超高效液相色谱-串联质谱法同时测定复杂基质保健食品中7种脂溶性维生素营养补充剂的含量

取约1 g混匀后的保健食品样品,加入约50℃温水5 mL和磷酸盐缓冲液(pH 7.0)5 mL,混匀后加入0.3 g脂肪酶、0.5 g木瓜蛋白酶,加盖涡旋2~3 min,于37℃振荡120 min。加入10 mL无水乙醇和1 g碳酸钾,混匀后加入10 mL正己烷和10 mL水,涡旋或振荡提取10 min,离心5 min。收集上层相,在下层相中加入10 mL正己烷,重复上述提取和离心操作一次。合并上层相,于40℃旋蒸至近干,残液用氮气吹干,用甲醇溶解残渣并稀释至5 mL,过0.22μm滤膜,滤液进入超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪。7种脂溶性维生素营养补充剂在HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)上用不同体积比的含0.1%(体积分数,下同)甲酸的甲醇溶液和0.1%甲酸溶液进行梯度洗脱分离,用电喷雾离子源正离子(ESI^(+))模式电离,用多反应监测(MRM)模式检测,基质匹配法定量。结果显示:维生素A乙酸酯、维生素A棕榈酸酯、DL-α-维生素E乙酸酯的质量浓度均在50~1000μg·L^(-1)内,维生素D2、维生素D3、维生素K1和维生素K2的质量浓度均在10~200μg·L^(-1)内与各自对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为2.06~7.56μg·L^(-1);按照标准加入法进行回收试验,回收率为83.4%~106%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.9%~4.9%;方法用于实际样品的分析,各脂溶性维生素营养补充剂的检出量和标签值基本一致。

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪尿中12种禁用兽药残留

研究建立了超高效液相色谱-串联质谱测定猪尿中β_2-受体激动剂类、硝基呋喃代谢物类、硝基咪唑类、氯丙嗪、氯霉素等5类12种禁用兽药残留量同时检测的方法。试样中加入4.5 mL 0.2 mol/L乙酸铵溶液和40μL β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶,37℃酶解2 h后,再加入1.5 mL 1.0 mol/L盐酸溶液和100μL 0.1 mol/L邻硝基苯甲醛溶液,经37℃衍生16 h,用8 mL乙酸乙酯萃取,下层水相用混合型阳离子交换固相萃取柱萃取,合并2次萃取液,氮气吹干复溶,正负离子多反应监测模式下检测,同位素内标法定量。12种化合物在各自范围内线性关系良好,相关系数(r)>0.99;氯霉素的检出限为0.05μg/L,定量限为0.1μg/L,其他化合物的检出限为0.25μg/L,定量限为0.5μg/L;在定量限1倍、2倍、10倍添加水平下的平均回收率为83.6%~115.3%, RSD为2.20%~12.34%。方法灵敏度高,稳定性好,定量准确,适用于猪尿中12种禁用兽药残留量的同时测定。

基于UPLC-Q/TOF-MS技术分析发酵胶原蛋白肽-菠萝蜜汁的代谢物变化

该文采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography quadrupole timeof-flight mass spectrometry,UPLC-Q/TOF-MS)技术采集胶原蛋白肽溶液(collagen peptide solution,PP)、未发酵菠萝蜜汁(non-fermented jackfruit juice,JJ)、发酵菠萝蜜汁(fermented jackfruit juice,FJJ)和混合发酵胶原蛋白肽-菠萝蜜汁(co-fermented peptide-jackfruit juice,FPJ)的全代谢物组分,比较FPJ组与FJJ、JJ、PP组的代谢物差异。在正、负离子模式下分别鉴定出1 388个和565个代谢物特征。采用VIP>1.0和Fold Change>2作为阈值,使用代谢组学数据库对差异代谢物精准确定,筛选出80种代谢物作为关键代谢物,包含42种寡肽、7种醇、6种氨基酸、3种有机酸、3种酯类、3种脂质、2种醛等。结果表明,FPJ组较FJJ组和JJ组中氨基酸、小肽、酯类、酸类和风味物质的含量发生明显变化,FPJ组的营养价值和感官品质得到改善。

