基于HPLC-MS与Cocktail探针药物法研究五味子提取物对大鼠CYP450酶的影响

目的研究五味子提取物对大鼠肝脏中细胞色素P450酶(CYP450酶)的影响。方法采用高效液相色谱串联质谱(high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,HPLC-MS)分析技术建立稳定的探针底物色谱分析法,结合Cocktail分析单次给予五味子提取物对大鼠体内CYP2D6、CYP2C19、CYP2C8、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C196种CYP450亚型酶活性的影响。结果五味子提取物对大鼠肝脏中CYP2D6、CYP2C19和CYP2C8的活性具有显著的抑制作用,而对CYP2A6、CYP2B6和CYP2C19的活性具有显著的诱导作用(P<0.05)。结论用HPLC-MS结合Cocktail探针药物法研究五味子提取物对大鼠CYP450酶影响的准确性及可靠性较强,五味子对CYP450酶多个亚型的不同调控作用可能是其发挥降酶保肝作用的重要机制。

Cocktail探针药物法在中药细胞色素P_(450)酶代谢研究中的应用

细胞色素P450酶是人体内最重要的药物代谢酶,中药可抑制或诱导某个或某些细胞色素P450亚酶,从而影响合用药物的代谢,导致药物相互作用发生。中药代谢研究是中药现代化研究的重要方面,可提高中药使用的有效性和安全性,促进临床合理用药。Cocktail探针药物法能全面、真实地反映药物代谢的过程,其优点在于多个代谢途径的信息可在单个实验过程获得,并将个体间影响降至最低,此法省时、经济。Cocktail探针药物法用于中药的代谢研究是一个比较新的研究领域,近几年开始有文献报道。该文介绍了Cocktail法在中药细胞色素P450酶代谢研究中的国内外应用进展,以期系统了解并指导该领域的研究。

探针药物法评价氟尼辛葡甲铵对猪肝CYP450酶的影响

采用Cocktail探针药物法探讨氟尼辛葡甲铵对猪肝CYP450酶是否具有诱导或抑制作用。将12头健康猪随机均分为2组,公母各半。试验组每天肌肉注射氟尼辛葡甲铵1次(11 mg/kg),对照组给予相同体积的生理盐水,连续给药10 d。通过HPLC检测探针药物的代谢率,来评价各组CYP450水平。结果显示,试验组的氨苯砜代谢减慢,t1/2延长;而氯唑沙宗代谢加快,t1/2缩短。这说明氟尼辛葡甲铵对猪CYP3A4具有抑制作用,而对CYP2E1存在诱导效应。

“cocktail”探针药物法评价五种肝细胞色素P450酶活性的应用

目的：研究肝缺血预适应（IPC）和肝缺血再灌（IR）损伤对大鼠肝细胞色素P450酶（CYP）亚型CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1、CYP2D6和CYP3A体内代谢活性的影响，建立评价肝脏药物代谢功能的指标，为新药筛选、肝药物代谢研究提供参考。方法：采用“cocktail”探针药物法，使用5种特异性探针药物：咖啡因、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲、美托洛尔和咪达唑仑，通过其药代动力学参数的变化来评价肝缺血预适应和肝缺血再灌对大鼠CYP亚型CYP1A2、

混合探针法评价白香丹胶囊对大鼠体内CYP450酶活性的影响

目的:建立同时测定大鼠血浆中6种CYP450探针药物的方法,并采用Cocktail法研究白香丹胶囊对大鼠CYP450酶活性的影响。方法:选用茶碱(CYP1A2)、氯唑沙宗(CYP2E1)、甲苯磺丁脲(CYP2C6)、右美沙芬(CYP2D2)、奥美拉唑(CYP2D1)、咪达唑仑(CYP3A2)作为探针药物。大鼠随机分为对照组和给药组,给药组每天灌胃白香丹胶囊0.675 g·kg-1,对照组灌胃等量生理盐水,连续给药14 d。第15天均灌胃给予6个探针药物,于不同时间点眼眶取血,采用LC-MS/MS法测定各探针药物浓度,计算药动学参数并进行组间t检验。结果:与对照组相比,给药组茶碱(P<0.01)、氯唑沙宗(P<0.01)、甲苯磺丁脲(P<0.05)代谢显著加快;右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑代谢无显著性差异。结论:白香丹胶囊对大鼠CYP1A2有中强诱导作用,对CYP2E1、CYP2C6有弱诱导作用。

