葡甘露聚糖凝胶对宫颈炎大鼠CollagenⅠ、CollagenⅢ表达的影响

目的:探讨葡甘露聚糖凝胶对宫颈炎大鼠宫颈组织中Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)的调节作用。方法:采用苯酚胶浆进行阴道内注射建立宫颈炎模型,造模结束后进行局部给药治疗,将18只雌性SD大鼠造模后分为模型组、葡甘露聚糖凝胶高、中、低剂量组(1.2 g·kg-1、0.6 g·kg-1、0.3 g·kg-1)、复方甲硝唑阴道栓组(0.4 g·kg-1)、凝胶基质组各3只,另外3只作为空白组。阴道内灌注给药7天后,RT-PCR和Western blot法检测大鼠宫颈组织中CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR法结果显示与空白组比较,模型组大鼠宫颈组织中CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA的表达均明显降低(P﹤0.01);与模型组比较,葡甘露聚糖凝胶给药组大鼠宫颈组织中CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达有不同程度的提高(P﹤0.01或P﹤0.05)。Western blotting法检测宫颈组织中CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白的表达:与空白组比较,模型组大鼠宫颈组织中CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白的表达均有所降低(P﹤0.01);与模型组比较,葡甘露聚糖凝胶给药组大鼠宫颈组织中CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白的表达有不同程度的提高(P﹤0.01或P﹤0.05)。结论:葡甘露聚糖凝胶对宫颈炎大鼠宫颈组织中CollagenⅠ、CollagenⅢ表达具有促进作用,从而促进宫颈黏膜的组织修复。

胰岛素对糖尿病大鼠模型的心肌病理改变及TGF-β1、collagenⅢ表达的影响

目的探讨胰岛素对糖尿病大鼠模型的心肌病理改变及TGF-β1、胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ)表达的影响。方法将30只SD大鼠分别分为A、B、C组,每组10只,A组为对照组,B、C两组腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,A、B组给予1 mL生理盐水腹腔注射,C组腹部皮下注射胰岛素。三组大鼠造模5周后处死,检测三组大鼠的血糖和血脂的变化,观察大鼠心肌的变化,TGF-β1、collagenⅢ的表达情况。结果①血糖、血脂改善:B、C两组大鼠的三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)均显著高于A组(P<0.05)。C组的血糖、TG、TC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)显著低于B组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著高于B组(P<0.05)。②心肌病理学改变:A组大鼠心肌细胞结构正常;B组大鼠心肌细胞排列紊乱,局灶性心肌纤维溶解,可见变性、坏死;C组大鼠心肌细胞排列比较完好,无明显的溶解断裂,无变性坏死;③因子、蛋白表达:B、C两组大鼠心肌组织中的TGF-β1、collagenⅢ表达显著高于A组(P<0.05)。但C组中的TGF-β1、collagenⅢ表达显著低于B组(P<0.05)。结论胰岛素可调节糖尿病大鼠的糖、脂质代谢紊乱,降低的心肌病变程度,其机制可能与其降低了心肌组织中TGF-β1及collagenⅢ的表达有关。

TGF-β1、TIMP-1及CollagenⅢ在盆腔器官脱垂患者阴道壁中的表达及意义

目的探讨TGF-β1、TIMP-1及CollagenⅢ在盆腔器官脱垂患者阴道壁中的表达及意义。方法选取2020年3月至2020年12月在昆明医科大学第一附属医院妇科住院部手术的盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)患者28例为实验组,其中按POP-Q分期法将其分为:Ⅱ度7例,Ⅲ度16例,IV度5例。选择同期因妇科良性病变行全子宫和(或)双附件切除且无POP患者30例为对照组。通过免疫组化的方法检测阴道壁组织中TGF-β1、TIMP-1及CollagenⅢ的表达。结果 POP组的TGF-β1、TIMP-1及CollagenⅢ的IRS得分明显低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);POP组Ⅱ度、Ⅲ度及Ⅳ度患者的TGF-β1、TIMP-1及CollagenⅢ的IRS得分随着分度的增加呈逐渐降低的趋势,差异均有统计学意义(P <0.05)。POP组患者阴道壁组织中CollagenⅢ与TIMP-1、TGF-β1表达呈正相关(r=0.381,0.519,P <0.05);TGF-β1表达与TIMP-1表达呈正相关(r=0.270,P <0.05)。结论 POP患者阴道壁组织中CollagenⅢ、TIMP-1和TGF-β1呈低表达,且与病情程度有一定的关系,可能参与POP的发生、发展;POP患者阴道壁组织中CollagenⅢ、TIMP-1、TGF-β1间存在一定相关性,三者之间存在一定的协同作用,共同参与疾病的发生发展。

