血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平联合检测诊断慢性HBV感染肝硬化患者Child-Pugh分级的价值

目的:观察血清磷酸酪氨酸衔接蛋白1(APPL1)、胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)、胱抑素C水平联合检测诊断慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染肝硬化患者Child-Pugh分级的价值。方法:选取2021年1月至2023年1月该院收治的136例慢性HBV感染肝硬化患者进行前瞻性研究,设为研究组。选取同期于该院体检的136名健康者为对照组。比较两组血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平;比较不同Child-Pugh分级慢性HBV感染肝硬化患者入院时血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平;采用Spearman相关性分析慢性HBV感染肝硬化患者入院时血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平与Child-Pugh分级的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估慢性HBV感染肝硬化患者入院时血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平联合检测诊断Child-Pugh分级的价值。结果:入院时,研究组血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);入院时,Child-Pugh分级为C级慢性HBV感染肝硬化患者血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平均高于B级、A级者,且B级者高于A级者,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,慢性HBV感染肝硬化患者入院时血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平与Child-Pugh分级均呈正相关(r>0,P<0.05);ROC曲线分析结果显示,慢性HBV感染肝硬化患者入院时血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平联合检测诊断Child-Pugh分级为C级的AUC为0.931,具有较高诊断价值。结论:血清APPL1、CTHRC1、胱抑素C水平联合检测诊断慢性HBV感染肝硬化患者Child-Pugh分级的价值高于三者单项检测。

血清纤维胶凝蛋白3、胶原三股螺旋重复蛋白1对非小细胞肺癌的诊断价值及与临床病理特征的关系

目的 探讨血清纤维胶凝蛋白3(FCN3)、胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值及与临床病理特征的关系。方法 我院2021年7月~2022年8月收治的73例NSCLC病人为研究组;同期来本院体检的健康者55例为对照组。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清FCN3、CTHRC1水平;Pearson法分析NSCLC病人血清FCN3、CTHRC1水平的相关性;Logistic回归分析NSCLC发生的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清FCN3、CTHRC1水平对NSCLC发生的诊断价值。结果 研究组血清FCN3、CTHRC1水平高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);血清FCN3、CTHRC1水平与NSCLC病人癌细胞分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05);Pearson分析显示,NSCLC病人血清FCN3、CTHRC1水平呈正相关关系(r=0.258,P=0.028);Logistic回归分析显示,血清FCN3、CTHRC1表达增高是NSCLC发生的影响因素(P<0.05);血清FCN3、CTHRC1水平诊断NSCLC发生的ROC曲线下面积分别为0.869、0.810,二者联合诊断NSCLC发生的ROC曲线下面积为0.881,优于血清FCN3、CTHRC1各自单独诊断。结论 NSCLC病人血清FCN3和CTHRC1水平升高,且与癌细胞分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,是NSCLC发生的危险因素,二者联合检测对NSCLC发生更具诊断价值。

阿尔茨海默病患者血清GGT、CTHRC1表达水平检测及临床意义

目的 研究阿尔茨海默病(AD)患者血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)和胶原蛋白三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)表达及临床意义。方法 以120例AD患者为AD组,以同期体检健康者60例为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清GGT和CTHRC1表达及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6,采用免疫比浊法检测血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。Pearson相关分析AD组血清GGT、CTHRC1表达与TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP及简明精神状态量表(MMSE)评分的相关性。多因素Logistic回归分析影响AD发生的危险因素。受试者工作特征曲线分析血清GGT、CTHRC1水平对AD的诊断价值。结果 AD组患者血清GGT、CTHRC1、TNF-α、IL-6、IL-1β及hs-CRP水平高于对照组,MMSE评分明显低于对照组(均P<0.05)。AD组患者血清GGT、CTHRC1表达与TNF-α、IL-6、IL-1β及hs-CRP水平呈正相关,与MMSE评分呈负相关(均P<0.05)。GGT、CTHRC1水平升高及MMSE评分降低是影响AD发生的独立危险因素(P<0.05)。血清GGT和CTHRC1单独及联合检测诊断AD的曲线下面积(95%CI)分别为0.780(0.726~0.836)、0.728(0.705~0.810)、0.909(0.875~0.942)。联合检测对AD的诊断价值高于血清GGT和CTHRC1(Z分别为4.370和5.657,P<0.05)。结论 AD患者血清GGT和CTHRC1表达水平与患者炎症反应及认知程度有关,两者联合检测对AD具有较高的诊断价值。

