固定化海洋微藻在西施舌(Coelomactra antiquata)人工育苗中的应用

采用海藻酸钠固定化培养6株海洋微藻,并将微藻藻珠引入西施舌幼贝育苗水体混养,通过测定水体中氨氮和亚硝酸氮质量浓度的变化,测量幼贝的生长量,研究微藻藻珠对西施舌育苗水体水质的调控作用以及对西施舌幼贝成活率与生长的影响.结果表明:西施舌幼贝混养水体中,氨氮质量浓度下降了74.7%,亚硝酸氮质量浓度下降了97.7%,与对照组相比,混养促进了幼贝的生长,提高了幼贝的成活率,生长量与对照组相比增加了84.9%.

盐度对西施舌Coelomactra antiquata（Spengler）幼虫和贝苗生长发育的影响

本文运用生物统计法确定西施舌幼虫和贝苗的适宜盐度范围，结果表明。Ｄ形幼虫、壳顶幼虫和贝苗对盐度的耐受力不同。Ｄ形幼虫生长的适盐范围为１７．２７～２７．９０‰，且生长和存活的最适盐度是１７．２７～１９．９３‰；壳顶幼虫生长的适盐范围向低盐度延伸，为１３．２９～２７．９０‰，生长和存活的最适盐度为１９．９３‰。平均壳长２．９ｍｍ的贝苗存活适盐范围向高盐度延伸，为１３．２９～３５．８７‰，其中２７．９０‰是贝苗生长和存活的最适盐度。

漳州西施舌线粒体基因组全序列:腔蛤蜊属(Coelomactra)存在新种的证据

利用长PCR扩增漳州西施舌线粒体DNA(ZZ-mtDNA),用引物步移法测序,获得线粒体基因组DNA全序列,研究其基因组特点。结合双壳类49个物种线粒体全基因组,分析基因间核苷酸和蛋白质氨基酸序列的差异,构建系统进化树,探讨漳州西施舌系统演化地位。研究结果表明:漳州西施舌线粒体基因组DNA全长17 199bp,A+T含量为64.2%,编码36个基因,其中12个蛋白质编码基因,22个转运RNA基因(tRNAs),2个核糖体RNA基因(lrRNA和srRNA),全部基因均位于重链上,tRNASer为单拷贝,tRNAMet为双拷贝;非编码区占10.9%(1 882bp/17 199bp),其中,主非编码区为882bp,与RZ-mtDNA主非编码区差异明显,另有一个较大(400bp)的非编码区为漳州西施舌特异性非编码区;以双壳纲帘蛤目文蛤属3种贝类、贻贝目贻贝属4种贝类、珍珠贝目牡蛎科的6种贝类为参照,对编码基因的核苷酸序列和蛋白质氨基酸序列进行差异分析显示,漳州西施舌与日照西施舌达到了种间差异水平。线粒体基因组编码的基因、tRNA组成、非编码区均揭示漳州西施舌是腔蛤蜊属的一个新种。

湛江沿海西施舌性腺周年变化的组织学观察

[目的]研究湛江沿海已达性成熟年龄的西施舌性腺周年变化。[方法]通过组织学切片和显微观察,对湛江沿海达性成熟年龄的西施舌性腺进行了周年变化研究。[结果]以滤泡的发育程度、生殖细胞发育状态及其在滤泡中数量的多少为标准,对西施舌性腺的组织学观察发现,卵巢及精巢发育过程均可分为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期5个时期。卵细胞的发生及其发育时期分为卵原细胞期、生长初期、生长中期、生长后期以及成熟期,精子的发生分别经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子5个时期。根据肥满度和相对重量的周年变化规律并结合性腺组织切片观察结果,湛江地区的西施舌性腺发育为一年有2~3个排放期。该地区西施舌肥满度和相对总重最低值都出现在12月,为26.79%和25.54%;最高值出现在9月和7月,分别为46.16%和49.42%。[结论]西施舌雌雄性腺发育基本同步,雄性发育略快。

