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题名从Cohn法组份Ⅳ中分离纯化人血浆蛋白C
被引量:2
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作者
王宗奎
林方昭
肖小璞
谢亦武
李长清
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机构
中国医学科学院北京协和医学院输血研究所
China Biologic Products
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出处
《中国输血杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期355-360,共6页
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基金
四川省科技支撑计划项目(2009SZ0217)
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文摘
目的探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法 ,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法 4℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5h,离心(6500g)40min,上清液依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤后,超滤透析;再通过串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析,对蛋白C进行纯化。通过SDS-PAGE鉴定蛋白C的纯度;用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;通过WHO指定的发色底物法和凝固法(一期法)测定蛋白C活性。结果纯化的蛋白C在SDS-PAGE图谱上呈现1条62kD左右的蛋白带;经过离子交换层析,蛋白C的活性回收率为(48.19±9.22)%,纯化倍数为(3.75±0.56)倍;固相化金属螯合亲和层析后,蛋白C活性回收率为(59.61±5.59)%,纯化倍数为(36.79±3.72)倍;蛋白C总活性回收率为(28.77±9.45)%,纯化倍数为(136.64±6.82)倍,比活性为(11.70±0.89)IU/mg。结论串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析可以从Cohn法组份Ⅳ中获得比活性较高的蛋白C浓缩物。
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关键词
cohn法组份ⅳ
蛋白C
分离
纯化
亲和层析
固相化金属螯合
比活性
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Keywords
cohn Fraction ⅳ
Protein C
Isolation
Purification
Immobilized metal affinity chromatography
Specific activity
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分类号
R392-33
[医药卫生—免疫学]
R457.14
[医药卫生—治疗学]
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