同时测定人肝微粒体中9种CYP450酶活性的LC-MS/MS方法

目的建立一种同时测定人肝微粒体中9种CYP450酶活性的LC-MS/MS方法(鸡尾酒法),用于评估药物对CYP450酶活性的影响,以预判药物间发生相互作用的可能性。方法使用9种不同酶的底物作为探针与人肝微粒体共同孵育,硝苯地平作为内标物质。用Agilent 1290系列液相色谱仪进行洗脱,所有代谢产物均在多反应监测模式下进行分析,并对单探针法与鸡尾酒法测定的IC_(50)值进行比较。结果该LC-MS/MS方法专属性好,色谱峰分离完全且无干扰。线性关系良好,9种代谢产物在标准曲线范围内的相关系数均>0.99。方法准确度为85.34%~113.89%,日内RSD<12.49%,日间RSD<14.98%,符合相关标准。该鸡尾酒法测定的抑制剂的IC_(50)值与单个探针底物的IC_(50)值呈高度相关(R~2>0.997 8)。结论该LC-MS/MS方法可同时对人肝微粒体中9种CYP450酶进行活性测定。

Cocktail探针药物法评价胃炎灵颗粒对大鼠体内CYP450活性的影响

目的研究胃炎灵颗粒对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响。方法分别以右美沙芬(CYP2D6)、咪达唑仑(CYP3A4)、奥美拉唑(CYP2C19)、茶碱(CYP1A2)、氯唑沙宗(CYP2E1)和甲苯磺丁脲(CYP2C9)作为探针底物,大鼠6只,每日灌胃胃炎灵颗粒4 g/kg,采用LC-MS/MS测定给药前后大鼠体内6种探针药物的血药浓度。结果胃炎灵颗粒连续给药10 d后,与给药前相比,大鼠体内的右美沙芬(P <0. 01)、甲苯磺丁脲(P <0. 01)代谢减慢,氯唑沙宗(P <0. 01)代谢加快,奥美拉唑、咪达唑仑、茶碱的代谢无显著差异。结论胃炎灵颗粒在大鼠体内对CYP2D6酶产生中强抑制作用,对CYP2C9酶产生弱抑制作用,对CYP2E1酶产生轻微诱导作用,对CYP3A4、CYP2C19和CYP1A2基本没有影响。

Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响

目的建立同时测定细胞色素P450(CYP450)亚型CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的Cocktail探针药物溶液的高效液相色谱(HPLC)检测方法,并利用该方法研究口服钩藤总生物碱(TAU)对上述4种亚酶活性的影响。方法以咖啡因、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和氨苯砜分别作为CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的探针底物,以卡马西平作为内标物质,建立了乙腈-0.5%甲酸的梯度洗脱法同时测定4种探针药物的血药浓度,并对该方法进行方法学考察。雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予空白溶剂(0.5%羧甲基纤维素)以及40、80 mg/kg的TAU,连续灌胃给药10 d,在第11天给予Cocktail探针药液后于不同的时间点采集大鼠血样。利用HPLC测定大鼠血浆中该4种探针药物浓度,血药浓度-时间数据采用DAS2.0软件进行药动学分析。结果与空白对照组比较,80 mg/kg的TAU给药组灌胃10 d后,咖啡因的AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-t、MRT0-∞和t1/2z均显著减小,CLz/F均显著增大;甲苯磺丁脲的AUC0-t和AUC0-∞均显著减小,CLz/F显著增大;氯唑沙宗的AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-t、MRT0-∞和t1/2z减小,CLz/F增大,但差异无统计学意义;氨苯砜的药代学参数基本无变化。40 mg/kg的TAU给药组与空白组比较,该4种探针底物的药动学参数基本无变化。结论本方法准确,灵敏度较高,适用于同时评价药物对CYP1A2、CYP2C9/11、CYP2E1和CYP3A4该4种亚酶的影响。80 mg/kg的TAU给药组给药10 d后对大鼠肝药酶CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1均存在不同程度的诱导作用,对CYP3A4的活性基本无影响,而40 mg/kg的TAU给药组对以上4种亚酶基本无影响。提示TAU在临床使用过程中,尤其是与其他药物联用时,应注意调整用药剂量,防止药物相互作用可能造成的不良反应;本文为临床合理配伍使用该药提供参考。