DDPH对心肌肥厚大鼠PCNA,TGFβ_1,Collagen Ⅲ蛋白表达水平的影响

目的 研究PCNA、TGFβ1、CollagenⅢ型在心肌组织的表达及DDPH的作用。方法 用部分狭窄腹主动脉方法 ,从术后第 4周开始 ,ig不同剂量的DDPH (2 5、5 0mg·kg-1·d-1)持续 8wk。用免疫组织化学方法检测PCNA、TGFβ1、CollagenⅢ蛋白表达的变化。 结果 术后 12wk ,发现肥厚组心肌组织PCNA、TGFβ1、CollagenⅢ表达水平分别是对照组的 1 5、1 4和 2 4倍。而DDPH两个给药组蛋白表达水平明显低于肥厚组 ,但仍高于对照组。结论 DDPH对大鼠腹主动脉部分狭窄所致心肌肥厚PCNA、TGFβ1、Col lagenⅢ表达水平的增加有一定逆转作用。

温经汤加味对EM肾虚血瘀证大鼠局部微环境MMP-9、TNF-α、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的影响及其意义

目的探讨子宫内膜异位症(Endometosis,EM)肾虚血瘀证大鼠异位病灶局部MMP-9,TNF-α,CollagenⅠ、CollagenⅢ表达水平,以及温经汤加味对其干预作用及机制。方法SPF级雌性未孕健康SD大鼠设为空白组;构建肾虚血瘀证大鼠模型,造模成功后,设为假手术组(仅开腹);其余大鼠以自体内膜移植法构建EM肾虚血瘀证模型,造模成功后的大鼠分为模型组(不用药物干预)、阳性药(达那唑)组、温经汤加味组(低、中、高3种剂量)。阳性药对照组给予达那唑63 mg·kg^(-1)连续4周灌胃,中药低、中、高剂量组分别以5 g·kg^(-1)、10 g·kg^(-1)、20 g·kg^(-1)连续4周灌胃。取各组大鼠子宫内膜组织观察组织病理变化;免疫组化法(IHC)检测各组大鼠子宫内膜组织MMP-9,TNF-α的蛋白表达;蛋白免疫印迹法(WB)、实时荧光聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测各组大鼠子宫内膜组织MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ基因表达。结果与空白组、假手术组比较,EM肾虚血瘀证模型组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白及其基因表达在模型组子宫内膜组织升高(P<0.01);与模型组比较,阳性药对照组、温经汤加味治疗组大鼠MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白及其基因表达水平均降低(P<0.01或P<0.05)。结论局部微环境免疫抑制微血管新生导致异位内膜侵袭是EM发生、发展过程中的重要病理表现,MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ过度表达可能促进了这一过程的发生、发展;温经汤加味通过"逆转"MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ等细胞因子异常升高,起到了解除局部微环境免疫抑制、阻断微血管新生的作用,在治疗EM肾虚血瘀证过程中表现出确切的疗效。

