0.49、0.48,P均<0.05);miR-145与ALB、A/G、CHE水平均呈负相关(r=-0.26、-0.23、-0.38,P均<0.05),与TBA水平呈正相关(r=0.32,P<0.05);DNA损伤程度与miR-145表达均呈正相关(r=0.65、0.52,P均<0.05)。结论银杏叶片可改善燃煤污染型砷中毒所致肝损害,该作用机制与其抑制miR-145表达和降低DNA损伤有关。

燃煤型污染砷中毒与肝损害关系

目的探讨燃煤型污染砷中毒与肝损害的关系,为砷致肝损害的"三早预防"提供依据。方法采用临床内科、影像学、病理学及生物化学方法对燃煤型污染砷中毒病区砷暴露人群进行临床症状体征、肝脏B超、病理形态学检查及血清学肝损害指标检测。结果砷暴露者有不同程度的消化系统主观症状;轻、中、重度组砷中毒患者的B超异常率分别为12%,34%和64%(P<0.01);砷中毒患者肝脏病理学改变以肝组织纤维增生改变最为明显。血清学检查发现:谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)(20.42±11.10)U/L,羟脯氨酸(Hyp)(29.5±7.3)μg/mL,血清透明质酸(HA)(68.48±51.80)μg/L,轻、中、重度组皆明显高于对照组(P<0.01);总胆汁酸(6.84±4.45)μmol/L、γ-谷氨酰转肽酶(49.71±28.50)U/L,Ⅲ型前胶原(92.01±43.77)μg/L和Ⅳ型胶原(89.33±14.41)μg/L,在中、重度组明显高于对照组(P<0.01)。结论GSTs、Hyp、HA的联合检测对早期发现和诊断砷所致肝细胞损害及肝纤维化有重要参考价值;肝脏B超检查及选择性监测上述指标,对判断肝损害的发生发展及针对性治疗有实际意义。

煤矿井下作业工人脂肪肝的发病情况及营养状况

目的探讨煤矿井下工人脂肪肝发病情况及与体力劳动、膳食营养状况的关系。为脂肪肝的防治提供科学依据。方法采用食物频数问卷法对206名煤矿井下作业工人和169名井上工人进行膳食调查和体格检杳,以肝脏超声检查确定脂肪肝发病并进行统计分析。结果某矿区从事极重体力劳动的井下作业工人脂肪肝的发病率为8.25%,从事轻体力劳动的井上工人脂肪肝的发病率为14.79%。两者间差异有统计学意义(P<0.05)。井下和井上工人膳食中食用油的摄入分别为37和43g,均显著高于中国营养学会推荐的参考摄入量(<25g)。蔬菜、水果的摄入量分别为240、251和83、92g,低于中国营养学会推荐的参考摄入量。相应的2组工人能量的摄入均高于每日营养素供给量标准(RNI),维生素B2、维生素C、Ca等营养素的摄入低于RNI,2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论从事极重体力劳动的煤矿井下作业工人脂肪肝的发病率低于从事轻体力劳动的井上工人。两者的膳食中食用油的摄入量大大高于中国营养学会推荐的参考摄入量,蔬菜、水果的摄入量又低于中国营养学会推荐的参考摄入量。提示煤矿工人应注意调整膳食结构,同时井上工人应加强体育锻练,减少脂肪肝的发生。