LC-MS/MS法同时评价吲达帕胺对大鼠肝微粒体中6种CYP450酶活性的影响

目的建立同时测定大鼠肝微粒体孵育体系中6种探针底物的LC-MS/MS方法,并应用于体外快速评价吲达帕胺对CYP450酶活性的影响,预测潜在药物相互作用。方法孵育样品经甲醇沉淀蛋白预处理,采用多反应监测模式对咖啡因、右美沙芬、咪达唑仑、奥美拉唑、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲等6种探针底物进行测定;以吲达帕胺为模型药物,使用已建立的方法考察模型药物对CYP450酶活性的影响。结果6种探针底物在标准曲线范围内与峰面积线性关系良好(相关系数r均>0.995),方法准确度为93.66%~107.59%,批内批间RSD≤7.9%,符合生物样本测定要求。吲达帕胺对CYP3A4、CYP2D6、CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1无抑制作用,但对CYP2C19存在抑制作用。结论该LC-MS/MS方法简单、准确、快速、可靠,可用于评价吲达帕胺对CYP450酶活性的影响。

Cocktail探针药物法研究化合物PT-46的CYP酶系抑制作用

考察抗肿瘤优选化合物PT-46对细胞色素P 450(CYP450)酶系的抑制作用,评价化合物潜在的药物相互作用。基于UPLC/MS分析方法,运用Cocktail探针底物法研究PT-46对体外人肝微粒体中5种常见CYP酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6及CYP3A4)的抑制作用。结果表明,PT-46对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4等酶没有抑制作用,对CYP2C9及CYP2C19的抑制IC 50值分别为19.6μM及19.2μM,存在一定的抑制作用。本研究初步考察了PT-46潜在的药物相互作用,为该化合物的后期临床前研究提供参考。

“cocktail”探针药物法及其在研究中药对细胞色素P450影响中的应用进展

"cocktail"(鸡尾酒)探针药物法作为一种快速、高通量的研究方法,目前已广泛应用于药物对细胞色素P450(CYP450)活性影响评估、药物代谢途径确认、药物-药物相互作用预测、药物代谢表型分析、临床用药方案优化等诸多研究方向。此方法具有独特的优势和广阔的应用前景。本文主要从CYP450同工酶的特性、"cocktail"探针药物法的特点、探针药物选择依据、"cocktail"探针药物法在中药对CYP450代谢酶影响中的应用进行综述。旨在较为系统地梳理相关研究进展,并为此方面的深入研究工作提供参考。

刺五加注射液对大鼠肝微粒体四种CYP450亚型酶活性的影响

目的:研究刺五加注射液在大鼠体外肝微粒体中对CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4活性的影响,为临床合理联合用药提供参考。方法:在大鼠体外肝微粒体中分别加入四种亚型酶的探针药物甲苯磺丁脲(TB)、右美沙芬(DM)、氯唑沙宗(CLZ)、睾酮(TS)和低、中、高剂量的刺五加注射液,温孵后用HPLC法测定各空白对照组和不同剂量刺五加注射液给药组中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异,以评价刺五加注射液对各亚型酶活性的影响;中剂量组活性显著降低的亚型酶进一步考察抑制作用的强弱(即IC50和Ki值)。结果:与空白对照组比较,刺五加注射液低、中、高剂量给药组对CYP3A4活性的影响均有统计学意义(P<0.01),抑制率分别为10.22%、19.00%、30.29%,其IC50和Ki值分别为3.96%和2.74%(V/V);低、中、高剂量给药组对CYP2D6活性的影响均无统计学差异(P>0.05);低剂量给药组对CYP2C9、CYP2E1活性的影响无统计学差异(P>0.05),中、高剂量给药组对两个亚型的抑制作用有统计学差异(P<0.05),但中剂量给药组抑制率均小于8.50%,高剂量给药组抑制率均小于12.00%。结论:刺五加注射液对大鼠体外肝微粒体CYP3A4有抑制作用,且符合混合型抑制模型;对CYP2C9、CYP2E1抑制作用较弱;对CYP2D6活性无影响。

