凯氏定氮法测定医用重组胶原蛋白修复敷料中蛋白质

建立了测定医用重组胶原蛋白修复敷料中胶原蛋白含量的凯氏定氮法。参照《中华人民共和国药典》2020年版通则0731蛋白质含量测定方法第一法,将钨酸沉淀法进行了改良,对样品进行处理得到非蛋白氮样品溶液,用全自动凯氏定氮仪测定样品与非蛋白氮样品中的氮含量,并计算样品中的胶原蛋白含量。样品中非蛋白氮的平均质量分数为0.0100%,相对标准偏差为1.60%(n=6);胶原蛋白的平均质量分数为0.0999%,相对标准偏差为2.13%(n=6),样品加标平均回收率为98.82%。该方法可以有效消除样品中非蛋白氮的干扰,准确测定医用重组胶原蛋白修复敷料的胶原蛋白含量。

胶原检测方法的研究进展

胶原作为一种生物材料,因其良好的理化性能和生物学性能,在生物材料、生物医学、食品、医美等领域有着广泛的应用前景。胶原其准确、高效的检测对于相关领域的研究与发展具有重要意义。文章对胶原的结构鉴定、类型鉴别、含量测定的方法进行介绍,以期为相关领域的研究提供参考。

液相色谱/质谱联用法分析不同年龄鼠皮肤中I型、III型胶原蛋白相对含量

哺乳动物皮肤中真皮内的胶原蛋白含量约占70%,主要是I型、III型和少量V型胶原蛋白。利用稀酸溶解和酶法提取了大鼠皮肤中的总胶原蛋白,将胶原蛋白粗提品在60℃变性后用胰蛋白酶进行降解,液相色谱/质谱联用法分析两种胶原蛋白的特征多肽,并研究不同生长期大鼠皮肤中I型和III型胶原蛋白相对含量。结果表明,大鼠皮肤中的III型胶原蛋白的相对含量随生长期延长逐渐降低,而I型胶原蛋白的相对含量逐渐升高,8周后两种胶原蛋白的比例趋于稳定。表明使用高效液相色谱/质谱联用法分析组织中的胶原蛋白类型及其动态变化具有可行性,为更好的临床应用提供实验基础。

成人腹股沟区腹横筋膜胶原含量变化与腹股沟疝发病及复发的关系

探讨腹股沟区腹横筋膜胶原含量变化与成人腹股沟疝发病及复发的关系,为临床工作提供理论参考。方法:以15例非疝成人作为对照组,成人腹股沟疝40例,斜疝组16例,直疝组13例,复发疝组11例。以氯胺鄄T法测定其腹股沟区腹横筋膜的胶原含量。分别探讨后者的改变与年龄的关系,比较疝组与对照组之间,以及各疝组之间的胶原含量,结果:正常成人腹磺筋膜的胶原含量与年龄呈负相关关系;疝病人中含量明显低于非疝病人;在疝病人中,胶原含量大小顺序为斜疝>直疝>复发疝。结论:成人疝病人多为中、老年人,原因之一为随着年龄的增长,腹横筋膜中的胶原含量减少,抗张力强度降低。

柱前衍生化-HPLC法测定市售3种胶类药材中L-羟脯氨酸和胶原蛋白的含量

目的:建立测定胶类药材中L-羟脯氨酸(L-Hyp)和胶原蛋白含量的方法,并比较对照药材与市售药材中两种成分的含量。方法:采用柱前衍生化法进行前处理,并采用高效液相色谱法测定样品中L-Hyp的含量:色谱柱为Kromasil C18,流动相为[乙腈-0.1 mol/L醋酸钠缓冲液(p H 6.5,7∶93,V/V)]-[乙腈-水(4∶1,V/V)](梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为43℃,进样量为20μL;再通过折算系数计算样品中胶原蛋白的含量。结果:L-Hyp检测质量浓度线性范围为2.5~40μg/m L(r=0.999 9);定量限为0.20μg/m L,检测限为0.05μg/m L;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<4.0%;加样回收率为96.03%~102.07%(RSD=2.20%,n=9)。28批市售药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量有一定差异,其中13批市售阿胶药材与阿胶对照药材中两种成分的含量较为接近,而5批龟甲胶和7批鹿角胶药材中两种成分的含量高于其对照药材。结论:该方法准确、可靠,适用于测定胶类药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量。