Collagen Ⅲ和Smad2在犬裁剪去粘膜回肠输尿管中的表达

目的探讨1年期犬裁剪去粘膜回肠输尿管中Collagen Ⅲ和Smad2的表达,评估其纤维化。方法用5只比格犬参照前期实验方法,建立裁剪去粘膜回肠代输尿管模型,术后饲养至1年,造影检查与在体观察后切取回肠输尿管;用正常回肠远段部分组织为对照;采用组织病理、免疫组织化学、Western blot和Real-time PCR技术,检测Collagen Ⅲ和Smad2在样本中的表达,比较两组的差异。结果术后模型犬4只持续存活,1只肠梗阻死亡,裁剪去粘膜回肠输尿管显影较好、未见明确狭窄与梗阻;肉眼及镜下观察未发现其与对照组间存在明显差异,管壁各层无显著纤维增生与胶原沉积增加;Collagen Ⅲ和Smad2在两组中均呈阴性表达,其中Smad2实验组低于对照组(P<0.05);Collagen Ⅲ和Smad2在蛋白和基因水平的表达,两组无显著差异(P>0.05)。结论犬裁剪去粘膜回肠输尿管1年仍能保持较好形态结构,Collagen Ⅲ和Smad2表达无显著增加,管壁无明确纤维化改变,具有长期稳定性。

丹皮酚对急性心肌梗死模型大鼠心肌病理改变及TGF-β_1,CollagenⅢ表达的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对急性心肌梗死模型大鼠心肌病理改变及转化生长因子-β_1(TGF-β_1),胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)表达的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠,采用左冠状前降支(LAD)结扎法制作在体大鼠急性心肌梗死模型,记录结扎前及结扎后10,20,40,60,120 min,24 h心电图变化,测量各个时点ST段的偏移幅度并进行统计学分析,将造模成功后的大鼠随机分为模型组、丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组;另有只穿线不结扎的假手术组,共6组,丹皮酚低、中、高剂量组分别给予ip 8.0,12.0,16.0 mg·kg^(-1)剂量的丹皮酚注射液,假手术组与模型组每天ip等体积生理盐水,卡托普利组用蒸馏水稀释其片剂碾成的药粉,给予ig 10.0 mg·kg^(-1),所有干预均1次/d;28 d后取材,HE染色观察心肌组织病理生理学改变情况,采用免疫组织化学法检测左室梗死区TGF-β_1和CollagenⅢ蛋白的表达。结果:HE染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠左室病理生理学改变显著,梗死灶边缘部分心肌细胞发生肥大、伸长,左心室壁部分心肌凝固性坏死,凋亡细胞胞核固缩、胞质伊红深染,另有部分组织发生疏松水肿,与模型组比较,各治疗组大鼠心肌细胞病理改变均不同程度减轻;免疫组织化学染色结果显示:模型组与假手术组比较,TGF-β_1及collagenⅢ蛋白的表达明显增多(P<0.01);治疗组各组及卡托普利组与模型组比较,TGF-β_1及collagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.01,P<0.05)。结论:丹皮酚可降低心肌梗死大鼠心肌的病变程度,改善心室重构及心功能,其作用机制可能是通过降低心肌组织中TGF-β_1及collagenⅢ的表达来实现的。