人参皂苷Rb_(1)和Rg_(1)体外消化产物的UHPLC-TSQ MS分析

本研究采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(ultra-high-performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry,UHPLC-TSQ MS)法分析人参皂苷Rb_(1)和Rg_(1)在模拟唾液、胃液和肠液中的降解产物。在人参皂苷Rb_(1)的消化产物中发现了Rd、Rg_(3)、Rg_(5)、Rk_(1),其中在肠液中还发现了F_(2),表明F_(2)是肠液中特有的降解产物,降解途径为Rb_(1)→Rd→Rg_(3)→Rg_(5)/Rk_(1),Rb_(1)→Rd→F_(2)。在人参皂苷Rg_(1)的消化产物中发现了F_(1)和Rh_(1),降解途径为Rg_(1)→F_(1)和Rg_(1)→Rh_(1)。定量结果表明:降解产物含量在消化液中随时间而变化;在胃液中,Rg_(3)、Rd、Rg_(5)、F_(1)、Rh_(1)和Rk_(1)的达峰时间分别为1、2、4、2、2、4 h;在肠液中,7种降解产物的达峰时间均为4~6 h。另外,皂苷在唾液中的降解较胃液和肠液温和,而在胃肠道中的降解更广泛;在消化过程中,Rg_(1)比Rb_(1)更易降解。人参皂苷在消化道内会发生水解反应生成多种小分子皂苷,为Rb_(1)和Rg_(1)开发和利用提供了重要的化学与生物学基础。

关于高效液相色谱-串联质谱法测定牛肉中β-激动剂类药物残留的研究

本研究采用高效液相色谱-串联质谱法,对牛肉中的3种β-受体激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗进行检测,重点开展酶解提取与净化优化实验。结果显示,该方法具备良好的线性关系与较高的加标回收率,可检测牛肉中的“瘦肉精”药剂残留,能够为相关人员开展肉制品中β-受体激动剂的检测提供参考。

胶原蛋白降解物高效液相色谱/质谱联用分析

利用高效液相色谱/质谱联用技术分析了胶原蛋白Ⅱ和Ⅰ经变性和酶解处理得到的多肽混合物,比较研究了两种类型胶原蛋白降解物之间的区别,利用液相色谱质谱连用技术识别出了不同类型胶原蛋白中的特征肽段.胶原蛋白在50℃处理3h可溶解于盐溶液,凝胶过滤分析结果表明,热变性的胶原蛋白分子量在10万以上,因此在热变性过程中胶原蛋白的三螺旋结构被破坏但没有明显的随机降解.利用胰蛋白酶对胶原蛋白进行了酶切处理,在酶用量为2%,pH 8.1～8.2,温度37℃条件下,处理20h后胶原蛋白降解较完全,多肽混合物的平均分子量在1万以下.利用液质联用技术研究Ⅱ型和Ⅰ型胶原蛋白降解物中的多肽,通过多级质谱分析了胶原蛋白降解物多肽的序列.结果表明,不同类型的胶原蛋白酶解后的多肽混合物中存在特定序列的特征肽段,利用特征肽段进行胶原蛋白类型识别是可行的.

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱测定蟾酥中铜、砷、镉、汞、铅含量及砷化学形态

建立了微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定蟾酥中Cu、As、Cd、Hg、Pb等元素含量的分析方法,检出限为0.28～5.7μg/L,元素加标回收率均在91.5%～115%。用1.2mol/LHCl浸提蟾酥中的As形态,利用高效液相色谱(HPLC)与电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)联用技术对蟾酥样品中的As化学形态进行了初步探讨,发现其中As主要以有毒的无机As(Ⅴ)形态存在,并讨论了形态分析的方法及结果。本方法适用于蟾酥中药样品质量控制和安全评估的要求。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛奶和奶粉中的青霉素类药物及其主要酶解代谢产物