西施舌精子发生过程的超微结构观察

利用透射电镜研究西施舌精子的发生和结构 ,揭示了从精原细胞逐渐发育为精子过程中细胞形态结构的变化和细胞器的演变规律。精细胞的分化分为 6期 ,主要包括 :核形态由扁圆到圆再到椭圆形 ;核染色质以颗粒状形式凝集 ;高尔基体分泌的前顶体颗粒聚合发育为前顶体囊 ,参与顶体的形成 ;线粒体逐渐融合与发达 ;中心体的移动及鞭毛的形成 ;胞质的逐步减少。成熟精子为原生型 ,由头部、中段和尾部组成。顶体圆锥状 ,高密度的顶体物质集中分布于基部四周 ,呈灯罩状 ;亚顶体腔呈尖锥状 ,内含密度较低的均匀物。细胞核近椭圆形。中段由 4个椭圆形的线粒体和 2个相互垂直的中心粒组成。尾部鞭毛为典型的“9+2”型结构。

西施舌营养成分分析与评价

对西施舌(Coelomactra antiquata)肉的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪及部分微量元素等进行了分析,并对其营养价值进行了评价。结果表明:西施舌鲜肉含水量为82.31%,粗蛋白11.18%(占干基质量的63.19%),粗脂肪0.54%,灰分2.36%;西施舌蛋白质中含有18种编码氨基酸,其中含人体所需的全部8种必需氨基酸,必需氨基酸的质量分数为20.93%(干基),占氨基酸总量的36.28%,谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)的质量分数较高,分别占干基的7.80%、5.57%和6.70%;高度不饱和脂肪酸C20:4(EPA)和C22:6(DHA)分别占脂肪酸总数的20.41%和10.20%;对西施舌肉营养价值评价结果显示:Gly,Asp、Glu和丙氨酸(Ala)4种呈味氨基酸占水解氨基酸总量的44.77%,占游离氨基酸总量的72.94%;氨基酸评分(SAA)和化学评分(SC)结果都显示第一限制性氨基酸是色氨酸,其SAA值和SC值分别为0.73和0.43,必需氨基酸指数(IEAA)为64.91,牛磺酸含量丰富,质量比为13 830 mg/kg(干基);西施舌含有较丰富的Fe和Zn,在其干基中的质量比分别为130.0 mg/kg和52.0 mg/kg。

硫化物和氨对西施舌幼贝的毒性影响研究

硫化物和氨对西施舌Coelomactra antiquata幼贝的急性毒性试验表明,硫化物的96h半致死浓度(LC50)值为4.131mg·L-1,安全浓度(SC)值为0.413mg·L-1;总氨氮的96hLC50值为14.220mg·L-1,SC值为1.422mg·L-1,其中NH3N的96hLC50值为0.903mg·L-1,SC值为0.090mg·L-1。硫化物和氨同时存在时表现为相加作用,在等毒条件下其96hLC50值分别为2.001和10.048mg·L-1(NH3N0.870mg·L-1),SC值分别为0.200和1.005mg·L-1(NH3N0.087mg·L-1)。30d的生长试验表明,在硫化物和氨同时存在、硫化物和总氨氮的浓度分别为0.10—0.20和0.50—1.00mg·L-1时,对西施舌幼贝壳长生长和成活率影响不显著,但硫化物和总氨氮浓度达0.25和1.25mg·L-1时则影响显著。

西施舌的核型分析

以西施舌囊胚期胚胎为材料 ,5～ 1 0 μg ml秋水仙素海水处理 2h ,5 0 %海水蒸馏水低渗 0 5h ,热片法制片 ,对西施舌的核型进行分析。结果表明 ,西施舌的二倍体数目 2n =38,核型为 1 4m + 1 6sm + 8st,NF =68。染色体实际长度CL为 1 1 0～ 3 4 7μm ,染色体总长度TCL为 80 72 μm。整个核型的染色体长度依次减小 ,相邻各对之间差异不明显。其中 1、3、7、1 0、1 1、1 6和 1 9号为中着丝粒染色体 ;5、6、8、9、1 3、1 4、1 7和 1 8号为亚中着丝粒染色体 ;2、4、1 2和 1 5号为亚端着丝粒染色体。

西施舌的耗氧率与排氨率研究

采用室内实验生态学方法研究了不同栖息水温和不同溶解氧水平下处于标准代谢状态的西施舌耗氧率与排氨率,并测定了窒息点.结果表明,在25℃时,水中DO≥3.11±0.15mg.L-1时,西施舌的耗氧率和排氨率分别为0.74±0.05mg.g-1.h-1和2.56±0.05μmol.g-1.h-1,处于相对稳定状态;当DO低于此值则代谢出现异常,耗氧率随DO下降而下降,直到窒息为止,其窒息点为1.22±0.06mg.L-1,而排氨率也呈直线下降,但排氨停止滞后于耗氧停止.耗氧率与栖息水温呈二次线型关系OCR=-0.0027T2+0.1367T-0.9557,R2=0.9724;水温为25.3℃时,西施舌的耗氧率达到最大,为0.77mg.g-1.h-1.处于适温状态(15℃和20℃)的O/N值要高于低温(10℃)和高温(25℃和30℃)时的O/N值,西施舌在适宜条件下更多地依赖于脂肪供能维持标准代谢,而在环境不适时则更多地调用机体的蛋白质来维持生理代谢需要.