MRI联合血清CTHRC1、sPD-1在类风湿关节炎早期中的应用价值

目的探讨核磁共振成像(MRI)联合血清胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)、可溶程序性死亡分子-1(sPD-1)在类风湿关节炎(RA)早期中的应用价值。方法选取2021年10月~2022年10月在本院收治的60例早期RA患者为早期RA组,随机选取同期60例良性关节炎患者为非RA组。早期RA组和非RA组均进行MRI检测,检测血清CTHRC1、sPD-1水平。分析MRI对早期RA评估中的应用价值,以《2008年美国风湿病学会(ACR)年会指南》为金标准,采用Kappa一致性检验,分析MRI在早期RA诊断的一致性。比较RA组和非RA组血清CTHRC1、sPD-1水平、MRI检出结果。血清CTHRC1、sPD-1及联合MRI对早期RA诊断效能的ROC曲线特征。结果MRI平扫,早期RA的典型图像表现为关节腔积液和关节滑膜明显增厚水肿。MRI诊断检出56例早期RA,误诊数为9例,漏诊数为4例。MRI诊断早期RA的敏感度为93.33%,特异度为85.00%,准确度为89.17%,阳性预测值为86.15%,阴性预测值为92.73%,Kappa值为0.783。早期RA组的血清CTHRC1、sPD-1水平均高于非RA组(P<0.05)。ROC分析可见,血清CTHRC1诊断早期RA的AUC为0.716,敏感度、特异度、截断值分别为45.00%、85.00%、262.21ng/mL;血清sPD-1诊断早期RA的AUC为0.610,敏感度、特异度、截断值分别为25.00%、80.00%、33.47pg/mL;以血清CTHRC1、sPD-1的截断值为临床值,采用并联的方式进行联合检测,MRI联合血清诊断早期RA的AUC为0.720,敏感度、特异度分别为91.70%、51.70%。结论MRI联合血清CTHRC1、sPD-1诊断早期RA具有较高的敏感度,有较高的评估价值。

CTHRC1和VEGF-C在直肠癌组织中的表达及相关性

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF-C)和胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在直肠癌组织中的表达特点及二者的相关性.方法:收集我院2004-10/2006-08手术切除的直肠癌病理标本98例,术前均未行任何治疗.采用免疫组织化学方法检测VEGF-C和CTHRC1的表达.分析他们的表达与患者年龄、性别以及直肠癌分化程度、临床分期及淋巴结转移的关系.结果:VEGF-C主要分布于肿瘤细胞中,其表达与直肠癌分化程度、临床分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05);CTRHC1表达与直肠癌分化程度、临床分期密切相关(P<0.05),二者与直肠癌发生的年龄、性别无明显相关.此外,CTRHC1与VEGF-C的表达量呈正相关(r=0.629,P<0.001).结论:VEGF-C和CTHRC1在直肠癌侵袭转移中可能起重要作用,二者的表达可作为判定直肠癌生物学行为的参考指标.

CTHRC1基因在胃癌组织中的表达

目的:通过检测三螺旋重复胶原蛋白Ⅰ(CTHRC1)在胃癌组织中的表达水平,初步研究其在胃癌发生发展中的意义。方法:应用Western-Blot方法,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,分别检测胃癌组织及与其相对应的远癌正常胃组织中CTHRC1的相对表达水平。结果:33例胃癌组织中CTHRC1的相对表达量为0.315±0.234,与其对应的33例远癌正常胃组织中的CTHRC1的相对表达量为0.500±0.148,差异有统计学意义(t=6.482,P<0.01)。结论:CTHRC1在胃癌组织中的表达显著降低,提示CTHRC1可能与胃癌的发生、发展有关。