加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型肺通气功能及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的:观察加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型肺通气功能及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法:将30只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、哮喘组、激素组、阳性药组及中药组,除正常组以外,其余各组均采用卵蛋白致敏、雾化激发的方法建立哮喘大鼠模型;除正常组和哮喘组外其余各组均予地塞米松干预并逐步撤减,在此基础上阳性药组予普米克令舒雾化吸入,中药组予加减乌梅丸颗粒灌胃。用药7周后检测大鼠肺通气功能,HE染色观察大鼠肺组织病理形态学改变,Western blotting法检测大鼠肺组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白相对表达量,RT-qPCR法检测大鼠肺组织CollagenⅠmRNA、CollagenⅢmRNA相对表达量。结果:哮喘组大鼠用力肺活量(FVC)、0.2秒用力呼气容积(FEV_(0.2))、0.2秒内的平均流速(FEV_(0.2)/FVC%)、用力最大呼气流速(PEF)、用力中期呼气流速(FEF_(25%~75%))均显著低于正常组(P<0.05);激素组大鼠FVC、FEV_(0.2)、FEV_(0.2)/FVC%、PEF、FEF_(25%~75%)与哮喘组比较,差异无统计学意义(P>0.05);中药组大鼠FVC、FEV_(0.2)、FEV_(0.2)/FVC%、PEF、FEF_(25%~75%)均高于哮喘组和激素组(P<0.05)。哮喘组大鼠肺组织中CollagenⅠmRNA、CollagenⅢmRNA、CollagenⅠ蛋白、CollagenⅢ蛋白相对表达量均显著高于正常组(P<0.05);激素组大鼠肺组织中CollagenⅢmRNA、CollagenⅠ蛋白、CollagenⅢ蛋白相对表达量均显著低于哮喘组(P<0.05);中药组大鼠肺组织中CollagenⅠmRNA、CollagenⅢmRNA、CollagenⅠ蛋白、CollagenⅢ蛋白相对表达量均显著低于激素组(P<0.05)。结论:加减乌梅丸颗粒可减少哮喘大鼠激素干预模型肺组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白沉积,改善大鼠肺通气功能,延缓气道重塑的发展进程。

加味茵陈四逆汤对肝纤维化小鼠Smad7及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的:探讨预防性使用加味茵陈四逆汤对肝纤维化小鼠Smad7和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)基因表达的影响。方法:雄性ICR小鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组及加味茵陈四逆汤高、中、低剂量组,每组8只。采用腹腔注射30%CCl4(1.5 mg/kg,溶解于橄榄油)建立肝纤维化模型,同时给予药物灌胃处理。用药14 d后,计算肝脏指数;试剂盒检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;各组行HE染色观察肝组织病理改变并进行肝纤维化分级;RT-q PCR法检测肝组织Smad7、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达。结果:(1)加味茵陈四逆汤中、低剂量组肝脏指数和HA、LN水平较模型组显著降低(P<0.05);(2)加味茵陈四逆汤各剂量组肝纤维化较模型组减轻(P<0.05);(3)与模型组比较,各给药组CollagenⅠmRNA表达显著降低(P<0.05),除加味茵陈四逆汤高剂量组外,各给药组Smad7 mRNA表达显著升高(P<0.05),除加味茵陈四逆汤低剂量组外,各给药组CollagenⅢmRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:加味茵陈四逆汤可上调肝纤维化小鼠Smad7表达,抑制CollagenⅠ、CollagenⅢ表达,发挥对肝纤维化的抑制作用。

DMN肝纤维化模型肝组织I、Ⅲ型胶原和TIMP-1 mRNA表达及复方861的干预作用

目的 研究二甲基亚硝胺 (DMN)肝纤维化模型I型胶原 (CoL -1)、Ⅲ型胶原 (CoL -Ⅲ )和基质金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP -1)mRNA表达以及复方 86 1的干预作用。材料和方法 采用 1%DMN 1ml /kg腹腔注射模型组大鼠 ,复制DMN诱导的大鼠肝纤维化模型 ,同时复方 86 1灌胃 3g/kg ,共 8周 ,以RT -PCR法观察肝纤维化模型肝组织CoL -Ⅰ、CoL -Ⅲ及TIMP -1mRNA表达水平。结果 DMN大鼠肝纤维化模型组CoL -I、CoL -Ⅲ及TIMP-1mRNA分别为 0 82 7± 0 0 94、 0 95 3± 0 0 33及 0 92 4± 0 110 ,明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;复方 86 1治疗组CoL -I、CoL -Ⅲ及TIMP -1mRNA为 0 4 97± 0 0 5 7、 0 85 1± 0 0 6 5和 0 6 48± 0 10 7,明显低于模型对照组 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结论 DMN肝纤维化模型肝组织CoL -Ⅰ、CoL -Ⅲ及TIMP -1mRNA表达水平增高 ,复方 86 1能够抑制肝组织CoL -Ⅰ、CoL -Ⅲ及TIMP -1mRNA的表达 ,从而发挥其抗肝纤维化的作用。

