剑叶龙血素A对破骨细胞分化影响的研究

目的探讨剑叶龙血素A(Cochinchinenin A)对破骨细胞分化的影响及作用机制。方法采用网络药理学技术预测CCA干预破骨细胞分化的作用机制,并用Auto Dock Tool软件对CCA与破骨细胞分化关键靶点进行分子对接。体外采用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)和核因子受体配体激活因子(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)诱导小鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMMs)分化为破骨细胞,并通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAcP)和F-actin染色观察CCA对破骨细胞形成的影响,最后通过Western Blot检测CCA对MAPK和NF-κB信号通路的调控作用。结果通过网络药理学技术共筛选获得20个CCA抗破骨细胞分化的潜在靶点,功能富集分析发现CCA可通过调节MAPK、破骨细胞分化和肌动蛋白细胞骨架组成等信号通路及PIK3CA、MTOR、ESR1及MAPK1等关键靶点发挥抑制破骨细胞分化的作用。分子对接进一步验证了CCA和关键靶点的结合能力。体外实验结果表明CCA可显著抑制RANKL诱导的破骨细胞分化及F-actin形成,同时抑制NFATc1、Integrinβ3、c-Fos蛋白及破骨细胞功能相关蛋白CTSK的表达。此外,CCA抑制了p38的磷酸化和IκB-α的降解。结论CCA可通过调控p38/MAPK及NF-κB信号通路抑制破骨细胞分化。

HPLC法同时测定不同产地龙血竭中3种黄酮类成分

为建立HPLC测定不同产地龙血竭中3种黄酮类成分的方法,选择了广西、云南产9个批次的龙血竭,测定了其中龙血素A、龙血素B、剑叶龙血素B的含量.采用Thermo BDS Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-1%冰醋酸,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),柱温40℃,检测波长278 nm.3个药效成分在45min内达到基线分离,线性关系良好.9个批次龙血竭中龙血素A、龙血素B、剑叶龙血素B的平均含量分别为:0.47%,0.96%,0.44%;平均加样回收率分别为:99.6%,103.2%,100.5%;RSD分别为:1.20%,0.65%,1.30%.该实验方法操作简便,结果准确,重复性和稳定性良好,可为龙血竭的质量控制提供参考.

RP-HPLC测定龙血竭中新化合物剑叶龙血素C含量

【目的】建立龙血竭中新化合物一剑叶龙血素C的分离与测定含量方法。【方法】采用Phenomenex C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，甲醇-水（75：25，v／v）为流动相，流速为1m／min，检测波长为295nm，柱温50℃；用外标法定量。【结果】剑叶龙血素C在27．25—327ng范围有良好线性关系，r=0．9997，理论塔板数以剑叶龙血素C计为4500；方法回收率为96．90％，RSD为1．2％。【结论】本方法是测定龙血竭中剑叶龙血素含量的准确的定量方法。

Flavonoid oligomers from Chinese dragon’s blood,the red resins of Dracaena cochinchinensis

A detailed chemical investigation of the red resins from Dracaena cochinchinensis(Chinese dragon’s blood)yielded five new flavonoid oligomers,named cochinchinenins D-H(1-5),together with a known biflavonoid,cinnabarone(6),and a mixture of two known biflavonoids,socotrin-4'-ol(7)and homoisosocotrin-4'-ol(8).Of these new compounds,1-3 were biflavonoids and 4 and 5 were triflavonoids.Their structures were determined on the basis of spectroscopic analysis.The isolated compounds were tested for cytotoxicity(Cdc25),antibacterial(PEPT)and antifungal(YNG)activities.