超高效液相色谱法检测6种探针底物代谢产物并评价人细胞色素P450同工酶活性

目的：建立同时测定非那西丁（CYP1A2）、氯唑沙宗（CYP2E1）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、奥美拉唑（CYP2C19）、睾酮和咪达唑仑（CYP3A4）6种探针底物代谢产物的Cocktail体外方法,评价药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。方法：人肝微粒体与6种探针底物在还原系统NADPH的作用下,37℃共同孵育;以蛋白沉淀法处理样品,采用超高效液相色谱系统（UPLC-MS/MS）,建立Cocktail混合探针,对药物的6种代谢物进行定量分析,并分析药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。结果：6种探针底物物代谢产物乙酰氨基酚（0.26~8.35μmol/L）、6-羟基氯唑沙宗（3.02~96.63μmol/L）、5-羟基奥美拉唑（0.10~3.09μmol/L）、羟基甲苯磺丁脲（0.15~4.88μmol/L）、6β-羟基睾酮（3.67~117.37μmol/L）和α-羟基咪达唑仑（1.64~52.37μmol/L）线性关系良好,各成分相关系数（R2）〉0.996,准确度为95.96%~103.10%,日内和日间精密度RSD（%）〈15%,提取回收率、基质效应RSD（%）〈11%,稳定性好。结论：UPLC-MS/MS准确、灵敏度高,可作为研究受试药物对CYP450酶影响及相关研究的分析测定方法。

石膏水煎液对肝微粒体细胞色素P450酶系中CYP1A2和CYP2E1的影响

目的:研究石膏水煎液对肝微粒体细胞色素P450酶CYP1A2和CYP2E1活性的影响,指导临床合理用药。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)对肝脏细胞色素P450酶CYP1A2和CYP2E1进行了初步研究。结果:与空白对照组比较,石膏水煎液对大鼠肝脏中的CYP1A2含量有降低的趋势,对CYP2E1的含量没有显著影响。结论:石膏对大鼠肝微粒体CYP1A2活性有抑制作用,临床上当与经过CYP1A2代谢的药物合用时应适当调整药量。

以混合探针药的方法评价白藜芦醇对人体细胞色素酶P450活性的影响

目的:采用混合探针法研究白藜芦醇对人细胞色素酶P450五种亚型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9、CYP3A4和CYP2C19的影响。方法:采用随机对照研究,将26名男性健康受试者随机分为安慰剂组和白藜芦醇组,分别予以口服安慰剂/白藜芦醇每次1 g,每日一次,连续服药14 d,再口服咖啡因、氯沙坦、奥美拉唑、右美沙芬和咪达唑仑五种探针药物,采集不同时间的血样,检测咪达唑仑、咖啡因、奥美拉唑三种探针药物的血药浓度。并收集0~8 h尿液,记录尿量,检测氯沙坦及右美沙芬的代谢速率。比较两组之间的药代动力学差异。结果:与对照组相比,白藜芦醇组CYP1A2的探针药物咖啡因AUC0-12、AUC0-∞、Cmax分别增加32.10%(P<0.001)、71.52%(P<0.001)、10.62%(P=0.004),同时T1/2也显著增加(P=0.002);CYP2C19的探针药物奥美拉唑和CYP3A4的探针药物咪达唑仑的药代动力学参数AUC0-12、AUC0-∞、T1/2和Cmax均未见显著改变(P>0.05);CYP2C9探针药物右美沙芬与其代谢产物去甲右美沙芬比率(DTM/DT)的比率增加了79.91%(P=0.003);CYP2D6探针药物氯沙坦与其代谢产物E-3174的比率(losartan/E-3174)增加了531.34%(P<0.001)。结论:白藜芦醇多次给药后,能显著抑制CYP1A2、CYP2D6和CYP2C9的酶活性,而对CYP3A4和CYP2C19的酶活性无显著影响。

HPLC法测定大鼠血浆中CYP450不同亚型探针药物浓度

目的:建立同时测定细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP450)亚型CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1活性的Cocktail探针药物溶液的高效液相色谱(HPLC)检测方法.方法:分别选择茶碱、甲苯磺丁脲和氯唑沙宗作为CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1的特异性探针药物,根据其理化特点配制成Cocktail组合探针溶液.使用HPLC梯度洗脱法同时测定3种探针药物的血药浓度,并对其方法学进行验证.结果:本研究建立的HPLC法可以同时测定大鼠血浆中3种探针药物的浓度,各探针药物的吸收峰分离完全,无杂峰干扰;线性关系良好,线性范围为0.02~50μg/mL,最低检测限为0.02μg/mL.日内、日间精密度均小于10%,回收率在87.74%~ 112.39%之间,稳定性高,室温放置、-20℃冷冻1周和3周的RSD均小于10%.将该方法应用于研究大鼠体内此3种酶的活性,证明其具有较好的灵敏度.结论:经方法学验证,此法可同时测定3种探针药物茶碱、甲苯磺丁脲和氯唑沙宗的血浆浓度.

