蝮蛇毒蛋白C激活物的纯化与抗血小板活性

目的 研究蝮蛇毒蛋白C激活物 (PCA)组分对兔血小板聚集性的影响。方法 借助DEAE Cellulose、SP SephadexC 5 0及SP SephadexG 75柱层析 ,以离子交换和凝胶过滤法从江浙蝮蛇 (AHV)粗毒中分离纯化PCA抗凝组分 ;SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测其纯度和分子量。比浊法测定血小板聚集率。结果 从AHV分离纯化的PCA抗凝组分经SDS PAGE电泳测定为单一区带 ,相对分子质量为 14 0 0 0左右 ,等电点 pH 4 .7;该PCA在体外对由诱聚剂ADP诱导的血小板聚集呈剂量依赖性的抑制作用 ,其IC50 为 12 5 μg/ml。PCA(1.0mg/kg) 体内给药可逆性抑制血小板聚集反应。结论 从蝮蛇毒中纯化的这种PCA抗凝组分可通过抑制血小板聚集而影响血凝过程。

中国黑眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin抑制血小板聚集和动脉血栓形成的作用

研究从中国黑眼镜蛇毒中纯化的中国黑眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin对血小板聚集 ,血浆纤维蛋白原水平和动脉血栓形成的影响 .采用比浊法测定兔血小板聚集率 ,双缩脲法测定血浆纤维蛋白原浓度 .应用胰蛋白酶损伤血管内皮的方法制作家兔颈动脉血栓模型评价natrahagin抑制血栓形成的作用 .结果发现 ,新西兰家兔natrahagin ( 0 .0 2 5～ 0 .1mg·kg- 1,iv)剂量依赖性地抑制二磷酸腺苷 ( 10 μmol·L- 1)和胶原 ( 10 0mg·L- 1)诱导的血小板聚集 ,显著降低血浆纤维蛋白原水平 .剂量为 0 .1mg·kg- 1时 ,血浆纤维蛋白原水平降低 33.3% .并能有效地抑制兔颈动脉血栓的形成 ,效应呈剂量依赖性 .0 .1mg·kg- 1剂量组对血栓形成的抑制率达到 4 5.4 % .研究提示 。

蛇毒抗补体蛋白atrase B抑制补体活化引起的血小板聚集

目的观察眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B抑制补体活化引起的血小板聚集。方法采用眼镜蛇毒因子激活补体诱导血小板聚集,观察atrase B对补体活化引起人凝胶过滤血小板聚集的影响,并采用流式细胞仪测定血小板膜P-选择素和GPⅡb/Ⅲa表达情况。结果Atrase B能抑制补体激活引起的血小板聚集和P-选择素、GPⅡb/Ⅲa在血小板膜上的表达。结论眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B能有效抑制补体激活引起的血小板活化、聚集。

眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及机制

目的研究中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对血小板聚集的影响及其相关的机制。方法测定atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导血小板聚集的影响情况,并通过蛋白质免疫印迹检测atrase A对血小板膜糖蛋白和血管假血友病因子的酶切情况。结果中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A能明显抑制由瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集,这种抑制作用呈量效、时效关系。而atrase A和血小板预孵5min后对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸诱导的血小板聚集有微弱的抑制作用,预孵时间延长至30min对血小板聚集有明显的抑制作用。蛋白质免疫印迹结果显示atrase A能特异性酶切血小板膜糖蛋白GPIb,但对vWF几乎没有酶切作用。结论中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导的血小板聚集均有抑制作用,其中对瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集具有明显的抑制作用,其机制是通过酶切血小板膜糖蛋白GPIb。

中国眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin对大鼠血液流变学的影响

观察中国眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin对大鼠血液流变学和血浆纤维蛋白原水平的影响,发现natrahagin低剂量(0.025mg/kg)、中剂量(0.05mg/kg)以及高剂量(0.1mg/kg)静脉注射后,显著降低200、30、51/S各切变率下大鼠的全血粘度和血浆粘度(P<0.05或P<0.01),对红细胞压积无显著影响(P>0.05),同时可剂量依赖性地降低大鼠血浆纤维蛋白原浓度(P<0.05或P<0.01)。