黄芪对致敏大鼠气道壁转化生长因子β_1、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨黄芪在致敏大鼠气道重塑中的作用。方法Wistar雄性大鼠24只,随机分为对照组、致敏组和黄芪干预组,每组8只。采用卵蛋白腹腔注射致敏动物,2周后用1%卵蛋白雾化吸入激发。黄芪干预组在每日激发前给予黄芪注射液5g/kg腹腔注射。对照组以生理盐水代替卵蛋白雾化吸入和腹腔注射。分别采用免疫组化和原位杂交法测定大鼠气道壁Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(FN)及上皮细胞TGF-β_1蛋白水平和TGF-β_1mRNA表达水平。结果(1)致敏组大鼠气道壁Ⅲ型胶原、FN表达分别为29．49±1．89、25．98±1．53,与对照组(16．53±1．20、9．37±1．11)比较,差异有显著性(P＜0．01)；黄芪干预组(21．24±1．38、19．57±1．36)与致敏组比较,差异有显著性(P＜0．01),但高于对照组(P＜0．01)。(2)致敏组大鼠气道上皮细胞TGF-β_1蛋白和mRNA表达分别为26．99%±2．90%、24．91%±2．88%,与对照组(12．02%±1．52%、5．45%±1．18%)比较,差异有显著性(P＜0．01)；黄芪干预组(19．89%±2．06%、12．33%±1．34%)与致敏组比较,差异有显著性(P＜0．01),但高于对照组(P＜0．01)。结论黄芪可能通过抑制哮喘气道炎症,部分下调TGF-β_1mRNA及其蛋白的表达,抑制ECM中Ⅲ型胶原、FN的过度沉积,延缓哮喘气道重塑的进程。

Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达与子宫瘢痕愈合的相关性研究

目的分析Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达与剖宫产术后不同时期子宫瘢痕愈合的相关性。方法选取广东省妇幼保健院自2015年4月至2017年4月收治的45例瘢痕子宫再次进行剖宫产的产妇作为观察组,另选择45例首次剖宫产产妇作为对照组,分别收集子宫瘢痕组织与子宫下段正常组织,进行染色与检测。按照剖宫产术中肉眼可见的子宫瘢痕肌层厚度分为A组(子宫下段完整组)、B组(子宫下段变薄组)及C组(子宫下段破裂组),将孕妇按照本次妊娠距离上次剖宫产的时间间隔分为6组,分别为<3年组、3~4年组、5~6年组、7~8年组、9~10组及>10年组,探讨子宫瘢痕肌层与剖宫产间隔时间的相关性,并对子宫瘢痕肌层组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达情况进行分析。结果本次妊娠距离上次剖宫产间隔时间在3~4年组的产妇在B组、C组中比例均明显低于间隔时间<3年组、5~6年组、7~8年组、9~10年组、>10年组中B组、C组中产妇的比例,差异具有统计学意义(χ~2=6.98~8.25,均P<0.05)。观察组中3~4年组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋评分与对照组相比无明显差异(P>0.05)。观察组中<3年组、5~6年组、7~8年组、9~10年组、>10年组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋评分与对照组相比均较高,差异具有统计学意义(F=6.36~7.25,均P<0.05)。结论本次妊娠距离上次剖宫产时间间隔3~4年可作为子宫肌层修复的最佳愈合时期,推测是此段时期内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达水平与正常子宫肌层表达无明显差异。