保元汤对大鼠肝细胞色素CYP450酶不同亚型的影响

目的 通过保元汤对CYP450酶活性的影响研究,为临床合理用药提供实验依据。方法 大鼠连续给予保元汤及单味药的提取物14 d,探针底物茶碱(CYP1A2)、奥美拉唑(CYP2C19)、右美沙芬(CYP2D6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、双氯芬酸钠(CYP2C9)与肝微粒体体外孵育,高效液相色谱法检测5种探针底物在肝微粒体中的代谢消除百分率。结果 与空白对照组相比,保元汤组增加茶碱代谢百分率(P<0.05),降低双氯芬酸钠代谢百分率(P<0.05),结论 保元汤对CYP1A2酶活性有诱导作用;对CYP2C9酶具有抑制作用。

基于Cocktail探针药物法分析辛伐他汀对肝脏药物代谢酶的影响

目的利用Cocktail探针药物法分析辛伐他汀对肝脏药物代谢酶CYP450活性的影响,为药物相互作用研究提供参考,促进临床合理用药。方法选择CYP450酶中亚型相应的特异性探针底物,UPLC-MS测定探针药物血药浓度,并使用DAS3.0软件计算药代参数。通过空白对照组和辛伐他汀组中探针底物药代参数的比较,评价辛伐他汀对CYP450酶活性的影响。结果与空白对照组比较,辛伐他汀组中非那西汀的AUC降低,甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和睾酮的AUC升高,奥美拉唑和美托洛尔的主要药代参数与空白对照组比较均无显著性差异。结论辛伐他汀对大鼠的CYP1A2有诱导作用,对CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4有抑制作用,而对CYP2C19和CYP2D6无显著性影响。

LC-MS/MS法研究Cocktail探针药物咖啡因、右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑及其代谢产物在大鼠血浆中的药代动力学

目的建立灵敏、快速、稳定的测定大鼠血浆中CYP450探针药物/代谢产物,咖啡因/副黄嘌呤、奥美拉唑/5-羟基奥美拉唑、右美沙芬/右啡烷、咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑的LC-MS/MS方法,并用于其在大鼠体内的药代动力学研究。方法 100μL血浆样品加入内标地西泮及乙酸铵溶液,乙酸乙酯进行液液萃取,离心取上清挥干复溶,LC-MS/MS检测。选用Agilent Eclipse Plus-C_(18)色谱柱(50 mm×2.1mm,3.5μm),乙腈和0.01%甲酸(1 mmol·L^(-1)甲酸铵)作为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 m L·min^(-1),进样量10μL。采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应正离子监测模式(MRM+),咖啡因m/z:195.0/138.1;副黄嘌呤m/z:181.1/124.1;奥美拉唑m/z:346.1/198.1;5-羟基奥美拉唑m/z:362.1/214.1;右美沙芬m/z:272.2/147.1;右啡烷m/z:258.1/157.1;咪达唑仑m/z:326.1/291.1;1'-羟基咪达唑仑m/z:342.1/324.1;内标地西泮m/z:285.1/154.0。结果咖啡因、副黄嘌呤、奥美拉唑、5-羟基奥美拉唑、右美沙芬、右啡烷、咪达唑仑和1'-羟基咪达唑仑的线性范围分别为1.95~2 000、0.98~250、0.48~2 000、0.98~250、0.98~2 000、0.48~125、1.95~2 000和1.95~250μg·L^(-1)。RSD<15%且无基质效应。结论该方法快速、灵敏、重现性好,可用于血浆中上述探针药物/代谢产物浓度的测定,便于深入进行代谢酶CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的代谢相关研究。

“Cocktail”探针药物法的研究思路与应用

近年来关于细胞色素P450(CYP450)及其同工酶在药物代谢、毒理学、肿瘤生化、临床合理用药和新药研发等方面的研究都取得了很大进展。"Cocktail"探针药物法作为一种快速、有效的评价药物对CYP450酶活性影响的方法,有着不可替代的优势和广阔的应用前景。为此文章通过总结归纳近年来国内外的相关文献,介绍了"Cocktail"探针药物法的概念、优势和基本研究思路,并对其方法学的验证与优化,探讨药物间的相互作用,评价肝、肾功能,优化给药剂量等方面进行了综述。