眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及机制

目的研究中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对血小板聚集的影响及其相关的机制。方法测定atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导血小板聚集的影响情况,并通过蛋白质免疫印迹检测atrase A对血小板膜糖蛋白和血管假血友病因子的酶切情况。结果中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A能明显抑制由瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集,这种抑制作用呈量效、时效关系。而atrase A和血小板预孵5min后对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸诱导的血小板聚集有微弱的抑制作用,预孵时间延长至30min对血小板聚集有明显的抑制作用。蛋白质免疫印迹结果显示atrase A能特异性酶切血小板膜糖蛋白GPIb,但对vWF几乎没有酶切作用。结论中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导的血小板聚集均有抑制作用,其中对瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集具有明显的抑制作用,其机制是通过酶切血小板膜糖蛋白GPIb。

中华眼镜蛇毒心脏毒素对人肝癌细胞株细胞膜的影响

目的和方法：运用５７０ 型粘附式细胞仪光漂白后荧光再分布法测定单个细胞膜脂流动性的动态变化和流式细胞仪测定细胞群细胞膜电位，以观察中华眼镜蛇毒心脏毒素对人肝癌细胞株细胞膜的影响。结果：心脏毒素使肝癌细胞膜脂流动性下降，并且使肝癌细胞膜电位下降。

眼镜蛇毒直接溶解因子对人肝癌细胞株细胞内游离钙动态变化的影响

用荧光染料FIuo-3标记人肝癌细胞株H_(7402)细胞内游离钙,在粘附式细胞仪观察检测单个细胞内游离钙水平的动态变化,细胞在无钙环境中,直接溶解因子(DLF)刺激下细胞内游离钙迅速升高,达到峰值后下降;在细胞培养皿中加入1mmol/L CaCl_2,DLF使胞浆游离钙持续升高;加入10mmol/L CaCl_2,DLF刺激后胞浆游离钙水平无明显变化,表明DLF能引起胞内Ca^(2+)释放和胞外Ca^(2+)内流,细胞外高浓度Ca^(2+)能阻断DLF升高细胞内Ca^(2+)浓度的 作用。

抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备、纯化和保护性实验研究

目的:探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY)的制备方法及其生物学活性,为替代马源性抗蛇毒血清奠定基础。方法:眼镜蛇毒原毒免疫母鸡,采用水稀释-硫酸铵盐析-阴离子交换层析三级提取法纯化IgY;SDS-PAGE测定各级提取物的抗体纯度;间接ELISA法和双向免疫扩散法观察效价变化;动物体外中和实验检测其生物活性。结果:卵黄经水稀释法及经60%硫酸铵盐析蛋白回收率为40.36%;进一步经阴离子交换层析,总蛋白回收率14.86%,效价提高24倍;IgY分子量约为220 kD,由两个亚基组成;体外中和试验表明,2.28 mg/kg特异性IgY能完全中和2 LD50的眼镜蛇毒,保护小鼠免受眼镜蛇毒的攻击。结论:以眼镜蛇毒原毒为免疫源,经水提、盐析、层析三级提取,可从鸡卵黄中获得高纯度、高活性的特异性IgY。

IL-2与眼镜蛇毒协同抗肿瘤作用的实验研究

本文研究了白细胞介素2(IL-2)和眼镜蛇毒对小鼠移植鼠肝癌的抑制作用以及对荷移植窟小鼠NK细胞杀伤活性的影响。结果表明:IL-2或眼镜蛇毒单独使用时,前者能明显增强荷瘤鼠的NK细胞活性,可是抑瘤作用不很明显;后者虽然严重地减弱荷瘤鼠的NK活性,但抑瘤作用反而较前者为强。当两者联合使用时,其抑瘤作用及NK活性则都显著提高(P<0.005)。提示IL-2与眼镜蛇毒具有良好的协同抗小鼠移植鼠肝癌的作用。

眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞生长及其生化机制初探

目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分（CCVAF）抑制新生牛肺主动脉血管内皮细胞（BAVEC）生长的作用及其生化机制。方法用MTT法测定CCVAF抑制BAVEC的增殖活性,用伊红-考马斯亮蓝法观察细胞骨架,罗丹明-鬼笔环肽荧光探针F-actin骨架蛋白定位,荧光标记流式细胞法测荧光强度表胞内钙离子浓度[Ca^2＋]i及分光光度法测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）及一氧化氮（NO）的含量。结果CCVAF（0.625-20μg/mL）剂量依赖性地抑制内皮细胞的生长,IC50=2.45μg/mL。CCVAF与BAVEC共同孵育后,引起细胞间连接减少,细胞F-actin分布混乱;细胞上清液中LDH活力及NO的含量及胞内[Ca^2＋]i分别增加。结论CCVAF抑制BAVEC增殖,可能与CCVAF导致细胞骨架改变,LDH及NO分泌量及胞内Ca^2＋浓度增加等生化机制有关。