西施舌稚贝对3种微藻选择性及摄食率研究

对西施舌稚贝的摄食率及藻类选择性变化进行研究.结果表明,西施舌稚贝对直径11.2μm四爿藻具有较高的选择性,而对云霄微型藻和牟氏角毛藻的摄食率均偏低.西施舌稚贝对四爿藻的摄食率在第5h时达到最高值(174.928×10-5m g.-h 1).当西施舌稚贝分别摄食3种藻类时,在适宜的藻类密度范围内,摄食率均随着藻类密度的增大而迅速增加,当藻类密度达到一定值后,摄食率呈下降趋势.西施舌稚贝摄食率与藻类密度之间关系适用二次多项式表示.

西施舌5个地理群体ITS1序列变异及系统发生分析

利用核糖体rRNA基因第一内转录间隔区(ITS1)序列,对我国山东日照(RZ)、江苏连云港(LYG)和启东(QD)、福建长乐(CL)、广西北海(BH)沿海西施舌5个野生群体的遗传结构进行了分析。经PCR扩增、克隆、非克隆测序,获得长度为816—843bp的ITS1核苷酸序列,其平均G+C含量(60.8%)显著高于A+T含量。在西施舌5个群体93个个体118个序列中共检测到153个变异位点,多态位点比例为18.3%,其中,简约信息位点为63个,共有63种基因型。群体间遗传距离在0.74%—3.38%之间,群体内遗传距离为0.72%—1.06%之间。CL群体与其他4个群体间的遗传距离明显高(3.17%—3.38%)。AMOVA分析结果显示长乐群体有明显的遗传分化(FST=0.670—0.702,P(0.001)。以中国蛤蜊为外群构建的NJ树和ML树显示CL群体聚为一支,非长乐群体互相重叠聚为另一支,研究结果显示,长乐群体已经形成了具有明显遗传结构的地理种群。

中国沿海西施舌5个自然群体形态差异和RAPD分析

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对5个西施舌自然群体的遗传多样性进行了研究.在选择的20个随机引物中共检测到168条标记条带.每个引物扩增谱带数在3～15之间.片段长度250～3 000 bp不等.利用Popgen1.32和PHILIP统计软件对实验数据进行处理,确立了5个群体间的亲缘关系,并对3个形态参数进行了方差分析,探讨了与RAPD结果的关联.结果表明:5个群体内和群体间遗传距离都较大,广西北海群体由于地理环境等因素的影响,无论是外部形态和遗传距离与其他4群体有较大差异,可能已经形成了地理种群.5个群体多态位点比例和平均遗传杂合度都较高,平均值为78.97%和0.308 7,香农多样值在0.301 8～0.367 3之间,聚类分析显示,山东群体与江苏群体亲缘关系最近,然后依次是浙江群体和福建群体.我国西施舌遗传多样性处于较高的水平,种质资源良好,西施舌养殖有很好的发展前景.

蛤蜊科3种贝类16S rRNA基因片段及ITS2核苷酸序列分析

利用PCR技术分别扩增连云港及启东沿海蛤蜊科的西施舌(Coelomactra antiquata)、中国蛤蜊(Mactrachinensis)和四角蛤蜊(Mactra veneriformis)3种双壳贝的16S rRNA基因片段和ITS2核苷酸序列,测序后用DNA star软件分析了核苷酸差异。结果显示:三种贝类16S rRNA基因片段长度相同,均为306bp(去除引物),核苷酸存在多态性,共有45个变异位点,54个核苷酸发生了变异,全部为碱基置换。西施舌与中国蛤蜊此片段核苷酸的同源性为88.9%,与四角蛤蜊的同源性为88.6%,中国蛤蜊与四角蛤蜊的同源性为90.6%。三种蛤蜊ITS2序列分别为390 bp(西施舌)4、41 bp(四角蛤蜊)和466 bp(中国蛤蜊),存在长度多态性,ITS2核苷酸差异分析结果显示,西施舌与中国蛤蜊的同源性为70.9%-71.1%,西施舌与四角蛤蜊的为70.5%-71.0%,中国蛤蜊与四角蛤蜊的同源性为88.1%-88.8%。ITS2序列分析结果与16S rRNA基因片段分析结果一致,2种分子分析法均显示中国蛤蜊与四角蛤蜊的亲缘关系近。