基于分子对接、分子动力学模拟虚拟筛选中药来源的醛脱氢酶1A1抑制剂

目的基于分子对接、分子动力学模拟技术从中药化合物库中筛选醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)抑制剂。方法运用计算机虚拟技术,进行分子对接、类药性、药动学、分子动力学模拟的筛选流程,从中药化学物库中筛选ALDH1A1抑制剂。结果血竭素表现出良好的ALDH1A1抑制活性及类药性,预测命中分子可有效抑制ALDH1A1活性;通过酶活抑制实验验证抑制效应,运用分子动力学模拟分析结合能。结论整合多种虚拟筛选技术挖掘到ALDH1A1抑制剂——血竭素。

剑叶龙血素B对辣椒素诱发大鼠背根神经节细胞VR1电流的抑制作用

使用全细胞膜片钳技术,在急性分离的大鼠背根神经节细胞上,观察了剑叶龙血素B(CB)对辣椒素(CAP)诱发电流和电压反应的影响.在-60 mV的钳制电压下,剑叶龙血素B快速、可逆地抑制了辣椒素诱发电流,并且该抑制呈浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)为0.92 mmol/L;在电流钳条件下,剑叶龙血素B抑制了辣椒素诱发的去极化.0.38 mmol/L的剑叶龙血素B产生的抑制率为38.6±1.9%,而0.76 mmol/L的剑叶龙血素B几乎全部抑制了辣椒素诱导的去极化.这些结果表明:剑叶龙血素B对CAP/VR1反应的抑制可能用来解释一些血竭的镇痛效应.

压力驱动亲和毛细管电泳法研究3种龙血素与人血清白蛋白的结合作用

采用压力驱动的亲和毛细管电泳技术(P-ACE)分别研究了生理酸度条件下(p H 7.4)3种黄酮类化合物龙血素A、龙血素B和剑叶龙血素C与人血清白蛋白(HSA)之间的相互作用。利用蛋白淌度变化和药物浓度的关系,计算得出上述三者与HSA的结合常数Ka分别为0.414×105,0.252×105,1.816×105L/mol。结果表明,P-ACE可作为研究药物与蛋白相互作用的简便可行方法。

龙血竭中龙血素和剑叶龙血素的HPLC分离研究

在优化了流动相组成、比例、流速、洗脱方式和柱温等条件后，选择乙腈和0．5％磷酸水溶液为流动相，流速为1．0mL／min，柱温为35℃，检测波长为217nm，采用梯度洗脱，建立了一个同时分离测定血竭中龙血素A、龙血素B和剑叶龙血素C的高效液相色谱法。该方法在29rain内实现了这3个组分的有效分离与测定，其工作曲线的线性范围对于龙血素A和B均为2．5～250μg／mL，对于剑叶龙血素C为1．0～250μg／mL。将该方法用于测定不同来源血竭样品中龙血素A、B和剑叶龙血素C的含量．相对标准偏荠在5．0％以内．回婀率存95％～110％夕闻．

剑叶龙血素A衍生物的合成及其镇痛活性研究

以苯乙酮衍生物及2,6-二甲氧基苯甲醛为起始原料,经2步高效合成了20个剑叶龙血素A衍生物,其中12个为新化合物,化合物结构经~1H NMR,^(13)C NMR,IR及HRMS进行确证.在此基础上,以盐酸曲马多为阳性对照组,经扭体法实验对所合成的化合物进行镇痛活性研究,初步活性结果表明,化合物4d_1(8.33±1.45/次,13.00±4.16/次,8.67±3.71/次),5e(5.67±2.40/次,12.67±1.45/次,13.00±5.68/次)与阳性对照组(6.67±1.20/次)的活性相当.以龙血竭中剑叶龙血素A为母体,合成其衍生物并评价其镇痛活性,为进一步研究龙血竭镇痛活性提供了参考.

反相高效液相色谱法测定龙血竭中剑叶龙血素C的含量

建立反相高效液相色谱法测定龙血竭中剑叶龙血素 C含量的方法 ,以 Phenomenex C18反相键合硅胶色谱柱为固定相 ,水 -乙腈 (33:6 7)为流动相 ,流速 1ml/min,检测波长为 2 11nm;柱温 35℃ ;用外标法定量。结果表明 ,剑叶龙血素 C在 4 2 .85～ 342 .8μg进样范围内有良好线性关系 (r=0 .9996 ) ,方法回收率为 97.87%。本方法简便、准确 ,重复性好 ,可作为龙血竭中剑叶龙血素 C的含量测定方法。