建立了液用色谱-串联质谱法同时测定牛奶和奶粉中4种青霉素（青霉素G、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林）及其4种β-内酰胺酶酶解产物（青霉素G脱羧咪唑酸、青霉素V脱羧噻哗酸、阿莫西林脱羧噻唑酸、铤苄州林脱羧噻唑酸）残留的方法.样品采用乙腈-水提取，浓缩后经HLB柱净化，用液相色谱-串联质谱检测，外标法定量。结果表明，青霉素原药在4～200μg／L，酶解产物在10～500μg／L范围呈良好线性，线性相关系数均大于0．99；样品检出限为5～50μg／kg（S／N≥3），定量限为8～100μg／kg（S／N≥10）；对牛奶和奶粉样品分别进行3个水平的加标回收实验（n=6），牛奶中青霉素及其酶解产物的平均回收率为83.48％～96．97％，相对标准偏差为3．86％～10．87％；奶粉中青霉素及其酶解产物的平均回收率为82.70％-95．14％，相对标准偏差为3．02％～9．81％。该方法稳定、可靠，通用于牛奶和奶粉中青霉素类药物及其酶解代谢产物的测定.

体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定海产贝类中镉的形态

运用体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(SEC-HPLC-ICP-MS)分析了高镉积累扇贝和低镉积累菲律宾蛤仔中镉的存在形态,并结合体外全仿生消化技术,研究了在唾液、胃、肠无机物和有机物(含消化酶)作用下,扇贝和菲律宾蛤仔中镉的主要存在形态。结果发现:扇贝中Cd总量约为菲律宾蛤仔的10倍;在扇贝中检测到3种Cd形态:金属硫蛋白(MT)-Cd、谷胱甘肽(GSH)-Cd和半胱氨酸(Cys)-Cd;在菲律宾蛤仔中检测到2种Cd形态:MT-Cd和GSH-Cd;以峰面积作参考进行比较,扇贝中MT-Cd和GSH-Cd含量分别约为菲律宾蛤仔的5.6和2.0倍。结合体外全仿生模型发现,在扇贝胃全仿生提取液中,检测到1种未知小分子有机镉形态(Cd-X),在扇贝肠全仿生提取液中检测到4种Cd形态,其中MT-Cd是主要形态;而在菲律宾蛤仔胃、肠全仿生提取液中均仅检测到1种未知小分子有机态镉(Cd-X)。本实验证明贝类中的MT-Cd,GSH-Cd,Cys-Cd中络合的Cd在生物体胃肠消化液作用下会发生解离。

高效液相色谱-质谱联用测定胶原蛋白中的羟脯氨酸

建立了一种简单、快速地测定胶原蛋白中羟脯氨酸(HYP)的高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESI/MS)方法。胶原蛋白经酸水解后,以乙腈-0.05%的三氟乙酸水溶液(体积比为5∶95)为流动相,以1.0mL/min的流速在C8反相柱上进行分离。以茶氨酸为内标,利用质谱定性定量测定HYP。在电喷雾正离子模式下,对m/z132和m/z175离子进行选择离子监测。在11.7～117mg/L范围内,HYP与内标物茶氨酸的峰面积比和HYP的质量浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.9993。含量测定的相对标准偏差为1.87%,回收率为97.85%～101.76%。此方法流动相简单,分析时间短且无需衍生处理,抗干扰能力强,能准确快速地测定胶原蛋白中HYP的含量。

碱消解-高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定生物样品中的甲基汞和乙基汞

建立了碱消解-高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用系统测定生物样品中甲基汞(MeHg)与乙基汞(EtHg)的分析方法。为提高灵敏度,选用微流量的PFA雾化器,在优化的检测条件下,MeHg及EtHg检出限可达到0.036μg/L和0.03μg/L;线性范围达到4个数量级,两条工作曲线线性相关系数为1。对1.78μg/L MeHg、1.65μg/L EtHg的混合标准溶液重复测定7次,色谱峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为1.79%和1.44%。对标准物质BCR 464(金枪鱼)的分析结果表明,测定值与标准值基本吻合,但略低于标准值;甲基汞和乙基汞的加标回收率分别为85.9%和84.5%。高效液相色谱与质谱联用技术的高灵敏度和低检出限能够满足生物样品中汞形态定量分析的要求。