小球藻生长因子对UVA诱导人皮肤成纤维细胞紫外损伤的保护作用研究

本研究通过苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、紫外分光光度法对小球藻生长因子(Chlorella growth factor,CGF)中各营养成分进行含量测定;采用MTT法和酶联免疫吸附(ELISA)法分别测定CGF对紫外损伤的人皮肤成纤维细胞(HSF)的保护作用和胶原蛋白相关因子的表达。结果表明核苷酸在CGF中占比为84.40%±0.73%。CGF预处理能显著减轻UVA对HSF细胞的增殖抑制作用,与模型组相比以50μg/mL浓度CGF处理可使HSF细胞活力提高75.05%,且在5~50μg/mL内存在一定的剂量依赖关系。ELISA实验结果发现CGF可提高HSF细胞中基质金属蛋白酶抑制酶-1(TIMP-1)、I型胶原蛋白(COL-I)的表达,降低基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的表达。CGF是优异的外源性核苷酸营养物质,能有效减轻UVA引起的HSF细胞损伤,其作用可能与促进胶原蛋白的合成有关。

垂体腺瘤质地的MRI评估及其与胶原含量的关系

目的评估MRI T2WI与弥散加权成像(DWI)预测垂体腺瘤质地的价值,分析肿瘤质地与胶原含量的关系。方法分析38例垂体腺瘤的术前MRI,分别在T2WI、表观弥散系数(ADC)上测量肿瘤与脑桥的信号强度比(RT2和RADC),并与肿瘤胶原含量进行比较。结果肿瘤质软13例,质中17例,质韧8例。不同质地的垂体腺瘤之间,在T2WI信号值、RT2、ADC、RADC之间均有差异(均P<0.05)。RT2与肿瘤质地一致性最高。质软组垂体腺瘤平均胶原含量为(1.51±0.91)%,质中组为(7.35±2.99)%,质韧组为(18.10±8.24)%,三组有明显差异(P<0.05)。结论 T2WI和ADC均有预测垂体腺瘤质地的价值,以T2WI更可靠。垂体腺瘤质地越韧,胶原含量越高。

黄芩茎叶总黄酮灌胃对原发性高血压大鼠心肌重构及心肌组织NF-κB表达的影响

目的观察不同剂量黄芩茎叶总黄酮对原发性高血压大鼠心肌重构的影响,并探讨其机制。方法将50只原发性高血压大鼠随机分为高血压组、贝那普利组及低、中、高剂量黄芩组,每组各10只,另取10只普通Wistar大鼠作为对照组。贝那普利组及低、中、高剂量黄芩组分别给予每日5.0 mg/kg贝那普利及17.5、35.0、70.0 mg/kg黄芩茎叶总黄酮灌胃处理,高血压组、对照组给予等量生理盐水灌胃。连续给药8周后,采用尾动脉容积法测定各组大鼠血压及心率;麻醉大鼠后分离左心室,计算各组大鼠心脏重量指数;HE染色法观察各组大鼠心肌组织形态;ELISA法检测各组大鼠心肌组织中心肌胶原指标Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PⅠCP)、Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)及核转录因子κB(NF-κB)表达。结果大鼠收缩压高血压组、低剂量黄芩组>中剂量黄芩组、高剂量黄芩组、贝那普利组>对照组(P均<0.05),各组大鼠心率比较差异均无统计学意义。大鼠心脏重量指数高血压组、低剂量黄芩组>中剂量黄芩组、高剂量黄芩组、贝那普利组>对照组(P均<0.05)。对照组大鼠心肌组织间隙较窄,可见少量胶原占据;高血压组大鼠心肌组织间隙增宽,肌间隙中胶原含量增多;中、高剂量黄芩组及贝那普利组大鼠心肌组织较高血压组间隙变窄且胶原减少;低剂量黄芩组较高血压组心肌结构改善不明显。大鼠心肌组织PⅠCP、PⅢNP比较,高血压组、低剂量黄芩组高于中剂量黄芩组、高剂量黄芩组、贝那普利组、对照组(P均<0.05);大鼠心肌组织NF-κB表达比较,高血压组、低剂量黄芩组>中剂量黄芩组、高剂量黄芩组、贝那普利组>对照组(P均<0.05)。结论黄芩茎叶总黄酮可抑制原发性高血压大鼠的心肌重构,且中剂量应用时效果最好,其机制可能与抑制NF-κB信号通路引发的炎症反应有关。