福建长乐海蚌保护区海蚌软体部的营养成分分析与评价

测定分析福建长乐海蚌保护区海蚌软体部的营养成分,并与其他经济双壳类海洋贝类进行比较。结果表明,海蚌软体部(鲜质量)中水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分的含量分别为79.87%、12.07%、0.58%和5.47%。海蚌软体部(干质量)中检测出18种氨基酸,总量为63.37%,其中必需氨基酸总量为26.23%,占氨基酸总量的41.39%,呈味氨基酸总量为25.46%,占氨基酸总量的40.18%。必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为70.62%。支链氨基酸和芳香氨基酸含量比值为2.77。按照氨基酸评分和化学评分计算结果,海蚌软体部的第一限制性氨基酸为色氨酸,第二限制性氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸。必需氨基酸指数为78.53,构成比例符合联合国粮食与农业组织/世界卫生组织规定的优质蛋白质标准。海蚌软体部检测出16种脂肪酸,其中包括7种饱和脂肪酸、5种单不饱和脂肪酸和4种多不饱和脂肪酸;不饱和脂肪酸含量占脂肪酸总量的68.19%;多不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的34.45%,其中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸共占多不饱和脂肪酸的95.56%。海蚌软体部含有较丰富的磷、钙、镁等常量元素和铁、锌等微量元素,以及少量硒、铜、铬、钴等11种微量元素。营养品质评价结果表明:海蚌软体部具有较高的食用价值与保健作用。

基于COⅠ的中国西施舌DNA条形码

以我国大连(DL)、日照(RZ)、启东(QD)、长乐(CL)、漳州(ZZ)和北海(BH)6个野生群体西施舌为研究对象,用引物LCO1490和HCO2198扩增线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因片段序列,PCR产物双向测序,用ClustalX进行DNA序列比对,用MEGA4.1和PhyML软件构建NJ树和ML树,用Arlequin3.11软件进行分子方差分析,研究COⅠ这一特定基因区段作为DNA条形码在识别西施舌地理群体的可行性和有效性。结果获得658bp的COⅠ核苷酸片段,其T、C、A、G含量分别为42.4%、14.8%、21.8%、21.0%,A+T(64.2%)含量明显高于G+C含量。变异位点占15.3%(101/658),其中简约信息位点占14.1%。群体内遗传距离为0.0020～0.0043,群体间遗传距离为0.0024～0.0883。群体间氨基酸序列无变异。长乐、漳州群体(DH组)与其他群体(HB组)间有显著的遗传分化(FST=0.956～0.970)。NJ树和ML树显示长乐、漳州群体聚为一支,北方的大连、日照、启东群体和南方的北海群体聚为置信度较高的另一支(BPN=99),2支间的遗传距离为0.0837,是2支内群体间遗传距离的17.8～23.5倍。本研究结果表明,COⅠ基因片段序列作为鉴定福建西施舌条形码是可行的,但不能将其余群体区别开来。

西施舌人工育苗及幼虫、稚贝生长研究

对西施舌 (Coelomactraantiquata)室内人工育苗进行了研究。结果表明 ,西施舌在广东的繁殖高峰期为 5～ 6月 ,用阴干加流水刺激的方法诱导亲贝排放精卵 ,其受精率和孵化率可达 98%左右。 1997年和 1999年两次育苗试验结果 :在盐度为 2 6 .0 0～ 32 .0 0、水温为 2 3～ 2 6℃条件下 ,幼虫在培育密度为 1～ 2mL- 1时生长较好 ,经 9～ 10d培育 ,可进入附着变态期 ,其壳长生长速度为14 .1μm·d- 1。稚贝阶段在日流水量为育苗水体的 1.5～ 2 .0倍时取得较好效果 ,其壳长生长速度为 112 .4 μm·d- 1。