体积排阻高效液相色谱—电感耦合等离子体质谱法测定紫菜中镉(Cd)的形态

运用体积排阻高效液相色谱—电感耦合等离子体质谱联用技术(SEC-HPLC-ICP-MS)分析了紫菜中Cd的存在形态,结果发现,在紫菜水提取液中检测到3种Cd形态,根据其保留时间确定为植物螯合肽(PC)3-Cd、谷胱甘肽(GSH)-Cd和1种未知小分子有机态Cd,结合体外全仿生消化技术,研究了在唾液、胃、肠无机物和有机物(含消化酶)作用下,紫菜中Cd的主要存在形态,分析发现在紫菜胃全仿生提取液中,检测到2种未知小分子有机态Cd,其中以保留时间为24.2 min的Cd形态为主要存在形态。在肠全仿生提取液中检测到2种Cd形态,其中(PC)3-Cd是主要存在形态。有关(PC)3-Cd在生物体内的代谢规律还需进一步研究。实验确证了Cd在紫菜中的主要有机形态,为紫菜食用安全风险评价提供重要依据。

急性瘦肉精中毒检材的QuEChERS净化-液质联用快速确证方法

目前液相色谱串联质谱法测定动物源性食品中瘦肉精普遍采用酶水解提取、固相萃取净化的方式处理样品,该方法耗时长、分析成本高。本研究采用酸水解和酶水解两种提取方式结合QuEChERS(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safe)净化和高效液相色谱串联质谱建立了动物性食品中特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺和克伦特罗4种β2受体激动剂的快速定性确证和定量检测方法。采用酶水解提取-QuEChERS净化处理样品,在电喷雾离子源正离子扫描(ESI+)和多反应监测(MRM)模式下,4种瘦肉精在1.0~ 20.0 μg/L 浓度之间呈线性,线性相关系数均大于0.999,检出限和定量限分别为0.1和0.3 μg/kg,猪肉和牛肉样品中4种化合物的回收率为78.5%~112%,相对标准偏差RSD为2.8%~8.9%。采用酸水解法代替酶水解提取时,尽管对于样品中莱克多巴胺测定结果稍偏低,但样品前处理时间大大缩短。两种提取方法结合使用对于提高瘦肉精引起的食物中毒应急处置效率具有重要意义。

混合无机酸消解-固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法分析贝类壳体中的3种全氟磺酸化合物

建立了采用混合无机酸消解-固相萃取(SPE)-高效液相色谱-电喷雾电离串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)分析贝类壳体中的3种全氟磺酸化合物的方法。将贝壳粉经硝酸/盐酸混合酸消解,用氢氧化钠调节消解液的pH值至6后采用OasisWAX固相萃取柱富集净化,然后采用内标法通过HPLC-ESI-MS/MS在分时段选择反应监测模式下分析上述全氟磺酸化合物。结果表明,该方法对于贝壳中全氟丁烷磺酸、全氟己烷磺酸和全氟辛烷磺酸的检出限(LOD)分别为0.28,0.42和0.43ng/g,加标回收率为94.88%～96.24%。采用此方法对渤海湾两种双壳贝类壳体进行的采样分析也表明,贝壳中3种目标污染物的含量范围为<LOD～0.70ng/g,比其在贝类软组织中的含量低约1个数量级。实验结果表明混合酸消解-SPE提取是检测贝类壳体中此类污染物的有效前处理方法。

液相色谱-质谱联用测定乳制品中掺加胶原蛋白的方法研究

羟脯氨酸是胶原蛋白的特有成分，通过测定乳制品水解液中的羟脯氨酸来鉴定乳制品中是否掺加了胶原水解蛋白。建立了高效液相色谱-质谱检测羟脯氨酸的方法，采用C8色谱柱，以乙腈-水为流动相，使用电喷雾离子源，正离子检测模式，选择离子方式扫描。结果表明，羟脯氨酸的检出限为1．5mg／kg，在质量浓度为0．1-12mg／L围内呈现良好线性，三个不同添加量的平均回收率为82．0％-91．5％，相对标准偏差为3.3％-8．5％。该方法流动相简单，无需对样品进行衍生，操作简便，定性准确，重现性好，可用于乳制品质量安全的监督检验。