蛋白激酶Cδ对燃煤污染型砷中毒肝损伤的调控机制

目的 探讨蛋白激酶Cδ（protein kinase C8,PKCδ） mRNA转录和蛋白表达在燃煤型砷中毒肝损伤中的作用.方法 人群研究：选取符合条件的贵州省燃煤污染型砷中毒病区133例砷暴露者纳入砷暴露组,包括病区非病例组（25例）、无明显肝病组（38例）、轻度（43例）和中重度（27例）肝病组；选取非砷污染村34名健康居民纳入对照组.采集上述研究对象的尿液和外周血,测定尿砷含量及外周血PKCδ mRNA表达水平.动物实验：采用随机数字表法将30只Wistar大鼠分为对照组、饮水型砷中毒组和燃煤污染型砷中毒组（即低、中、高砷粮食污染组）,每组6只.对照组常规喂养,饮水型砷中毒组给予10 mg/kg As2O3水溶液,燃煤污染型砷中毒组喂饲用病区高砷煤烘烤的玉米粉所配制的饲料（砷含量分别为25、50和100 mg/kg）,均喂养3个月.测定其尿砷含量、外周血和肝组织PKCδ mRNA表达水平及肝组织磷酸化蛋白激酶C8 （phosphorylated protein kinase C8,pPKCδ）表达水平.结果 非病例组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组尿砷含量中位数（四分位数）分别为25.58（18.62 ～ 40.73）、56.66（38.93 ～ 76.77）、64.90（39.55 ～98.37）和75.47（41.30～109.70） μg/g肌酐,除病区非病例组外,其余组均高于对照组[23.34（17.84～37.45） μg/g肌酐]（P值均＜0.05）.大鼠饮水型砷中毒组和低、中、高砷粮食污染组尿砷含量分别为2223.61（472.98～3976.73）、701.16（194.01～1300.27）、1060.94（246.33～2585.47）和3101.11 （1919.97～5407.07） μg/g肌酐,均高于对照组[94.32（22.65 ～ 195.25） μg/g肌酐]（P值均＜0.05）；肝组织中pPKCδ蛋白表达水平分别为324.83±25.06、278.50±30.57、308.83±34.67、326.33±35.09,均高于对照组（240.17±28.07）（P值均＜0.05）；肝组织细胞膜中pPKCδ蛋白表达水平分别为0.49±0.06、0.33±0.05、0.37±0.06、0.50±0.08,均高于对照组（0.28±0.04）（P值均＜0.05）；细胞浆中pPKCδ蛋白表达水平分别为0.38±0.06、0.31±0.05、0.35±0.05、0.36±0.05,均高于对照组（0.24±0.05）（P值均＜0.05）.结论 砷可能通过调控pPKCδ蛋白表达,诱导其膜转位活化,导致燃煤型砷中毒肝损伤的发生发展.

花姜酮对燃煤型砷中毒大鼠肝组织Bax、Bcl-2蛋白表达及肝纤维化的影响

目的探讨花姜酮对燃煤型砷中毒大鼠肝组织Bax、Bcl-2蛋白表达及肝纤维化的影响。方法将18只健康清洁级断乳Wistar大鼠(体质量80~100 g)随机均分为三组,对照组大鼠喂标准饲料90 d后处死;造模治疗组大鼠喂含砷100 mg/kg的饲料,且由股静脉穿刺给予10 mg/kg花姜酮溶液,1次/周,持续90 d后处死;单纯造模组大鼠同样喂含砷100 mg/kg的饲料,且由股静脉穿刺给予等量的生理盐水,1次/周,持续90 d后处死。比较三组大鼠毛发与尿液中砷含量、血清肝功能指标,并采用Western blot法检测肝组织Bax、Bcl-2、α-SMA、TGFβ-1蛋白表达水平。结果三组大鼠的毛发与尿液中砷含量、血清AST与ALT水平、肝组织Bax、Bcl-2、α-SMA、TGFβ-1蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组的毛发与尿液中砷含量、血清AST与ALT水平、肝组织Bax、α-SMA、TGFβ-1的相对表达量显著低于单纯造模组与造模治疗组,肝组织Bcl-2的相对表达量显著高于单纯造模组与造模治疗组;造模治疗组的毛发与尿液中砷含量、血清AST与ALT水平、肝组织Bax、α-SMA、TGFβ-1的相对表达量显著低于单纯造模组,肝组织Bcl-2的相对表达量显著高于单纯造模组。结论花姜酮能显著缓解燃煤型砷中毒大鼠的肝损伤和肝纤维化,具有一定抗砷中毒和护肝功能,可能与其通过下调肝组织Bax表达、上调Bcl-2表达发挥抗凋亡作用有关。