活血止痛膏对兔骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型MHC、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:观察活血止痛膏剂对兔骨骼肌钝挫伤后内源性IIb型肌球蛋白重链(MHC)、Ⅰ型及III型胶原mRNA表达的影响。方法:63只大白兔随机分为活血止痛膏高、中、低剂量组与青鹏膏对照组、外伤对照组,每组12只。另取3只为正常对照组。各实验组采用"重物自由落体打击法"制作大白兔骨骼肌急性钝挫伤模型。受伤第1天即于伤处贴敷相应药物。各组伤后3、10、20、27天各处死大白兔3只,取腓肠肌标本,共6个。RT-PCR技术检测内源性Ⅱb型MHC、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA。结果:①伤后第3、10、20天活血止痛膏高、中剂量组和青鹏膏组内源性Ⅱb型MHCmRNA表达量高于外伤组和低剂量组(P<0.05);第10、20天活血止痛膏高剂量组内源性IIb型MHCmRNA表达高于中剂量组(P<0.05);②内源性I型胶原mRNA表达量:第3天各组比较无统计学意义(P>0.05);第10、20天活血止痛膏高、中剂量组和青鹏膏组表达量低于外伤组、低剂量组(P<0.05);第10、20天中剂量组高于高剂量组(P<0.05)。③内源性Ⅲ型胶原mRNA表达量:第3、10、20天活血止痛膏高、中剂量组和青鹏膏组内源性Ⅲ型胶原mRNA表达低于外伤组和低剂量组(P<0.05);第3、10、20天高剂量组和青鹏膏组表达量明显少于中剂量组(P<0.05)。三个检测指标各个时间点青鹏膏组和高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活血止痛膏可有效促进骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型MHCmRNA表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,其作用与青鹏膏相当。

皮肤创面无机诱导活性敷料对难愈合性创面I型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的通过观察难愈合性创面模型大鼠Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达情况,探讨皮肤创面无机诱导活性敷料促进难愈合性创面模型大鼠创面愈合的可能机制。方法将18只大鼠随机分为3组:即非难愈合性创面的对照组、模型组和实验组,每组6只。对照组仅做皮肤全切手术;其余两组经皮肤全切后给予醋酸氢化可的松皮下注射,制备难愈合性创面模型。造模后第4天,实验组大鼠创面每日给予皮肤创面无机诱导活性敷料软膏干预;其余2组大鼠创面每日进行常规换药处理。干预后第7天取材,计算各组大鼠创面愈合率。每组大鼠的一侧创面用作免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达情况,另外一侧用于Western blot和qPCR检测Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和mRNA表达量。结果对照组创面愈合率为(83.2±8.9)%,模型组创面愈合率为(68.7±7.3)%,实验组创面愈合率为(77.6±9.5)%,实验组创面愈合率显著高于模型组,差异具有统计学意义(P <0.05);免疫组化显示实验组的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的平均光密度分别为0.067±0.003和0.299±0.001,显著多于模型组的0.039±0.004和0.229±0.006,差异具有统计学意义(P=0.05);Western blot结果显示实验组的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的蛋白表达量分别为0.601±0.005和0.587±0.016,高于模型组的0.225±0.015和0.307±0.007,差异具有统计学意义(P<0.05);qPCR结果显示实验组的Ⅰ型胶原蛋白mRNA和Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达量分别为5.81±0.87和3.54±0.94,显著多于模型组的1.77±0.42和1.98±0.84,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论皮肤创面无机诱导活性敷料对难愈合性创面模型大鼠的创面愈合有促进作用,其作用机制可能与其促进创面局部Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达有关。

巨噬细胞移动抑制因子对血管平滑肌细胞胶原Ⅰ、Ⅲ mRNA体外表达的影响

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与血管平滑肌细胞(VSMC)合成胶原之间的可能联系。方法取大鼠主动脉中膜平滑肌进行原代细胞培养,用第4代传代细胞分为两组,用25、50、75、100ng/ml的MIF刺激VSMC生长为实验组,未用刺激VSMC生长为实验组,采用RT-PCR,PCR方法测定VSMC胶原Ⅰ、ⅢmRNA含量。结果与正常对照组相比,除25ng/ml外,其他3种不同浓度的MIF刺激SMC,胶原ⅠmRNA相对含量都显著增加(P<0.05)。100ng/ml的MIF刺激SMC,胶原ⅢmRNA相对含量较对照组显著增加(P<0.05),而其余各浓度胶原ⅢmRNA相对含量与对照组比较均无显著性差异。结论MIF与VSMC合成胶原之间有关,MIF刺激可以促进体外培养的VSMC胶原Ⅰ、ⅢmRNA表达。

