芒果炭疽病病原亚洲炭疽菌(Colletotrichum asianum)特异性PCR检测

亚洲炭疽菌(Colletotrichum asianum)是一种能引发芒果炭疽病的优势病原菌。为建立一种能快速诊断该病原菌所引起的芒果炭疽病的PCR检测方法,本研究通过比较不同种类炭疽菌的全基因组DNA序列,获得了1条C.asianum特异性序列,设计并筛选得到1对特异性引物:caf1(5′-CCGTCAGACGGAATTATCAGC-3′)和car1(5′-CCGATCCTGTCTTTGAAATGG-3′)。结果表明,引物caf1/car1可以从C.asianum中扩增出长度为419 bp的特异性目标条带,灵敏度可达到1 pg·μL-1。利用该引物能够从人工接种C.asianum YN55-1的芒果叶片以及田间发生炭疽病的芒果叶片样品中快速稳定地检测出长度为419 bp的目标条带。本研究建立的特异性PCR检测方法为C.asianum导致的芒果炭疽病的田间监测和快速诊断提供了技术支持。

芒果炭疽病拮抗菌L18-7菌株的筛选、鉴定及拮抗机制研究

【目的】筛选芒果炭疽病拮抗菌菌株,为芒果炭疽病的生物防治打下理论基础并提供菌种资源。【方法】以芒果炭疽病菌优势种亚洲炭疽菌(Colletotrichum asianum)为靶标,利用前期研究获得的37株芽胞杆菌(Bacillus spp.)进行对峙培养和离体接种防效试验,选择防效好的拮抗菌株种类,分析其拮抗机制。【结果】对峙试验结果显示,有10株拮抗菌对芒果亚洲炭疽菌的抑制率大于78.00%,其中菌株M12-5、L18-7、L19-3、 L17-3和M11-6的抑制率分别达96.24%、94.94%、94.10%、91.25%和90.00%。离体接种筛选获得对芒果亚洲炭疽菌具有明显防效的芽胞杆菌8株,其中菌株L18-7和L16-4的防效较佳,离体接种平均防效分别达83.00%和79.16%,二者间差异不显著(P>0.05)。结合形态特征、16S rDNA序列比对结果和基于rpoB基因序列构建的系统发育进化树分析结果,将菌株L18-7鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(B.velezensis)。菌株L18-7能产生胞外蛋白酶和纤维素酶,在LB(Luria-bertani)培养基、牛肉膏蛋白胨(NA)培养基和马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基等5种培养基中均可产生活性拮抗物,携带mycB、ituA、yndJ、fenB和bacA等产抗生素相关基因。【结论】芒果炭疽病拮抗菌菌株L18-7鉴定为贝莱斯芽胞杆菌,该菌株在28℃下LB培养基上生长良好,能产生拮抗活性物质、胞外蛋白酶和纤维素酶,携带mycB、ituA、yndJ、fenB和bacA等产抗生素相关基因,可作为生防菌的种质资源加以利用。

一种引起草莓萎蔫病害的病原菌鉴定

草莓在定植后至开花结果期常发生萎蔫死苗现象,该萎蔫病在福建省的发病率达10%~20%,探明该病的病原,有助于指导病害的防控。从福建省福州、宁德、泉州等地市的草莓种植园采集病样12份进行病原菌纯化培养,通过病原菌株形态观察、致病力接种验证、菌株ITS序列比对以及系统进化树分析来鉴定病原菌。结果表明病原菌菌丝体为白色,分生孢子堆为橘黄色,分生孢子长椭圆形、单孢、两端钝圆、无色透明,长约10~15 um,宽约2~4 um;其ITS序列与数据库中Colletotrichum asianum(登录号为MN272369.1)菌株的序列同源性为99.83%,在系统进化树上两者聚在同一分支上,遗传距离最近。结合菌株的形态特征、序列分析和系统进化分析,鉴定出引起福建省草莓萎蔫死苗的病害病原菌为Colletotrichum asianum。研究结果为该病害的有效防治提供了理论依据。