皖南地区眼镜蛇毒镇痛组分对大鼠炎性痛作用机制探讨

目的:探讨皖南地区眼镜蛇毒镇痛组分(CVAF)对大鼠炎性痛作用效应及其可能机制。方法:40只雄性SD大鼠在测定基础痛阈后随机分为4组(n=10):正常对照组(NC组)、炎性痛模型组(CFA组)、炎性痛模型+CVAF组(CFA+CVAF组)和炎性痛模型+吗啡组(CFA+Morphine组)。随后将36只SD雄性大鼠随机分成6组(n=6):正常对照组(NC组)、炎性痛模型组(CFA组)、炎性痛模型+CVAF组(CFA+CVAF组)、炎性痛模型+阿托品+CVAF组(CFA+Atr+CVAF)、炎性痛模型+纳洛酮+CVAF组(CFA+Nal+CVAF)和炎性痛模型+L-NAME+CVAF组(CFA+L-NAME+CVAF)。测定各组大鼠的热痛阈潜伏期(TWL)和机械痛阈值(MWT),制备脊髓匀浆,用于检测其中IL-1和TNF-α的表达。结果:与NC组相比,CFA组大鼠第1天开始TWL和MWT明显降低,出现热痛觉过敏和机械痛觉过敏,持续14d仍存在;CFA组大鼠脊髓匀浆IL-1和TNF-α表达均明显增高(P<0.01)。与CFA组相比,CFA组大鼠腹腔注射CVAF后其TWL和MWT均升高,表明炎性痛大鼠热痛觉过敏和机械痛觉过敏得到改善;脊髓匀浆中IL-1、TNF-α表达显著减少(P<0.01),显示CVAF通过抑制炎性因子的产生而发挥镇痛作用。与CFA+CVAF组大鼠相比,L-NAME+CVAF组大鼠明显增强了CVAF对炎性痛大鼠的镇痛作用,表现为TWL和MWT的明显升高(P<0.01);而CFA+Atr+CVAF组和CFA+Nal+CVAF组大鼠TWL和MWT均有不同程度的降低(P<0.01)。结论:初步阐明CVAF通过减少炎性因子的释放对炎性痛大鼠具有镇痛效应。阿片肽受体系统和胆碱能受体系统均部分参与了其对炎性痛大鼠的镇痛作用。

一种从蛇毒中纯化神经生长因子的新工艺

为了能从中华眼镜蛇蛇毒中简单快速地分离纯化神经生长因子 (一种治疗各种神经性损伤和神经退行疾病的药物 ,简称NGF) ,采用不同的色谱柱联用的方式对NGF的纯化工艺进行了研究。结果表明 ,采用DEAE SepharoseF F 和SephadexG 5 0二步柱色谱工艺可以从蛇毒中快速分离得到神经生长因子。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高效液相色谱分析 ,证明所得到的NGF为单一组分 ,相对分子质量约为 2 90 0 0。对 8d龄鸡胚背根神经节采用体外培养法 ,结果证明 ,所得NGF具有明显的促进神经纤维生长的生物活性。

眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用

为了得到高纯度眼镜蛇毒细胞毒素-4N,探索眼镜蛇毒中细胞毒素-4N(cytototxin-4N,CTX-4N)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC-T6)的增殖抑制作用。本研究采用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、Spehadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱结合的方法对眼镜蛇毒蛋白进行分离纯化。在每一步分离纯化过程中,采用CCK-8法检测各蛋白峰组分对HSC-T6细胞的增殖抑制作用活性,收集增殖抑制作用最强的CTX-4N峰。经SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度,Nano-LC-ESI-MS/MS质谱方法鉴定其组分,Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂检测CTX-4N对肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用,从而确定其药理作用。经DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、Spehadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱分离纯化后得到一个电泳纯度的蛋白,蛋白质谱鉴定为CTX-4N,分子量约为9.605 k D。不同浓度的CTX-4N作用HSC-T6细胞24 h后,随着其浓度的增大对HSC-T6细胞增殖抑制作用越强,呈剂量-效应关系,IC_(50)为(12.836±0.045)μg/m L。因此,本研究建立一种眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化方法,并确定了其对HSC-T6细胞的增殖抑制的药理作用随浓度的增加而增强,为进一步研究其药理作用提供一定的理论依据。

厚朴酚抑制小鼠乳腺上皮细胞炎症反应及其机制

中药抗炎治疗成为治疗乳腺炎的有效方法。厚朴酚(Magnolol)是从厚朴树皮中提取的一种多酚联萘化合物,已被证明具有潜在的抗炎活性。本研究旨在探讨厚朴酚对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺炎模型体内炎症的保护作用及其对脂多糖(LPS)刺激的小鼠乳腺上皮细胞(MMECs)的保护作用机制。使用组织病理学和髓过氧化物酶(MPO)测定组织损伤程度。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测促炎细胞因子的表达。Western blotting检测核因子-κB(NF-κB)、抑制性κB(IκBα)蛋白、p38、细胞外信号调节激酶、c-Jun氨基末端激酶的表达。结果表明,厚朴酚在体内和体外均能明显抑制脂多糖诱导的TNF-α、IL-6和IL-1β的产生。厚朴酚可降低LPS刺激的内皮细胞I-κBα、p65、p38、ERK和JNK的磷酸化水平。在体内实验中,还观察到厚朴酚对小鼠乳房炎组织的损伤作用。这些结果表明,厚朴酚通过抑制NF-κB/丝裂原活化蛋白激酶信号系统而减轻LPS刺激的炎症反应。说明厚朴酚可能是一种治疗乳腺炎的药物。