乙肝肝硬化患者血清CTHRC1及TGF-β_1相关性研究

目的研究乙肝病毒(HBV)致肝硬化患者血清胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)表达水平,分析其与疾病病程的关系。方法HBV感染确诊肝硬化患者,测定总胆红素(TBIL),清蛋白(ALB),凝血酶原时间(PT),根据测定结果对患者进行评分,分级为A、B、C三级,分为三组,测定各组透明脂酸酶(HA),层粘连蛋白(LN),Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP),Ⅳ型胶原(CⅣ)血清浓度以了解各组患者肝纤维化状态,B超检测三组患者门静脉内径以了解各组肝脏功能状态,采用ELISA法检测三组患者血清CTHRC1,转化生长因子β1(TGF-β1)浓度。结果 B、C组HA、LN、PⅢNP、CⅣ均明显高于A组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05),A组与对照组各指标浓度差别不大,差异无统计学意义(P>0.05);各组肝硬化患者门静脉内径均明显大于对照组,B组与A组,C组与A组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);A、B、C组CTHRC1及TGF-β1浓度均高于对照组,且随着临床分期分值升高而升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论随着肝硬化患者临床分期进展及肝功能下降,血清CTHRC1及TGF-β1浓度上升,两者具有一定的相关性,其机制需要进一步研究。

卵巢癌组织中CTHRC1、VEGF表达及临床意义

目的探讨卵巢癌组织中三螺旋重复胶原蛋白1(CTHRC1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达及其临床意义。方法选取2012年1月—2017年1月徐州市中心医院保存的卵巢癌组织标本86例,同时选取正常卵巢组织80例,采用免疫组化染色法检测CTHRC1、VEGF的表达。结果卵巢癌组织中CTHRC1和VEGF阳性表达率分别为67.44%和69.77%,明显高于正常卵巢组织(P<0.05);FIGO分期Ⅲ—Ⅳ期、病理分级G3、有淋巴结转移患者CTHRC1阳性表达率分别为96.43%、80.36%和90.32%,明显高于FIGO分期Ⅰ—Ⅱ、病理分级G1+G2、无淋巴结转移者(P<0.05);FIGO分期Ⅲ—Ⅳ期、有淋巴结转移患者VEGF阳性表达率分别为85.71%和90.32%,明显高于FIGO分期Ⅰ—Ⅱ、无淋巴结转移患者(P<0.05);卵巢癌组织中CTHRC1和VEGF的表达呈正相关(r s=0.515,P<0.05)。结论卵巢癌组织中CTHRC1、VEGF表达明显上调,可能与患者FIGO分期、病理分级以及淋巴结转移有关。同时CTHRC1和VEGF表达呈正相关,推测CTHRC1和VEGF对卵巢癌病情进展可能具有协同作用。

CTHRC1增强结直肠癌细胞侵袭能力促进结直肠癌转移的机制研究

目的:探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)对结直肠癌细胞生物学特性的影响及可能的调控机制。方法:采用实时定量PCR技术检测上调或抑制miR-520d-5P的表达,探讨其对基因CTHRC1的调控作用,双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与基因CTHRC1的3'UTR区之间是否相互结合。采用Western blot法检测6株不同结直肠癌细胞系及临床结直肠癌配对标本中基因CTHRC1的蛋白表达水平。构建稳定转染基因CTHRC1的结直肠癌细胞系;CCK-8、Transwell等方法检测稳定转染目的基因后结直肠癌细胞的增殖、侵袭能力的变化。结果:在配对结直肠癌患者组织中发现,正常组织中miR-520d-5P的表达高于癌组织(P<0.001),基因CTHRC1的表达趋势相反(P<0.001),且两者的表达呈负相关。通过miR-520d-5P模拟类似物mimics及抑制物inhibitor的瞬时转染实验发现其对基因CTHRC1的蛋白表达有负向调节作用。双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与CTHRC1的3'UTR之间存在相互结合。稳定转染基因CTHRC1后,细胞的增殖能力下降,但侵袭能力提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。在配对结直肠癌标本中,原发癌组织中基因CTHRC1的蛋白表达水平高于正常组织(P=0.003)。结论:miR-520d-5P对基因CTHRC1蛋白表达具有负调控作用。基因CTHRC1可以增强结直肠癌细胞的侵袭能力,抑制结直肠癌细胞的增殖能力,且与miR-520d-5P具有临床相关性。

