百合炭疽病病原菌PCR检测技术

百合炭疽病是百合(Lilium longiflorum)种球上重要病害之一,其病原为百合炭疽病菌(Colletotrichum lilii Plakidas)。通过百合炭疽病菌与常见胶孢炭疽病菌(C.gloeosporioides)等4种不同炭疽病菌种类的核糖体DNA ITS序列比对设计特异性引物,通过特异性检验,确定BT73/BT-R510和BT-F98/BT-R510。2对引物均可以分别扩增出438bp和413bp的百合炭疽病菌目标片段,而对常见4种炭疽病菌及百合球茎上2种常见的病原菌百合枯萎病菌及灰霉病菌均不能扩增出相同的目标片段。用引物对F73/BT-R510和BT-F98/BT-R510特异性PCR扩增百合炭疽病菌的灵敏度分别都在50pg以上。用外圈引物对F73/BT-R510和内圈引物对BT-F98/BT-R510进行巢式PCR扩增,对百合炭疽病检测的灵敏度提高不明显。

蜘蛛抱蛋(Aspidistra elatior)炭疽病病原菌的分离与鉴定

为明确蜘蛛抱蛋(Aspidistra elatior)炭疽病病原菌的种类,本研究对采集的炭疽病样本进行分离纯化培养,得到1株蜘蛛抱蛋炭疽病病原真菌YYL,采用针刺回接实验测定其致病性,并在形态学鉴定基础上,克隆其ITS、ACT、GAPDH和CAL片段进行多基因联合鉴定。结果表明,该病原菌具有较强致病性,其菌落、菌丝和分生孢子形态符合百合炭疽菌(Colletotrichum lilii)的特征,且与百合炭疽菌相似度最高,其ITS和ACT序列与百合炭疽菌完全一致。综合形态学特征和分子生物学鉴定结果,确定引起蜘蛛抱蛋炭疽病的病原菌为百合炭疽菌。