中华眼镜蛇毒F组份对血小板活化时蛋白酪氨酸磷酸化的影响

目的 :观察中华眼镜蛇毒F组份抑制血小板聚集的胞内信号转导机制。方法 :实验分 6组 :(1)空白组 ;(2 )对照组 ;(3) - (6 )实验组加入浓度为 10 0、30、10、3mg/LF组份。用比浊法测定血小板聚集率。用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定血小板内蛋白酪氨酸磷酸化的表达。结果 :F组份呈浓度依赖性抑制二磷酸腺苷 (ADP)引起的分子量为 76、6 6和 37 5kD蛋白酪氨酸磷酸化的表达 ,其中 30、10 0mg/L给药组中 ,3个分子量蛋白与对照组比较均有显著差异 ,P <0 . 0 5。F组份对ADP引起血小板聚集作用的抑制同降低 76、6 6和 37 5kD 3个分子量蛋白酪氨酸磷酸化的表达呈明显的正相关 (r=0 . 936 7,P <0 . 0 1)。结论 :中华眼镜蛇毒F组份通过抑制分子量为 76、6 6和37 5kD蛋白的酪氨酸磷酸化表达 ,对血小板胞内信号转导过程发生影响 ,可能是其抗栓机制之一。

中华眼镜蛇毒组份M抑制血小板聚集作用机制初探

探讨中华眼镜蛇毒组份Ｍ抑制血小板聚集作用机制；方法：运用卵磷脂法、剩余可凝纤维蛋白原法、纤维蛋白平板法等分别测定了中华眼镜蛇毒组份Ｍ中磷脂酶Ａ_２（ＰＬＡ_２），纤维蛋白原溶解酶及纤维蛋白溶解等与血小板聚集相关的酶活性，并运用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析了组份Ｍ对血小板内细胞骨架蛋白的影响；结果：组份 Ｍ不含 ＰＬＡ_２活性，无纤维蛋白（原）溶解酶活性，亦无ＡＤＰ酶和 ５’－核苷酸酶活性，不影响正常人血浆乳酸脱氢酶的含量，但对ＡＤＰ诱导的血小板细胞内肌动蛋白微丝聚合物的形成有明显抑制作用；结论：中华眼镜蛇毒组份Ｍ对血小板聚集所依赖的血小板内细胞骨架系统的功能有抑制作用。

一种新型的α-纤维蛋白原酶对血小板聚集的影响

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS- PAGE)检测中国眼镜蛇毒蛋白酶水解纤维蛋白原的作用方式 ,发现该蛋白酶可迅速水解纤维蛋白原 Aα链 ,对 γ链作用较弱 ,对 Bβ链无作用 ,是一种新型的α-纤维蛋白原酶 .用比浊法测定血小板聚集率 ,证实中国眼镜蛇毒蛋白酶低剂量 ( 0 .0 2 5mg/kg)、中剂量 ( 0 .0 5mg/kg)以及高剂量 ( 0 .1 mg/kg)体内给药浓度依赖性地抑制 ADP( 1 0 μmol/L)和胶原 ( 1 0 0 mg/L)

中国眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin水解血小板膜糖蛋白Ⅰb和抑制血小板聚集的作用

目的 :观察从中国眼镜蛇 (Najanajaatra)毒中纯化的蛋白酶natrahagin水解血小板膜糖蛋白Ⅰb(plateletmembraneglycoproteinⅠb ,GPⅠb)和抑制血小板聚集的作用。方法 :通过SDS_聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS_PAGE)检测以及凝胶图像光密度分析系统分析natrahagin对血小板膜糖蛋白的水解作用。比浊法测定血小板聚集率。结果 :Natrahagin选择性地水解GPⅠb ,切除分子量约 3.3× 10 4 的片段。Natrahagin(0 0 2 5～ 0 .1mg kg)静脉注射可显著抑制低浓度凝血酶 (10 0U L)诱导的兔洗涤血小板聚集 ,效应呈剂量依赖性。结论 :Natrahagin具有水解GPⅠb和抑制后者介导的血小板聚集的作用。