慢性氟中毒大鼠骨组织Cthrc1 mRNA及蛋白表达

目的:探讨三螺旋重复胶原蛋白1(collagen triple helix repeat containing1,Cthrc1)mRNA及其蛋白表达在慢性氟中毒大鼠股骨中的变化。方法:36只SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组(饮水含氟5 mg/L)和高氟组(饮水含氟50 mg/L);观察各组大鼠骨氟、尿氟和骨组织形态及形态计量学变化,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫组织化学法(SP法)分别检测各组大鼠骨组织中Cthrc1 mRNA及蛋白表达。结果:高氟组及低氟组尿氟、骨氟明显升高,慢性氟中毒模型复制成功;染氟组大鼠骨皮质厚度、骨小梁宽度和密度明显增高,骨小梁间隙明显变窄,骨骼病理变化属于氟骨症的硬化型改变;与低氟组比较,高氟组大鼠骨组织Cthrc1 mRNA和蛋白表达增高,差异有统计学意义。结论:氟可能通过上调大鼠骨组织Cthrc1mRNA及蛋白表达水平影响骨代谢,参与氟引起的骨骼损伤发生机制。

CTHRC1与PD-L1在前列腺癌组织中的表达水平及临床意义

目的探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1(CTHRC1)与程序性死亡受体-配体(PD-L1)在前列腺癌组织中的表达水平及临床意义。方法选取行根治性前列腺切除术的86例患者,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织及癌旁组织中CTHRC1、PD-L1的表达情况,采用Kaplan-Meier生存曲线比较患者生存情况。结果CTHRC1、PD-L1在前列腺癌组织中高表达率分别为75.58%和80.23%,高于癌旁组织(P<0.001);CTHRC1、PD-L1表达与患者年龄及术前PSA水平无关(P>0.05),但与肿瘤分期、骨转移及Gleason评分相关(P<0.05);化疗有效的患者CTHRC1、PD-L1水平低于无效患者(P<0.001);肿瘤组织中CTHRC1、PD-L1高表达患者生存率低于低表达患者(P<0.05)。结论CTHRC1、PD-L1在前列腺癌患者组织中呈高表达,可能与前列腺癌的发生发展相关,有望成为评估前列腺癌化疗效果及预后的相关指标发挥临床作用。

CTHRC1在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨乳腺癌中胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)的表达情况及其临床意义。方法选择手术切除的乳腺癌组织及其配对的癌旁组织各120份,采用免疫组化SP法检测上述组织中CTHRC1蛋白的表达情况;分析CTHRC1蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果在120份乳腺癌组织中,CTHRC1蛋白阳性表达率为73.3%(88/120),高于癌旁组织的57.5%(69/120),差异有统计学意义(P﹤0.05);CTHRC1蛋白表达在不同年龄、肿瘤直径的患者中比较,差异无统计学意义(P﹥0.05),而在不同淋巴结转移、临床分期、分子分型和组织学分级的患者中比较,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论 CTHRC1蛋白在乳腺癌的发生、发展中可能发挥着一定的作用,对乳腺癌的临床诊断、不良生物学行为的预测有一定的指导意义。

外泌体介导miRNA-155靶向CTHRC1对胃癌细胞腹膜种植转移的影响

目的探讨外泌体转运miRNA-155靶向胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对胃癌细胞腹膜种植转移的影响。方法提取胃癌BCG-823细胞外泌体并采用透射电子显微镜鉴定;实时荧光定量PCR检测胃癌BCG-823细胞和外泌体miRNA-155水平;激光共聚焦显微镜观察人腹膜间皮HMrSV5细胞对外泌体吞噬情况;设立阴性对照组、外泌体组和miRNA-155mimic组,通过划痕实验检测外泌体转运miRNA-155对腹膜间皮细胞HMrSV5迁移力的影响;利用生物信息预测软件结合荧光素酶报告基因检测验证miRNA-155的靶基因;Western blotting检测细胞CTHRC1蛋白表达。结果提取的外泌体呈现杯口状,直径40-150nm,外泌体标志性蛋白CD9、CD81呈阳性,而内质网分子伴侣Calnexin不表达;外泌体miRNA-155表达水平显著高于胃癌BCG-823细胞(P<0.05);采用PKH26对外泌体标记后在显微镜下呈红色,其主要分布在人腹膜间皮细胞HMrSV5的细胞质内,且视野下大部分细胞均可见红色荧光。利用生物分析软件(TargetScan,CLIP-Seq,miRDB and miRanda)预测了miRNA-155的下游靶基因为CTHRC1。与阴性对照组比较,外泌体组和miRNA-155mimic组腹膜间皮细胞迁移力、细胞增殖、细胞活力和细胞迁移显著增加,且miRNA-155mimic组高于外泌体组,其中外泌体中miRNA-155表达水平为0.49±0.03,CTHRC1蛋白表达水平显著降低,且miRNA-155mimic组低于外泌体组(P<0.05)。结论胃癌细胞来源的外泌体可促进腹膜间皮细胞迁移,因此增加肿瘤转移风险,其机制可能是外泌体内过表达的miRNA-155靶向抑制CTHRC1蛋白表达水平所引起。