剑叶龙血素A衍生物对小鼠镇痛活性的QSAR模型

目的:为了建立15种剑叶龙血素A衍生物对小鼠的体外镇痛活性(lnAN)与电性距离矢量(Mk)的QSAR模型。方法:基于拓扑化学理论,电性距离矢量(M)被用于表征化学微环境。采用最佳变量子集回归方法,建立上述化合物对小鼠的体外镇痛活性(lnAN)与Mk的定量构效关系(QSAR)模型。结果:所建最佳二元QSAR模型的判定系数(R2)和逐一剔除法交叉验证相关系数(Rcv^(2))分别为0.846、0.725。经R^(2)、Rcv^(2)、V_(IF)、F_(IT)、A_(IC)、F等统计指标检验,该模型具有良好的稳健性及预测能力。结论:结果显示-CH_(3)、-HC<和-Cl等分子结构单元直接影响这些化合物的镇痛活性。据此提出剑叶龙血素A衍生物分子与生物受体之间的主要作用是疏水作用、氢键。

气相色谱法测定龙血竭中剑叶龙血素C的含量

目的:建立测定龙血竭中剑叶龙血素C含量的方法。方法:采用气相谱法,HP-5弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.32 mm×0.25μm),载气为N2,流速1 mL.min-1,进样口温度250℃,μECD检测器温度300℃,程序升温,外标法计算含量。结果:剑叶龙血素C在0.1～2μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9998);平均加样回收率为100.3%,RSD(n=6)为0.5%。结论:本方法简单、灵敏、重复性好,可用于龙血竭中剑叶龙血素C的含量测定。

龙血竭提取物有效成分剑叶龙血素A小鼠药动学研究

目的:选取中药广西龙血竭提取物(EDB)中有效成分之一的剑叶龙血素A(2,6-二甲氧基-4’-羟基二氢查耳酮)作为考察对象,研究其药动学规律,对龙血竭临床用药具有一定的指导意义。方法:建立实验小鼠血浆中剑叶龙血素A含量的高效液相色谱测定方法,测定给药后不同时间点血浆中剑叶龙血素A的浓度。通过药动学软件3P87进行数据处理,得出剑叶龙血素A的相关药动学参数。结果:剑叶龙血素A血药浓度高效液相色谱测定方法的线性范围为50-500ng/ml,高中低三种浓度回收率分别是114.80±2.86、103.60±4.38、101.80±2.12,最小检测浓度为10ng/ml,日内差为1.28%、日间差为2.26%、精密度(RSD)小于3%;剑叶龙血素A的药动学参数是:T(peak)为77.73min、C(max)为224.99ng/ml、T1/2Ke为72.91min、T1/2Ka为40.94min、V/F(C)为1.019(mg/kg)/(ng/ml)、AUC为49553.47(ng/ml)*min。结论:建立了小鼠血浆中剑叶龙血素A高效液相色谱测定方法;EDB口服后剑叶龙血素A药动学为一室模型,有较大的吸收利用率,其消除半衰期为吸收半衰期的1.78倍,是吸收比消除快的药物。

剑叶龙血素A间接竞争ELISA检测方法的建立

目的：建立间接竞争酶联免疫吸附分析法（ELISA）用于测定剑叶龙血素A（CA）含量.方法：合成半抗原剑叶龙血素A-4＇-羧甲基醚（CA-4＇-CME）,再用碳二亚胺法将其与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）分别偶联制备免疫原（CA-BSA）和包被原（CA-OVA）,免疫小鼠制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA法并评估其分析性能.结果：通过紫外扫描分析CA-BSA和CA-OVA的偶联比分别为18∶1和24∶1.抗血清效价最高达到12000.用四参数logistic方程拟合CA标准曲线,在分析范围0 ～0.80 mg·L-1内,相关系数（R2）≥0.99,IC500.66 mg·L-1,最低检测限0.045 mg·L-1,批内CV≤12.5％,批间CV≤14.7％,回收率92.7％ ～ 118.7％,对5种CA类似物的交叉反应率＜5.38％.此方法检测龙血竭和龙血竭总黄酮中CA含量分别为1.27％,3.08％.结论：剑叶龙血素A间接竞争ELISA法精密度、准确度和特异性均较好,可方便地用于药物检测和分析.