铜锌超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶1 mRNA表达及其酶活力与砷中毒肝损伤关系

[目的]了解燃煤砷暴露人群外周血中铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)1转录表达与酶活力的关系,探讨其在燃煤型砷中毒肝损伤发生发展中的作用。[方法]选择燃煤型砷中毒病区133例砷暴露者为砷暴露组(包括病区非病例组25例和病例组108例),将病例组分为无明显肝病组(38例)和肝病组(分为轻度肝病组43例和中重度肝病组27例);在非砷暴露村选择34例经健康体检无异常的居民作为对照组。采集上述观察对象的外周血,采用实时荧光定量PCR法检测Cu/Zn-SOD mRNA和GSH-Px1 mRNA表达,化学法检测SOD、Cu/Zn-SOD和GSH-Px活力。[结果]与对照组比较,肝病组Cu/Zn-SOD mRNA和GSH-Px1 mRNA表达量均明显升高(P<0.05或P<0.01);与病区非病例组比较,肝病组Cu/Zn-SOD mRNA表达量明显升高(P<0.05);各病例组间比较差异无统计学意义。与对照组和病区非病例组比较,肝病组SOD、Cu/Zn-SOD和GSH-Px活力均明显降低(P<0.05或P<0.01);与无明显肝病组比较,轻度肝病组SOD和Cu/Zn-SOD活力明显下降(P<0.05),而中重度肝病组三种酶活力均明显下降(P<0.05或P<0.01);与轻度肝病组比较,中重度肝病组SOD活力明显降低(P<0.05)。Cu/Zn-SOD和GSH-Px1转录表达与肝损伤程度呈正相关(P<0.01),酶活力与肝损伤程度呈负相关(P<0.01),且转录表达与其酶活力均呈负相关(P<0.01)。[结论]砷可能通过调控Cu/Zn-SOD和GSH-Px1的转录表达水平而影响其酶活力,参与砷中毒肝损伤的发生发展。

肝生化指标在燃煤型砷中毒中诊断价值ROC曲线评价

目的应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)探讨肝生化指标在燃煤型砷中毒中的诊断价值。方法2014年1月以贵州省兴仁县燃煤型砷中毒病区为调查点,采用生物化学法检测调查对象肝生化指标。绘制ROC曲线并计算曲线下面积(AUC)。结果砷中毒组血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量和白球比(A/G)均低于对照组(P<0.01),碱性磷酸酶(ALP)活性和总胆汁酸(TBA)含量均高于对照组(P<0.05);中、重度砷中毒组血清谷氨酰胺转移酶(γ-GT)高于对照组(P<0.05);与对照比较,轻度组ALB、A/G、TBA、TP、ALP的AUC分别为0.79、0.71、0.64、0.63、0.60(P<0.05);敏感度A/G>ALP>ALB>TBA>TP;中度组ALB、TBA、A/G、TP、ALP、γ-GT的AUC值分别为0.86、0.81、0.76、0.67、0.61、0.59(P<0.05),TBA>ALB>A/G>ALP>TP>γ-GT。重度组ALB、TBA、A/G、TP、ALP、γ-GT的AUC值分别为0.89、0.87、0.79、0.72、0.67、0.63(P<0.01),TBA>A/G>ALB>TP>ALP>γ-GT。结论 ALB、TBA含量和A/G有助于砷中毒的早期诊断及分度诊断;TP、ALP、γ-GT可作为砷中毒辅助诊断和分度诊断的参考指标。

核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件结合能力及其下游基因表达与燃煤型砷中毒肝损伤关系探讨

目的 观察贵州省燃煤污染型砷中毒病区砷暴露者外周血核因子E2相关因子2（Nrf2）与下游抗氧化反应元件（ARE）序列的结合能力（Nrf2-ARE结合能力）以及抗氧化酶基因的表达,为砷致机体肝氧化损伤机制的研究提供依据.方法 以贵州省兴仁县燃煤型砷中毒病区交乐村和长庆村为调查点,通过健康体检,选择161例砷暴露者为砷暴露组,按照《地方性砷中毒诊断标准》（WS/T 211-2001）分为病区非病例组（21例）和病例组（140例）,病例组参照《职业性中毒性肝病诊断标准》（GBZ 59-2010）进一步分为轻度肝病组（52例）、中重度肝病组（36例）,其余病例为无明显肝病组（52例）;同时选择相邻的非病区上坝田村45例居民作为对照组.采集观察对象外周血提取血细胞核蛋白：凝胶电泳迁移试验（EMSA）检测其外周血细胞核内Nrf2-ARE结合能力,实时荧光定量PCR检测铜锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶l（GSH-Px1） mRNA相对表达量.结果 Nrf2-ARE结合能力检测结果：各组人群外周血Nrf2-ARE结合能力组间比较差异有统计学意义（F=116.033,P＜0.05）.其中与对照组（3.14±1.34）比较,病区无明显肝病组（5.17±2.06）、轻度肝病组（13.13±4.84）及中重度肝病组（32.35±14.76） Nrf2-ARE结合能力均升高（P均＜0.05）;与病区非病例组（5.15±3.23）及无明显肝病组比较,轻度肝病组及中重度肝病组Nrf2-ARE结合能力升高（P均＜0.05）;与轻度肝病组比较,中重度肝病组Nrf2-ARE结合能力升高（P＜0.05）.Cu/Zn-SOD和GSH-Px1 mRNA表达结果：病区无明显肝病组、轻度肝病组及中重度肝病组Cu/Zn-SOD mRNA相对表达量[中位数（M）：1.127 8、1.257 8、1.6320]和GSH-Px1 mRNA相对表达量（M：1.334 5、1.940 9、2.062 6）均高于对照组（M：0.961 8、0.884 3）,组间比较差异均有统计学意义（x2=13.065、19.934,P均＜0.05）;轻度肝病组及中重度肝病组GSH-Px1 mRNA相对表达量均高于病区非病例组（M：1.248 4）,组间比较差异均有统计学意义（P均＜0.05）.相关性分析：砷暴露人群外周血Nrf2-ARE结合能力与Cu/Zn-SOD和GSH-Px1 mRNA表达量呈正相关（r=0.271、0.292,P均＜0.01）.结论 砷所致Nrf2-ARE结合能力升高参与了砷对Nrf2下游抗氧化酶基因表达的调控,该过程可能参与了燃煤型砷中毒肝损伤的发生发展.