沉默CTHRC1表达对乳癌MDA-MB-157细胞体外侵袭转移能力的影响

目的:探讨沉默CTHRC1基因表达对乳癌MDA-MB-157细胞体外侵袭转移能力的影响。方法:化学合成靶向CTHRC1基因的siRNA,分别以不同浓度(10、20和30nmol/L)转染MDA-MB-157细胞,同时以转染阴性对照siRNA和未转染细胞为对照。转染48h后,应用RT-PCR和Westernblot检测细胞CTHRC1mRNA和蛋白的表达情况。以干扰效率最高的CTHRC1siRNA浓度再次转染MDA-MB-157细胞,同时以转染阴性对照siRNA、转染Lipofectamine2000和未转染细胞为对照,分别在转染前、转染24、48和72h后收集细胞,BoydenChamber检测细胞侵袭能力的变化;转染48h后做细胞划痕实验,分别于划痕后24、48和72h检测划痕宽度。结果:各组细胞CTHRC1mRNA和蛋白表达的差异有统计学意义(F=28.185和17.776,P<0.001)。随着CTHRC1siRNA转染浓度的增加,CTHRC1mRNA和蛋白的表达下降,30nmol/LCTHRC1siRNA干扰效率最高。MDA-MB-157细胞转染30nmol/LCTHRC1siRNA后,穿膜细胞数和划痕愈合能力明显下降(P<0.05)。结论:抑制CTHRC1基因的表达能有效抑制乳癌MDA-MB-157细胞体外的侵袭和转移能力。

CTHRC1在结直肠癌中的表达及作用机制

目的检测胶原三股螺旋重叠蛋白(CTHRC1)在结直肠癌组织及细胞中的表达,探讨CTHRC1对结直肠癌细胞生物学特性的影响和作用机制。方法应用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测CTHRC1在结直肠癌组织和5株结直肠癌细胞的表达;将靶向作用于CTHRC1的sh RNA和NC转染进LOVO细胞;CCK-8、Transwell、平板克隆检测细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力。Western blotting检测转染后CTHRC1、ERK1/2、P-ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin表达的变化。结果与正常黏膜组织相比,20例癌组织中的CTHRC1 m RNA的平均表达量为0.0411±0.054,显著高于正常黏膜组织P=0.016,蛋白水平的结果与之一致;同时,CTHRC1在SW620和LOVO细胞里的表达(m RNA水平和蛋白水平)均显著高于HT29细胞株;较之对照组,CTHRC1敲低组抑制了LOVO细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力,差异均具有统计学意义P<0.05。当CTHRC1在m RNA和蛋白水平的表达均被明显抑制时,总ERK1/2在保持基本不变的的前提下,P-ERK1/2明显降低,EMT出现逆转(即MET,E-cadherin升高,N-cadherin、Vimentin、β-catenin降低)。结论 CTHRC1在结直肠癌组织及高转移潜能的人结直肠癌细胞株SW620和LOVO中高表达。敲低CTHRC1抑制了结直肠癌细胞株LOVO的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力。CTHRC1通过增强ERK1/2的磷酸化所介导的EMT促进结直肠癌的侵袭转移。

BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白在胃癌组织中的表达及与病理参数、预后的关系研究

目的研究脑选择性蛋白激酶2(BRSK2)、X染色体连锁锌指蛋白(ZFX)及胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在胃癌组织中的表达及与病理参数、预后的关系。方法回顾性分析我院2016年1月—2018年1月收治的58例胃癌患者的临床资料,按照部位不同分为胃癌组织组和癌旁组织组(距离胃癌组织5 cm以上的正常胃黏膜组织),每组58例。比较BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白在胃癌组织及癌旁组织的表达情况;随访2年,记录纳入者的存活及死亡情况,分析BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白对胃癌预后的影响及与各病理参数的相关性,并分析胃癌预后生存的危险因素。结果BRSK2在胃癌组织中的阳性表达率低于癌旁组织(P<0.01),ZFX和CTHRC1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织(P<0.01)。BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白表达与胃癌侵袭深度、淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05)。BRSK2阴性组平均生存时间短于阳性组(P<0.05)。ZFX、CTHRC1蛋白阴性组平均生存时间长于阳性组(P<0.05)。侵袭深度为T3+T4、存在淋巴结转移、BRSK2阴性、ZFX阳性、CTHRC1蛋白阳性为影响胃癌预后生存的独立危险因素(P<0.05)。结论BRSK2在胃癌组织中表达水平下降,ZFX及CTHRC1蛋白在胃癌组织中的表达水平增高;BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白表达水平的异常均参与了胃癌的发生和发展,并且与预后生存关系密切,可作为预测胃癌预后的分子标志物和肿瘤治疗的潜在靶点。

CTHRC1通过活化FAK-ERK1/2信号通路促进膀胱癌5637细胞迁移和侵袭

目的:探讨胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在膀胱癌组织和细胞中的表达及其对膀胱癌5637细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法:利用TCGA和Arrayexpress数据库中膀胱癌基因表达数据,分析CTHRC1转录和翻译水平。收集2014年9月至2020年12月重庆医科大学附属第一医院手术切除的144例膀胱癌组织和25例全膀胱切除的癌旁组织标本,以及人膀胱癌细胞RT4、5637、T24、UMUC-3、TCCSUP和输尿管上皮永生化细胞SV-HUC-1。采用免疫组织化学染色法、qPCR法和WB法检测膀胱癌组织和细胞中CTHRC1的表达水平,通过Kaplan-Meier曲线分析CTHRC1表达对总生存期(OS)的影响。运用RNAi技术,敲降5637细胞CTHRC1表达后,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测CTHRC1表达下调对5637细胞迁移和侵袭的影响。利用基因集富集分析(GSEA)预测CTHRC1相关的潜在信号通路,WB法检测敲降CTHRC1表达对FAK-ERK1/2通路相关蛋白表达的影响。结果:CTHRC1的转录和翻译水平在肌层浸润性膀胱癌(MIBC)组织和细胞中表达显著上调(均P<0.05),CTHRC1高表达组患者5年OS较低表达患者缩短(P<0.05)。干扰CTHRC1表达后,膀胱癌5637细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01)。GSEA预测显示,CTHRC1高表达组主要富集在黏着斑激酶(FAK)、肌动蛋白细胞骨架调节、FAK和ERK1/2信号通路。WB法实验结果表明,重组CTHRC1蛋白促进膀胱癌5637细胞FAK-ERK1/2信号通路活化(P<0.05或P<0.01)。结论:CTHRC1在MIBC中表达上调,且与膀胱癌患者不良预后密切相关;CTHRC1促进膀胱癌细胞迁移和侵袭,该过程可能与FAK-ERK1/2信号通路的激活有关。