液相色谱串联质谱法测定水产品中苯甲酸雌二醇的残留

通过对前处理以及仪器方法的研究和优化，建立水产品中苯甲酸雌二醇残留的液相色谱串联质谱检测方法。样品经甲基叔丁基醚提取，LC—C18固相萃取小柱净化，甲醇一水溶液定容后离心去脂。采用甲醇一水为流动相，经WatersXBridgeRP-18色谱柱（150mm×4．6mm，5μm）分离后，电喷雾串联质谱测定，以甲羟孕酮-D3为内标进行定量。在标准添加水平1～10μg／kg范围内，加标回收率为77．9％-113．5％，相对标准偏差不超过9．4％，定量限为1μg／kg。该方法灵敏度高，重复性好，适用于各种水产品中苯甲酸雌二醇残留量的测定。

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用测定生物样品中的有机汞

建立了酸提取-高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术（HPLC—ICP—MS）测定生物样品中甲基汞、乙基汞、苯基汞等3种有机汞的分析方法。鱼肉和贝类样品经盐酸消解，苯萃取，硫代硫酸钠溶液反萃取后，采用醋酸铵／L-半胱氨酸缓冲盐及甲醇体系组成的流动相按一定比例进行梯度洗脱，经前处理的生物样品在液相色谱中经C18柱分离后，进入电感耦合等离子体质谱检测其甲基汞、乙基汞和苯基汞的浓度。3种有机汞化合物均在0．50～50．Oμg／L范围内呈现良好的线性关系，线性相关系数（r）均大于0．9998。方法检出限为0．010～0．038mg／kg；3种有机汞样品加标的RSD均小于12．2％；两个水平的加标回收率在50．8～129％。

北极海洋红球菌(Rhodococcus sp.)B7740产类胡萝卜素的提取条件优化及甲基萘醌类类胡萝卜素鉴定

利用酶的高效性和专一性破裂细菌细胞壁,实现对类胡萝卜素的温和提取并鉴定。以加酶量、酶解时间和料液比作为单因素进行正交试验,得出最优提取条件为：菌粉与溶菌酶配比1∶10（mg/m L）、酶解时间80 min、料液比1∶80（mg/m L）,此条件下类胡萝卜素提取量为675 μg/g。采用液相色谱-质谱串联进行类胡萝卜素的结构鉴定,液相色谱-质谱条件为：色谱柱YMCC_（30）（4.6 mm×150 mm,5μm）、检测波长450 nm、大气压力化学电离源、正离子模式、离子源温度230℃、充电电压2 000 V、质荷比扫描范围200~1 200,鉴定出分子式分别为C_（51）H_（76）O_2和C_（51）H_（74）O_2的2种甲基萘醌类胡萝卜素。

基于DNA链置换反应的新型固定化酶反应器制备及应用

建立了一种新型的酶固定化方法,采用DNA链置换反应成功地在单链DNA标记的磁性纳米粒子上实现了酶的链置换无损更替。该技术可实现目标酶的再利用,节约了生产成本。制备的固定化胰蛋白酶微反应器具有较好的重复利用性和高酶切效率,重复使用10次后仍可保持原酶活性的86%;利用链置换反应制备的MNPs@DNATrypsin酶切马心肌红蛋白5 min后,即可获得95%±0%(n=3)的氨基酸序列覆盖率,远超过相同条件下自由酶酶切12 h的结果。实验表明,发展的固定化酶技术具有高磁响应性,便于从反应体系中回收固定化酶和重复使用,同时此技术可显著提高酶活性,因此可用于固定各种重要的酶,同时可将其广泛应用于各种酶促反应中。

基于核酸适配体的微流控芯片酶反应器用于蛋白质的分析

将核酸适配体作为胰蛋白酶固定化介质,制备了一种新型的微流控芯片酶反应器,并与高效液相色谱-串联质谱联用,搭建了在线分析平台;分别使用标准蛋白及混合蛋白样品对芯片的酶解效率及联用平台的分析能力进行了初步评价。结果表明,5 ng肌红蛋白经该平台分析后肽段覆盖率可达到37%;对500 ng混合蛋白进行3次平行分析,肽段覆盖率及相对标准偏差分别为44.3%、6.5%(牛血清白蛋白),65.0%、2.7%(肌红蛋白)和62.0%、5.6%(细胞色素c);初步实验表明,该在线分析平台具有检测灵敏度高、重现性好、酶解效率高的特点,有望在蛋白质组学分析中发挥重要作用。