胶原海绵的羟脯氨酸含量测定

选用普通实验室均能实现的 Woessner第 法对自制胶原海绵和 Gelfix(国外样品 )进行了羟脯氨酸含量测定 ,结果表明 ,该方法操作简单 ,重复性好 :自制胶原海绵的羟脯氨酸含量稳定 ,与国外样品的羟脯氨酸含量接近 ,且与胶原蛋白的羟脯氨酸含量接近 。

富血小板血浆结合松质骨移植治疗腕舟骨骨不连的实验研究

目的通过实验研究探讨富血小板血浆结合松质骨移植治疗腕舟骨骨不连的效果。方法健康新西兰大白兔36只,随机分为A、B两组,每组18只,两组建立腕舟骨骨不连动物模型后,A组为腕舟骨骨不连处植入松质骨治疗,B组为舟骨骨不连处植入松质结合PRP治疗,术后8周观察动物一般状况与骨愈合情况。结果术后A组骨基质可见且钙盐沉积不明显,B组骨不连区能够看到诸多新生骨,但新生骨量较A组低;术后8周B组实验侧修复性新骨形成均多于A组,对比差异有统计学意义(P<0.05)。术后8周观察组的软骨总体形态与微形态评分分别为1.74±0.43分和3.20±1.74分,对照组分别为3.61±0.56分和7.42±1.24分,观察组明显少于对照组(P<0.05)。两组胶原含量在术后都呈现明显上升的趋势,术后8周观察组与对照组的胶原含量分别为0.24±0.03ng/L和0.17±0.06ng/L,观察组明显高于对照组(P<0.05)。结论富血小板血浆结合松质骨移植治疗腕舟骨骨不连对骨的再生与修复有明显的促进作用,应用比较方便,有比较好的应用价值。

天麻舒心方对SHR左心室超微结构及胶原的影响

目的观察自发性高血压大鼠(SHR)左心室超微结构、胶原改变特点及天麻舒心方干预效果。方法将50只SHR随机分为天麻舒心方高、中、低剂量组,阳性对照组,模型对照组,并以10只Wistar大鼠作为正常对照组,分别给予不同剂量天麻舒心浸膏、氯沙坦钾片混悬液、蒸馏水。18周后,应用透射电子显微镜观察心肌超微结构变化,测量OD值,计算心肌胶原含量。结果模型对照组心肌肌丝多处断裂、溶解,排列扭曲,粗细不等,线粒体肿胀、变形、聚集,嵴模糊排列混乱;阳性对照组及中药各剂量组上述结构均有不同程度的改善。与正常对照组比较,模型对照组心肌胶原含量显著增加(P<0.05);而各给药组胶原含量较模型对照组均有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SHR心肌超微结构显著受损,心肌胶原蛋白含量显著升高,天麻舒心方可改善高血压心肌超微结构的损伤,对心肌胶原代谢具有改善作用。