大屯煤矿井下掘进作业人员肝脏健康状况

目的通过调查分析大屯煤矿(姚桥矿和徐庄矿)895名井下掘进工肝脏健康状况,找出问题,为进一步改善卫生防护措施和制定健康保健策略提供科学依据。方法采用自行设计的《接尘作业人员调查表》对大屯煤矿井下作业人员进行问卷调查,B超检查由大屯煤矿医院内科医师完成,肝脏生化指标检查由医院检验科完成,对所有资料用EpiData3.1软件建立数据库、State 10.0软件对调查结果进行统计分析。结果矿工脂肪肝检出率为29.05%,丙氨酸氨基转移酶(ALT)异常率为8.49%。大屯两个煤矿比较,姚桥矿井下掘进工ALT活力、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)增高检出率明显高于徐庄矿,脂肪肝、肝囊肿的异常检出率也均明显高于徐庄矿(P<0.01)。经常饮酒是脂肪肝主要的独立危险因素之一。结论脂肪肝是大屯煤矿掘进工最主要的肝脏疾病之一,矿工肝生化指标异常以及脂肪肝等肝脏病变检出率高与工人生活习惯有一定的关系。

醌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸脱氢酶1和血红素氧合酶1 mRNA及蛋白表达与燃煤型砷中毒肝损伤关系探讨

目的了解贵州省燃煤型砷中毒病区砷暴露者外周血中核因子E2相关因子2（Nff2）诱导的下游醌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADH）脱氢酶1（NQ01）和血红素氧合酶1（HO-1）mRNA及蛋白表达情况，探讨其在燃煤型砷中毒肝损伤发生发展中的作用。方法以贵州省兴仁县燃煤型砷中毒病区交乐村和长庆村为调查点，在健康体检基础上选择161例砷暴露者为砷暴露组，按照《地方性砷中毒诊断标准》（WS／T211-2001）分为病区非病例组（21例）和病例组（140例）。病例组参照《职业性中毒性肝病诊断标准》（GBZ59-2010）进一步分为轻度肝病组（52例）、中重度肝病组（36例），其余病例为无明显肝病组（52例）；同时以相邻的非病区村45例居民作为对照组；采集研究对象外周血，实时荧光定量PCR检测NQ01和HO-1 mRNA相对表达量，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测NQ01和HO-1蛋白表达水平。结果①NQO1和HO-1 mRNA表达结果：随砷暴露人群肝损伤程度的加重，外周血NQO1和HO-1 mRNA相对表达量逐渐升高（F=5．548、10．961，P均〈0．05）。其中，轻度肝病组NQO1 mRNA相对表达量（中位数，0．918）高于对照组（0．576，P〈0．05），中重度肝病组NQO1 mRNA相对表达量（1．243）高于对照组、病区非病例组（0．653）、无明显肝病组（0．636）、轻度肝病组（P均〈0．05）；病区非病例组、无明显肝病组、轻度肝病组及中重度肝病组HO-1 mRNA相对表达量（1．059、1．225、11553、1．604）均高于对照组（0．767，P均〈0．05）；轻度肝病组HO-1 mRNA相对表达量高于病区非病例组（P〈0．05）；中重度肝病组HO-1 mRNA相对表达量高于病区非病例组、无明显肝病组（P均〈0．05）。②NQO1和HO-1蛋白表达结果：随砷暴露人群肝损伤程度的加重，血清中NQO1和HO-1蛋白表达水平逐渐升高（F=19．685、17．725，P均〈0．05）。其中，无明显肝病组、轻度肝病组及中重度肝病组NQO1和HO-1蛋白表达[NQO1：（6．272±0．744）、（6．336±0．628）、（6．714±0．540）U／L；HO-1：（45．150±4．813）、（45．283±5．049）、（48．610±5．365）U／L]显著高于对照组和病区非病例组[NQO1：（5．550±0．730）、（5．750±0．427）U／L；HO-1：（39．856±5．249）、（42．375±3．014）U／L，P均〈0．05]，中重度肝病组NQO1和HO-1蛋白表达显著高于无明显肝病组和轻度肝病组（P均〈0．05）。结论砷暴露后NQO1和HO-1 mRNA表达及蛋白表达增强，二者与燃煤型砷中毒肝损伤的发生发展密切相关。