中国眼镜蛇毒蛋白酶的分离、纯化及其对血小板聚集的影响

目的：从中国眼镜蛇毒中分高纯化出可水解纤维蛋白原的蛇毒蛋白酶，并观察其体内给药对血小板聚集的影响。方法：使用超滤的方法以及肝素亲和层析柱HeparinSepharoseCL－6B和凝胶层析柱SephadexG150分高纯化中国眼镜蛇毒蛋白酶。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）检测其纯度和分子量。比浊法测定血小板聚集率。结果：从中国眼镜蛇毒中纯化出具有水解纤维蛋白原活性的蛋白酶，经SDS－PAGE电泳测定为一条带，分子量为47.1kD。该蛋白酶低剂量（0．025mg／kg）、中剂量（0．05mg／kg）以及高剂量（0．1mg／kg）体内给药后，剂量依赖性地抑制ADP（10μmol／L）、胶原（100μg／ml）诱导的兔血小板聚集。结论：具有水解纤维蛋白原活性的中国眼镜蛇毒蛋白酶在体内表现出抑制血小板聚集的作用。

广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶体内外抗血小板聚集实验研究

目的研究广西眼镜蛇中提取的L-氨基酸氧化酶(L-aminoacid oxidase)在人体外及家兔体内的抗血小板聚集作用。方法用比浊法测定广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶对二磷酸腺苷(ADP)、胶原、凝血酶、花生四烯酸(AA)在人体外及家兔体内引起的血小板聚集率的影响。结果实验中,能明显抑制二磷酸腺苷(ADP)、胶原、凝血酶、花生四烯酸(AA)引起的血小板聚集,并呈明显的正相关。结论广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶在体内外均有较强的抗血小板聚集活性。

眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin水解纤维蛋白原的特性及对人血小板聚集的影响(英文)

目的:研究natrahagin水解纤维蛋白原的特性及其对血小板聚集的影响。方法:SDS-PAGE,水解纤维蛋白原活性测定,血小板聚集实验。结果:Natrahagin与纤维蛋白原以1:50(w/w)孵育,5min内A_α-链几乎完全降解,γ-链的完全降解则至少需6h;其水解可凝固纤维蛋白原的活性为0.349±0.044g·min^(-1)·g^(-1)。Natrahagin浓度依赖性地抑制利托菌素对富血小板血浆和凝血酶(80U·L^(-1))对洗涤血小板的聚集反应,IC_(50)(95％可信限)分别为56(40-79)和3.3(1.4-8.0)mg·L^(-1)。但即使natrahagin达200mg·L^(-1),对ADP和胶原诱导的血小板聚集仍无抑制作用。结论:Natrahagin是一种α,γ-纤维蛋白原溶解酶,可选择性抑制血小板膜糖蛋白Ib介导的血小板聚集。

中华眼镜蛇毒F组分抗血小板聚集的作用机制

目的探讨中华眼镜蛇毒F组分抑制血小板聚集的作用机制。方法用比浊法测定中华眼镜蛇毒F组分对二磷酸腺苷、花生四烯酸和血小板活化因子诱导血小板聚集作用的影响，流式细胞术观察中华眼镜蛇毒F组分对荧光标记的单克隆抗体CD41（FITC—CD41）和CD61（FITC—CD61）与血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa（GPⅡb／Ⅲa）结合的影响。结果中华眼镜蛇毒F组分明显抑制二磷酸腺苷、花生四烯酸和血小板活化因子诱导的血小板聚集，其作用呈现一定程度的剂量依赖关系。中华眼镜蛇毒F组分可以明显降低单克隆抗体CD41（抗GPⅡb）与血小板的结合率，而对单克隆抗体CD61（抗GPⅢa）与血小板的结合率没有影响。结论中华眼镜蛇毒F组分可以抑制多种激动剂诱导的血小板聚集，其机制和中华眼镜蛇毒F组分与血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa复合物的结合有关。

蛇毒类凝血酶的研究进展

蛇毒类凝血酶(SVTLEs)是与人血浆凝血酶结构和功能非常相似的一类丝氨酸蛋白酶,具有精氨酸酯酶和酰氨酶活性,但其裂解纤维蛋白原的作用机制与凝血酶不同。大部分SVTLEs都是糖蛋白,含糖量在0%~30%之间。SVTLEs主要分布于蝰科的蝮亚科和蝰亚科。由于SVTLEs体外促凝、体内去纤的生理性质,其在心肌梗死、缺血性中风和其他血栓性疾病方面拥有巨大的潜在应用价值。随着对SVTLEs研究的不断深入,目前已有多种SVTLEs应用于临床止血、抗血栓及诊断等方面。该文对SVTLEs的分布,生化特性,基因工程研究以及应用等作了简要综述。