产低温脂肪酶菌株鉴定、发酵条件优化及酶学性质分析

为筛选高产低温脂肪酶的菌株,并对产酶条件进行优化,同时为脂肪酶的工业化开发提供生产资料。从黑龙江省漠河县土壤样品中筛选出一株产低温脂肪酶菌株,通过形态学鉴定、生理生化实验及分子生物学鉴定,确定该菌株为普城沙雷氏菌(Serratiaplymuthica)。通过单因素实验,探究温度、pH、装液量、接种量、碳源、氮源、金属离子、诱导剂等不同因素对菌株产酶的影响,通过Plackett-Burman实验,爬坡试验及响应曲面设计,优化橄榄油、蛋白胨、装液量等因素的添加量。结果表明:该菌株最优产酶条件为20℃、pH7.5、装液量42 mL、接种量0.5%、20 g/L麦芽糖、14 g/L蛋白胨、0.5 g/L的MgSO_(4)·7H_(2)O及46 mL/L橄榄油。此优化条件下,脂肪酶活为98.05 U/mL,是优化前的5.85倍。酶学性质结果表明,该脂肪酶最适温度为30℃,属于低温脂肪酶,最适反应pH为7,Mg^(2+)明显可以促进酶活。有机溶剂中甲醇和乙醇明显抑制了酶活性,而正己烷明显可以促进酶活性。该结论可为微生物资源开发利用,工业生产低温脂肪酶提供一定的理论依据及方法指导。

米黑根毛霉脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究

根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子使用偏爱性,对米黑根毛霉脂肪酶(RML)成熟肽基因进行全面密码子优化,以提高RML基因在酵母细胞中表达的水平,并对重组脂肪酶的酶学性质进行了研究。运用重叠延伸PCR合成优化后的RML成熟肽基因,并进一步构建毕赤酵母表达载体p PIC9K-RML,通过电击法转化毕赤酵母GS115菌株,经G418抗性和PCR筛选获得高拷贝转化重组子。重组酵母菌用0.5%甲醇诱导异源基因表达,在28℃摇瓶培养168 h后酶活力达到122 U/m L,较未优化的原始菌株的表达酶活提高了10倍。重组脂肪酶最适温度为45℃,最适p H值为7,甲醇体积分数为40%以下时重组RML具有较好的稳定性。

一株产低温碱性脂肪酶菌株的发酵条件优化

对一株产低温碱性脂肪酶细菌(Pseudoalteromonas.BJ17)的发酵条件进行了优化,研究各种碳源及氮源对产酶的影响,应用正交实验优化其发酵培养基组成。结果表明:最佳培养基组成为淀粉12 g/L,蛋白胨12 g/L,酵母膏3 g/L,酪蛋白2 g/L。最佳培养温度为25℃,发酵时间为16 h。

低温脂肪酶的产酶条件优化及其酶学性质

利用单因素筛选和正交试验对Burkholderia sp.SYBC LIP-Y发酵产酶的液体培养基和发酵条件进行了优化,其优化配方为:可溶性淀粉10g/L、牛肉膏15g/L、NaNO30.252g/L、橄榄油40ml/L、Tritonx-10010ml/L、初始pH7.5、接种量10%(V/V),脂肪酶酶活达到85.23U/ml,是优化前的3.63倍。通过对双水相纯化得到的脂肪酶进行酶学性质研究,确定该酶反应的最适pH为10.0,最适温度为30℃,40℃下保温60min酶活性还有80%以上,该脂肪酶为低温脂肪酶,热稳定性好,具有一定的耐醇性,应用前景广阔。

卷枝毛霉胞外/胞内脂肪酶的发酵优化及酶学性质

文章对卷枝毛霉(Mucor circinelloides)产胞外/胞内脂肪酶的发酵条件及酶学性质进行研究。采用单因素结合正交实验优化发酵条件,考察碳源、氮源、诱导物、初始pH值等因素的影响,确定适宜卷枝毛霉发酵产脂肪酶的发酵参数为葡萄糖80 g/L、酒石酸铵3 g/L、橄榄油15 g/L、初始pH8.0,在30 ℃、150 r/min培养72 h得到最高胞外和胞内脂肪酶活性分别为680 U/L和1400 U/g,比初始胞外/胞内酶活分别提高1.79倍和2.86倍。胞外和胞内脂肪酶的最适温度分别为60 ℃和50 ℃,最适pH均为8.0,在60 ℃以下保温100 h酶活仍保持80%以上,在pH6.0~9.0活性稳定。