西施舌群体遗传结构及分化的RAPD分析

采用55个随机引物对西施舌(Coelomactra antiquata)5个群体,即长乐(CL)、启东(QD)、连云港(LYG)、胶南(JN)和北海(BH)群体进行RAPD扩增。用PopGen(Version1.32)软件进行遗传多样性分析。结果共筛选出12个重复性好的引物,得到88条清晰稳定的条带,扩增片段在100 bp～3 000 bp之间,其中引物S299扩增的600 bp片段为长乐群体特有。多态位点比例为62.07%～78.26%(JN、LYG、BH、QD、CL群体分别为78.26%、77.05%、72.58%、70.05%、62.07%),Shannon指数为0.210 5～0.312 3。群体间遗传距离为0.068 3～0.223 9,其中长乐群体与其余4个群体间的遗传距离为0.182 7～0.223 9,4个非长乐群体的遗传距离为0.068 3～0.136 7。群体间遗传分化系数(Fst)为0.313 01(P<0.05),表明在整个遗传变异中群体间占31.30%。CL群体与QD,BH,JN,LYG群体间的遗传分化系数(Gst)分别为0.364 9,0.344 8,0.325 0,0.309 0;而非长乐群体之间的遗传分化系数为0.148 2～0.240 3;以上数据显示长乐群体遗传分化最大。聚类结果显示,启东和胶南群体首先聚为一支,然后与北海群体聚在一起,再和连云港群体相聚;而长乐群体则单独形成一支。

西施舌Cyt b基因核苷酸差异分析

从线粒体DNA水平对我国沿海西施舌进行了遗传差异和系统发育研究,为其保护和可持续利用提供理论依据。对4个不同地理群体西施舌Cyt b基因片段进行了扩增、测序,利用MEGA4.1进行序列比对分析,以文蛤和中华文蛤为外类群,构建系统进化树。结果获得394 bp的Cyt b基因片段,其T、C、A、G含量分别为38.4%、16.9%、23.6%、21.1%,A+T含量明显高于G+C含量。在394 bp比对位点中,有318个保守碱基,76个变异位点。其中,70个简约信息位点。长乐与其他3个群体之间的遗传距离为0.194～0.209。氨基酸序列比对结果显示长乐群体与3个非长乐群体有7个位点的氨基酸差异,遗传距离为0.053。由此可见长乐群体是一个具有明显分子遗传特征的独立群体。

利用流式细胞术研究3种贝类的血细胞分类

利用流式细胞术对西施舌(Coelomactra antiquata)、波纹巴非蛤(Paphia undulata)、双线紫蛤(Sanguinolaria diphos)3种双壳贝类的血细胞组成进行分析,结果表明3种贝类血细胞都可分为透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞3个亚群.西施舌的血细胞中,透明细胞占11.02%,小颗粒细胞占71.98%,大颗粒细胞占7.56%.波纹巴非蛤的血细胞中,透明细胞占26.41%,小颗粒细胞占49.17%,大颗粒细胞占14.95%.双线紫蛤的血细胞中,透明细胞占4.87%,小颗粒细胞占67.70%,大颗粒细胞占28.85%.

西施舌可食部分微量元素分析与评价

分析西施舌可食部分不同部位微量元素含量,评价其营养价值和重金属污染情况。用硝酸-高氯酸消化法消解组织,用电感耦合等离子体发射光谱(inductively coupled plasma atomic emission spectrometry technique,ICP-AES)法测定黄海日照、东海漳州、北部湾越南某海区(毗邻广西北海)3个地区西施舌闭壳肌、外套膜、斧足、鳃、内脏团5个部位(组织/器官)的12种元素。比较Ag、As、Cd、Co、Cr、Cu、Fe、Mn、Pb、Se、Sn、Zn元素在不同地域和不同部位的分布和含量。结果显示:10种元素的加标回收率为78.3%～112.1%,相对标准偏差为0.16%～7.46%;西施舌富含Fe、Zn、Mn、Cu、Se等人体必需的微量元素,Ag和Sn元素含量低;多数元素在同域不同部位的含量存在显著差异(P<0.05),日照西施舌外套膜、内脏团Fe的含量显著(P<0.05)高于同域其他组织及漳州、越南西施舌所有组织;西施舌As、Cd的含量超过国家卫生限量标准,但Cd的含量低于世界卫生组织、澳大利亚、香港的限量标准。