老鼠簕生物碱A对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨老鼠簕生物碱A对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法:采用SD大鼠灌胃50%CCl4溶液建立大鼠肝纤维化模型。分别予老鼠簕生物碱A高剂量100mg/kg、低剂量50mg/kg进行灌胃干预,干预结束后,取肝组织常规病理切片HE染色、Masson染色观察肝纤维化形成,RT-PCR检测肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,免疫组化法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:与正常组比较,肝纤维化模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA表达均显著升高(P<0.01);与肝纤维化模型组比较,老鼠簕生物碱A高、低剂量组均能显著降低肝纤维化大鼠肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达(P<0.05);与肝纤维化模型组比较,老鼠簕生物碱A高、低剂量组肝组织纤维化程度显著减低。结论:老鼠簕生物碱A能降低肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,具有逆转肝纤维化的作用。

高血压病患者血清Ⅲ型、Ⅳ型前胶原、透明质酸浓度变化及苯那普利干预

目的了解高血压病患者血清Ⅲ型前胶原（ＰⅢＰ）、Ⅳ型前胶原（ＰⅣＰ）、透明质酸（ＨＡ）的变化以及苯那普利对其影响。方法应用放射免疫技术测定４７例高血压患者和２１例健康体检者血清ＰⅢＰ、ＰⅣＰ、ＨＡ的浓度，并给高血压患者以苯那普利治疗十二周后复测上述指标。结果高血压组ＰⅢＰ、ＰⅣＰ、ＨＡ分别为１２６．８±１７．４μｇ／Ｌ，６４．１±１０．１７μｇ／Ｌ、７９．２３±９．７８μｇ／Ｌ明显高于对照组的８４．２±１１．９μｇ／Ｌ，５１．７２±９．２４μｇ／Ｌ、４１．３３±６．２５μｇ／Ｌ（Ｐ＜０．０１）；苯那普利治疗十二周后，高血压组上述指标分别为８９．４±１０．０９μｇ／Ｌ、５９．８±７．１μｇ／Ｌ、６５．４±８．１６μｇ／Ｌ，与治疗前相比Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５，差异显著，有统计学意义。结论血清ＰⅢＰ、ＰⅣＰ、ＨＡ水平与血压升高密切相关并致心肌纤维化。血管紧张素转换酶抑制剂－苯那普利能在有效控制血压的同时明显降低血清ＰⅢＰ、ＰⅣＰ。

IGF-1、mtDNA及胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ水平在盆底器官脱垂患者组织表达研究

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、线粒体DNA(mtDNA)及胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ在盆底器官脱垂(POP)患者的组织表达.方法:收集笔者所在医院POP患者50例作为研究组,同时选择同期行子宫切除术的良性非POP患者50例作为对照组.比较两组mtDNA、胶原蛋白ⅠmRNA、胶原蛋白ⅢmRNA相对密度值,以及IGF-1、胶原蛋白Ⅰ蛋白、胶原蛋白Ⅲ蛋白灰度值.结果:研究组mtDNA、胶原蛋白ⅠmRNA、胶原蛋白ⅢmRNA相对密度值分别为(0.41±0.09)、(0.47±0.08)、(0.56±0.11),均低于对照组的(0.85±0.11)、(0.92±0.13)、(0.93±0.12),差异有统计学意义(P<0.05).研究组IGF-1、胶原蛋白Ⅰ蛋白、胶原蛋白Ⅲ蛋白灰度值分别为(3.36±0.12)、(5.44±0.18)、(5.16±0.13),均低于对照组的(4.49±0.14)、(7.17±0.19)、(6.87±0.15),差异有统计学意义(P<0.05).结论:POP患者宫骶韧带-子宫主韧带的mtDNA、胶原蛋白ⅠmRNA、胶原蛋白ⅢmRNA及IGF-1、胶原蛋白Ⅰ蛋白、胶原蛋白Ⅲ蛋白表达均为下调趋势,可能参与了POP的发生、发展.