CTHRC1调控COL1A1过表达促进胃癌细胞增殖的研究

目的 探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1(CTHRC1)对胃癌细胞的增殖作用机制。方法 收集广州市增城区人民医院2017年6月-2018年6月经病理确诊的8例胃癌患者的癌组织及癌旁组织。采用Western blotting检测胃癌组织、癌旁组织和胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、BGC-803、MKN-45、MKN-28,以及人胃黏膜GES-1细胞中CTHRC1的蛋白表达水平;将si-CTHRC1、si-COL1A1转染至胃癌SGC-7901细胞后,用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率;用STRING数据库预测CTHRC1的靶基因;Western blotting和免疫荧光检测si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后CTHRC1、COL1A1蛋白表达情况;Kaplan-Meier分析CTHRC1和COL1A1蛋白在胃癌组织中的表达情况与胃癌患者预后的关系。结果 胃癌组织中CTHRC1蛋白的表达量为0.87±0.13,明显高于癌旁组织(0.31±0.20);胃癌细胞系中CTHRC1蛋白的表达量均高于人胃黏膜GES-1细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后,细胞增殖明显降低,si-CTHRC1与si-COL1A1共转染组胃癌SGC-7901细胞活力(0.40±0.07)明显低于单独si-CTHRC1组(0.87±0.05)和si-COL1A1组(0.83±0.13),差异均有统计学意义(P<0.05);si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后细胞凋亡率为16.77%±1.55%,高于空白对照组的4.80%±1.93%,差异有统计学意义(P<0.05);STRING数据库预测提示COL1A1为CTHRC1作用的靶基因;si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后CTHRC1、COL1A1相对蛋白表达量为0.92±0.16、1.08±0.23,均高于空白对照组的0.55±0.15、0.65±0.12,差异均有统计学意义(P<0.05);免疫荧光检测发现,si-CTHRC1转染胃癌SGC-7901细胞后CTHRC1、COL1A1蛋白表达明显降低;Kaplan-Meier分析结果示胃癌组织中CTHRC1高表达患者的5年生存率(27.4%)明显低于低表达患者(38.4%),胃癌组织中COL1A1高表达患者的5年生存率(20.4%)明显低于低表达患者(49.3%),差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 CTHRC1通过过表达COL1A1蛋白促进胃癌细胞的增殖。

Cthrc1抑制小鼠肝星状细胞的增殖

背景:研究发现胶原三螺旋重复蛋白-1(Cthrc1)可能在肝脏疾病尤其是肝纤维化中发挥重要作用,但对肝星状细胞增殖的影响尚未完全阐明。目的:研究Cthrc1对肝星状细胞增殖的影响。方法:构建Cthrc1重组腺病毒载体,通过尾静脉注射小鼠体内,以实时PCR和蛋白质印迹法分别检测Cthrc1 mRNA和蛋白表达。通过胆总管结扎和3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(DDC)饲料喂养分别构建小鼠肝纤维化模型,分别尾静脉注射AdCthrc1或Ad-GFP,以免疫荧光法检测肝星状细胞数量。结果:成功构建Cthrc1重组腺病毒载体;实时PCR和蛋白质印迹法证实尾静脉注射Ad-Cthrc1后小鼠肝内Cthrc1 mRNA和蛋白表达均较对照组增高。HE和Masson染色示成功建立了小鼠肝纤维化模型。免疫荧光法显示Cthrc1过表达能明显抑制肝纤维化模型小鼠肝星状细胞的增殖。结论:成功构建了重组腺病毒载体Ad-Cthrc1并可在体内高效稳定表达,能抑制肝星状细胞的增殖,有望成为肝纤维化的治疗靶点。

沉默CTHRC1调控p53介导的线粒体凋亡诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的探究短发夹RNA(shRNA)干扰载体沉默胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法将shRNA-CTHRC1质粒和阴性对照质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞,采用qPCR法和Westernblot法分别检测CTHRC1mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法和流式细胞术法分别检测细胞增殖活力和凋亡率;线粒体膜电位试剂盒(JC-10染色法)检测细胞线粒体膜电位变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase3、细胞色素C(CytC)以及p53介导的线粒体凋亡途径相关蛋白p53、Apaf-1、Cleaved-caspase9、Bcl-2、Bax和PUMA等表达水平。将shRNA-CTHRC1质粒和si-p53干扰质粒分别或同时转染至MCF-7细胞中,Westernblot法检测p53和CytC蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果沉默CTHRC1可降低MCF-7细胞中CTHRC1mRNA和蛋白表达水平,抑制细胞增殖活力,提高细胞凋亡率,降低线粒体膜电位,上调Cleaved-caspase3、p53、Apaf-1、Cleaved-caspase9、Bax、PUMA和胞质中CytC等蛋白表达水平,下调Bcl-2和线粒体中CytC蛋白表达水平。然而,干扰p53表达可逆转CTHRC1沉默对MCF-7细胞凋亡的促进作用。结论CTHRC1沉默通过激活p53介导的线粒体凋亡途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。