胆总管端端吻合自然愈合过程的实验研究

目的建立犬胆总管横断损伤、胆道支架管引流、胆总管端端吻合的动物模型,探讨胆总管端端吻合的自然愈合过程。方法将25只犬随机分成对照组(n=5)与实验组(n=20),实验组分为4组,于术后3 d5、d、7 d9、d,胆道造影、取吻合处胆总管作羟脯氨酸、断裂强度、HE染色、Masson染色检测。结果实验组术后无一例胆漏;羟脯氨酸(mg):术后第3 dvs 5 d7、d、9 d、对照组差异有统计学意义(9±1.87 vs 20.6±2.302、2.6±2.70、27±4.121、6.54±2.22,均P<0.05),术后第5d vs 7 d差异无统计学意义(P=0.265)。断裂强度(N):术后第3 d vs 5 d、7 d、9 d差异有统计学意义(2.5±0.94 vs 5.72±1.057、.76±0.72、8.68±0.92,均P<0.05),术后第7 d vs 9 d差异无统计学意义(P=0.131)。术后5～7 d,HE染色见胆管壁增厚;Masson染色见大量胶原纤维增生、排列杂乱。结论胆总管横断损伤、胆道支架管引流、胆总管端端吻合术后,胆管壁胶原含量、断裂强度迅速升高,术后5～7 d,接近正常胆管组织水平;胆管壁增厚、胆管壁胶原纤维增生。

海蜇皮水解条件的研究

以肽含量为指标,对海蜇皮的水解用酶进行了选择,认为风味蛋白酶和真菌酸性蛋白酶水解效果较好,并对这两种酶进行了单因素实验,结果表明:底物浓度为2%时,风味蛋白酶较好的水解条件为45℃、pH6.0、加酶量2700U/g,水解90min,肽提取率可达62.5%;真菌酸性蛋白酶较好的水解条件为55℃、pH2.5、加酶量2000U/g,水解90min,肽提取率可达74.7%。

可溶性胶原蛋白含量、MFI、CAF与牛肉嫩化的关系

宰后向牛的股二头肌注射 Ca Cl2 和木瓜蛋白酶 ( Papain)来嫩化牛肉 ,并于后熟2 4 h左右进行了肌原纤维小片化指数 ( MFI)、粗钙激活因子活性 ( CAF)和可溶性胶原蛋白含量等指标的测定。实验结果表明 ,这些指标对于衡量牛肉嫩度 。

大通牦牛骨骼肌胶原纤维含量增龄性变化特点

为探讨高原牦牛随着年龄的增长,骨骼肌中胶原纤维含量的变化规律及其对高原低氧环境的适应性。本研究以不同生长期大通牦牛作为研究对象,并以平原黄牛作对照,对生长发育过程骨骼肌中胶原纤维含量变化进行测量。结果表明,大通牦牛骨骼肌中胶原纤维含量从1日龄的一个相对低点,到30日龄迅速增长至一个峰值,然后再逐渐下降,至成年时,胶原纤维含量降至最低。平原黄牛骨骼肌中胶原纤维含量1日龄处于峰值,与其他年龄组差异显著(P<0.05),而随着年龄的增长,胶原纤维含量下降,30日龄、180日龄和成年组差异不显著(P>0.05);相同发育阶段大通牦牛骨骼肌中胶原纤维含量均高于平原黄牛胶原纤维含量,且差异显著(P<0.05)。结果提示,大通牦牛骨骼肌中胶原纤维具有适应高原环境的组织学特点,但也在个体发育过程中,不断发生改变,以满足机体生长发育的需要和对外界环境的适应。

部分哺乳动物和鱼类胶原蛋白中氨基酸的组成和含量的比较

采用日立L-8800型氨基酸自动分析仪分析了部分哺乳动物e和e各氨基酸含量的差异为胶原蛋白的合理开发应用提供参考。结果表明各样品中均含有18种氨基酸,其中必需和半必需氨基酸有8种,但苏氨酸(Thr)、蛋氨酸(Met)和羟脯氨酸(Hyp)含量有明显差别。