温阳消癥方对单侧输尿管梗阻小鼠肾组织Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达的影响

目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)模型小鼠肾组织Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)及Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA及蛋白表达,探讨温阳消癥方对肾间质纤维化的影响。方法32只C57小鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、缬沙坦组、温阳消癥组,每组8只,后三组采用单侧输尿管结扎法制作肾间质纤维化模型。造模成功后缬沙坦组给予缬沙坦水悬液灌胃(浓度4.9g/mL,给药剂量16.5mg/kg);温阳消癥组给予温阳消癥方水煎剂灌胃(浓度4.9g/mL,给药剂量49g/kg),假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,治疗14天后处死各组小鼠并留取左侧肾组织标本,采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Rt-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测并分析Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及蛋白表达情况。结果模型组Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及蛋白表达均较假手术组显著上调[Col-ⅠmRNA:(6.85±0.22)比(1.03±0.11);Col-ⅢmRNA:(6.21±0.19)比(1.09±0.14);Col-Ⅰ蛋白:(6.23±0.24)比(1.09±0.13);Col-Ⅲ蛋白:(16.99±0.13)比(1.01±0.07);P<0.01];温阳消癥组及缬沙坦组Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及蛋白表达均较模型组显著下调[Col-ⅠmRNA:(1.27±0.13)、(2.65±0.25)比(6.85±0.22);Col-ⅢmRNA:(1.17±0.08)、(4.11±0.14)比(6.21±0.19);Col-Ⅰ蛋白:(3.14±0.15)、(5.18±0.22)比(6.23±0.24);Col-Ⅲ蛋白:(2.68±0.12)、(14.14±0.19)比(16.99±0.13);P<0.01];温阳消癥组的Col-I、Col-ⅢmRNA及蛋白表达与缬沙坦组比较均有显著下调[Col-ⅠmRNA:(1.27±0.13)比(2.65±0.25);Col-ⅢmRNA:(1.17±0.08)比(4.11±0.14);Col-Ⅰ蛋白:(3.14±0.15)比(5.18±0.22);Col-Ⅲ蛋白:(2.68±0.12)比(14.14±0.19);P<0.01]。结论温阳消癥方可下调Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及蛋白表达,减少细胞外基质在肾间质的堆积,从而减轻UUO模型小鼠肾间质纤维化程度。

重组Ⅲ型人源化胶原蛋白关键质量参数分析方法建立

目的针对重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的关键质量参数进行检测方法研究。方法采用基质辅助激光解吸/飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)及尺寸排阻色谱与多角度光散射联用(size exclusion chromatography with multi-angle light scattering,SEC-MALS)法测定相对分子质量及其分布;采用毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)和分子排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SE-HPLC)分析纯度;采用离子交换法和毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)分离分析电荷异构体;采用“双”酶切肽图法进行一级结构鉴别试验和序列覆盖率分析。结果MALDI-TOF MS测得相对分子质量45.01×10^(3);SEC-MALS得到其单体相对分子质量为45.17×10^(3)(±0.226%);两种相对分子质量测定方法结果一致。CE-SDS(非还原)纯度为98.77%,其他成分1.23%;SE-HPLC纯度为98.07%,其他成分1.93%;两种纯度测定方法结果一致。强阳离子交换共鉴定到14种电荷异构体组分,其中酸性峰占比52.08%,主峰占比26.22%,碱性峰占比21.70%;CZE鉴定到8种电荷异构体组分,其中酸性峰占比52.10%,主峰占比25.27%,碱性峰占比22.63%;两种电荷异构体鉴别方法,酸性组分、主峰与碱性组分,分布规律一致。“双”酶切肽图法实现重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的序列100%覆盖,实测序列与预期序列一致。结论建立了重组Ⅲ型人源化胶原蛋白关键质量参数分析方法,该方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为我国重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的质量控制提供了参考依据。