一种水解血小板膜糖蛋白GPIb的眼镜蛇毒组分的分离纯化与鉴定

目的 建立从中华眼镜蛇毒中分离、纯化可水解血小板膜糖蛋白Ｉｂ（ｐｌａｔｅｌｅｔｍｅｍｂｒａｎｅｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎＩｂ，ＧＰＩｂ）组分的方法。方法 肝素亲和层析，分子筛层析，ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）。结果 经ＨｅｐａｒｉｎＳｅｈｐａｒｏｓｅＣＬ６Ｂ亲和层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１５０分子筛层析，从中华眼镜蛇毒纯化出可降解纤维蛋白原和ＧＰＩｂ的活性组分，回收率为０－８８％，ＳＤＳＰＡＧＥ证实此组分为相对分子量约４７１００的单肽链蛋白。结论 此方法成功地从中华眼镜蛇毒中纯化出了水解ＧＰＩｂ的组分，具有高效、简便的特点。

普通离子交换剂用于HPLC柱层析法快速分离眼镜王蛇毒(英文)

目的 为了经济快速分离眼镜王蛇(Ophiophagushannah,Oh)蛇毒中的毒素成分。 方法 用普通离子交换剂于高效液相色谱柱 (HPLC) TSKgel SP-Toyopearl 65 0 SF (4× 1 5 0 mm)层析法 ,实验取得最佳分离条件后 ,将蛇毒样品上柱后进行梯度洗脱 ,各洗脱峰收集后在 Cosmosil 5 C4-AR-3 0 0柱 (4 .6× 1 5 0 mm)上进行逆相 HPLC分析。非单峰组分再进行 HPLC凝胶过滤柱TSKgel Toyopearl HW-40 Fine(4× 2 5 0 mm)层析 ,层析峰组分再进行 HPLC逆相分析。 结果 眼镜王蛇毒经HPLC离子交换柱层析获得了 1 6个蛋白组分 ,其中有 5个组分经逆相 HPLC分析单一组分 ;另外的复合性组分再进行 HPLC凝胶过滤柱层析后又得到 5个单峰蛋白组分。 结论 HPLC离子交换柱层析对分离蛇毒蛋白很有实用价值 ,特别是蛇毒样品量少的情况下 (1 0 ug)也能较好分离。还具有分离时间短 (1 h左右 ) ,无须低温条件等优点。

广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒冻干粉的鉴别及质量控制的研究 V．广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸分析

本文采用日立８３５－５０型氨基酸自动分析仪测定了广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸成分，结果表明两种蛇毒的氨基酸组成基本相同，但多种氨基酸的含量存在明显差异，为蛇毒鉴别和质控提供实验依据。

两蛇科毒蛇的毒腺γ-谷氨酰转肽酶组织化学的定位

我们进行眼镜蛇科与蝰蛇科蝰亚科的两种毒蛇:即中华眼镜蛇与罗氏蝰蛇的毒腺组织化学的酶的研究,发现γ-GT存在于大体标本及冰冻切片的腺体上皮层内,中华眼镜蛇腺体γ-GT酶染色强于蝰蛇。

乙醇对中华眼镜蛇毒毒性的影响

目的为了探索乙醇对眼镜蛇毒毒性的影响。方法将眼镜蛇毒不同浓度致死量经不同浓度乙醇体外处理后,分别于小白鼠皮下注射、口服,将致死量蛇毒皮下注射后的小白鼠立即于局部注射乙醇,观察蛇毒毒性情况。结果小白鼠经皮下注射致死量眼镜蛇毒后,在局部注射50%(或异蛇米酒)、75%乙醇0.1～0.2ml有一定的保护作用;口服100倍皮下注射致死量眼镜蛇毒未发现有毒性表现,口服经50%乙醇处理后的眼镜蛇毒(100倍皮下注射致死量)未增加小鼠死亡率。结论眼镜蛇毒体外经过乙醇处理后毒性有所下降。口服少量的眼镜蛇毒是安全的。眼镜蛇毒与乙醇混合后口服未见蛇毒毒性增加。