燃煤污染型砷中毒慢性肝损伤患者临床特征及谷胱甘肽治疗情况分析

目的探讨燃煤污染型砷中毒(简称燃煤型砷中毒)慢性肝损伤患者临床特征及谷胱甘肽的治疗效果。方法2017年3月至2018年12月,以滨州市人民医院收治的71例燃煤型砷中毒肝损伤患者为研究对象,采用抽签法分为观察组(37例)和对照组(34例)。两组患者均给予常规治疗,包括静脉滴注复合氨基酸、口服B族维生素等,并静脉滴注5.0 g溶于250 ml 5%葡萄糖的维生素C混合液,1次/d,治疗4周(1个疗程);观察组同时静脉滴注1.8 g溶于250 ml 5%葡萄糖的谷胱甘肽,1次/d,治疗4周(1个疗程)。观察患者临床特征,并比较两组患者治疗前后肝功能指标[丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)、总胆红质(TBIL)、直接胆红素(DBIL)]及血清抗氧化指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)]变化情况,以及临床疗效。结果71例燃煤型砷中毒肝损伤患者,心电图检查异常率为64.79%(46/71),胸部X线检查异常率为26.76%(19/71)。治疗后两组患者肝功能指标ALT、AST、TBIL、DBIL低于治疗前[观察组治疗前:(131.82±25.62)、(109.84±26.28)U/L,(81.47±20.93)、(57.38±15.25)μmol/L;观察组治疗后:(58.93±12.03)、(51.20±10.57)U/L,(25.66±7.94)、(16.49±4.92)μmol/L;对照组治疗前:(128.95±31.20)、(107.39±29.81)U/L,(83.21±17.95)、(55.39±16.30)μmol/L;对照组治疗后:(76.42±15.73)、(74.33±14.80)U/L,(36.72±9.32)、(23.74±7.35)μmol/L,P均<0.05],且治疗后观察组患者各肝功能指标明显低于对照组(P均<0.05)。治疗后两组患者血清抗氧化指标MDA、SOD、GSH-Px明显高于治疗前[观察组治疗前:(25.47±3.98)μmol/L,(85.72±23.54)、(1729.84±379.50)U/L;观察组治疗后:(46.31±7.49)μmol/L,(122.31±28.53)、(2410.29±512.31)U/L;对照组治疗前:(26.02±4.11)μmol/L,(84.95±21.03)、(1749.52±405.28)U/L;对照组治疗后:(38.92±6.27)μmol/L,(103.12±25.68)、(2097.42±478.52)U/L,P均<0.05],且治疗后观察组患者各血清抗氧化指标显著高于对照组(P均<0.05)。观察组患者临床治疗总有效率(91.89%,34/37)显著高于对照组(76.47%,26/34,χ2=4.254,P<0.05)。结论燃煤型砷中毒慢性肝损伤患者可同时存在机体多系统损伤。谷胱甘肽可有效改善患者临床症状、改善肝功能,其作用可能与抗氧化功能的改善有关,值得临床推广。