兔关节内积血对关节软骨影响的实验研究

目的:探讨短期关节内积血对关节软骨基础研究的影响。方法:新西兰大白兔36只随机分为2组。A组:右后膝关节内注入自体静脉血4ml,左后膝关节作为空白对照,在第3天重复一次,剂量同前。B组:右后膝关节内注入自体静脉血4ml,左后膝关节2ml,其余步骤与A组完全相同。分别于第1周、4周、8周取材,测定水、胶原含量的改变,同时进行大体及光镜观察。结果:①受出血影响,第1、4周含水率都明显增加(均为P<0.05),第8周时与对照组比较无明显差异(P>0.05)。胶原含量在第1周低于对照组(P<0.05),4ml组低于2ml组(P<0.05)。第4、8周与对照组比较均无明显差异(P>0.05)。②HE染色结果:实验侧软骨表面不光滑,细胞排列欠整齐,潮线变模糊。4ml侧比2ml侧变化明显。结论:不同量的关节内出血对关节软骨的影响不同,量大者对含水率、蛋白多糖、胶原的影响大于量小者。

隧道式拖线法对瘘管大鼠Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响

目的：通过对体表瘘管大鼠模型隧道式拖线法治疗,研究在治疗不同时期Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达量的变化。方法：采用免疫组化法在隧道式拖线法后第3、5、7、9、14 d和完全愈合时取大鼠局部组织进行Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达量测定。结果：治疗组和对照组愈合时间分别为（16.25±1.96）d和（23.75±0.96）d,具有显著性差异。治疗组Ⅰ型胶原表达量在术后第9 d出现明显下降后逐级上升,在第14 d及愈合时治疗组高于对照组和空白组（P〈0.05）,而Ⅲ型胶原表达量在第9 d至第14 d上升,且高于对照组和空白组,具有显著性差异（P〈0.01）。结论：在隧道式拖线法后第9~14 d大鼠的Ⅰ/Ⅲ型胶原表达量比值升高,有助于创面愈合。

黄韧带的病理和胶原含量变化及其与颈椎管狭窄症的关系

目的 :探讨颈椎黄韧带退行性改变的病理和胶原含量变化的特点及其与颈椎管狭窄症的关系。方法 :对比观察颈椎管狭窄症患者组及正常对照组颈椎黄韧带的显微和超微结构变化特点 ,并用Woessner′s法对其胶原含量进行生化测定。结果 :患者组黄韧带弹力纤维减少 ,胶原纤维代偿性增多 ,纤维排列紊乱 ,并出现较明显的变性及钙化 ;黄韧带胶原含量较正常对照组显著增高 (P <0 0 5 )。结论 :患者颈椎黄韧带弹力纤维减少 ,且变性及钙化 ,而胶原含量却显著增高。前者引起黄韧带弹性下降 ,而后者则是黄韧带肥厚的主要原因。黄韧带弹性下降且肥厚可导致或加剧颈椎管狭窄 ,引起颈髓后方受压。

重组人红细胞生成素胶原蛋白双层微条的制备及含量测定

目的:制备重组人红细胞生成素(rhEPO)胶原蛋白双层微条并建立其含量测定方法。方法:以胶原蛋白为包裹材料,以硫酸软骨素钠为释放调节剂,采用凝胶加压成型的方法制备双层微条;采用反相高效液相色谱法测定双层微条中rhEPO的含量。结果:rhEPO检测浓度线性范围为0 .25～20μg/ml(r=0 9998) ,平均回收率为96 .2% ,日内、日间精密度分别为0. 9%、2 .6%(n=3)。结论:rhEPO胶原蛋白双层微条制备方法简单可行,含量测定方法准确、可靠。