神奇“魔法条”之新冠病毒的快速检测

胶体金作为商业化的即时检验POCT(point-of-care test)免疫层析技术中最广泛的标记物之一,具有显著的颜色特征,后期无需可视化改造,且形态稳定、环境友好。本文试纸条制作过程简单,不需要大型贵重仪器。采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金,将胶体金标记在新冠病毒的核衣壳N蛋白抗体上,通过在免疫层析试纸条可视区形成类似三明治结构的抗体-抗原-抗体夹心复合物,并以此复合物的红色检测线作为新冠病毒的定性分析依据。该检测方法裸眼可测、操作简单、且快速(10 min)、灵敏(检测限为0.5 ng∙mL^(−1))、低成本(每条不超过5元)。实验过程可以引导学生体验生命体系中抗原抗体相互作用引发的特异性生命化学反应,激发学生对化学、生物、生命科学和纳米材料等学科相互融合的可视化快检技术的浓厚研究兴趣。

胶体金免疫层析法在韭菜农药残留检测中的应用研究

为验证胶体金免疫层析技术在韭菜农残检测中的可靠性和适用性,选用3种不同的农残胶体金免疫层析快速检测产品(胶体金农残快检试剂)检测韭菜中腐霉利、吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、克百威、三唑磷等6种农药残留,并将其与色谱质谱串联法进行比较,对其灵敏度、假阳性率及假阴性率进行验证评价。结果表明,在0.5 LOD的农药添加水平下,3种胶体金农残快检试剂对实验室空白样品的检测结果均为阴性;但当添加水平达到LOD或MLR时,其检测结果均为阳性,证明胶体金农残快检试剂灵敏度较高,且符合国家标准食品中农药最大残留限量要求;实验室加标试验和实际样品比对试验结果显示,胶体金农残快检技术与色谱质谱联用法的检测结果均无显著性差异(χ^(2)<3.84),其假阴性率和假阳性率均为0。故胶体金免疫层析法可在韭菜的农残快速检测中应用。

2021—2023年唐山地区猫泛白细胞减少症的流行病学调查

为了解唐山地区猫泛白细胞减少症的流行情况,采用临床检查、血常规检测和胶体金试纸条检测等方法对唐山地区10家宠物医院的1546例猫泛白细胞减少症疑似病例进行调查分析。结果显示:2023年猫泛白细胞减少症阳性率最低,为10.40%。3~8月龄猫的猫泛白细胞减少症阳性率最高,且7月龄以下患猫出现严重的昏睡、发烧、厌食的症状更为明显。该调查分析为唐山地区猫泛白细胞减少症的防治提供参考依据。

牛病毒性腹泻病毒抗原胶体金快速检测试纸条的研制

为建立一种快速准确且便携的检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,本研究将制备的BVDV单克隆抗体(MAb)作为检测线(T线),以纯化的免源多克隆抗体作为金标蛋白,以羊抗兔IgG-HRP作为质控线(C线),组装成双抗体夹心胶体金层析试纸条,并优化各反应条件。结果显示,最适金标蛋白标记量为30μg/mL,BVDV MAb和羊抗兔IgG-HRP最佳浓度均为0.5 mg/mL。利用猪瘟病毒(CSFV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛丘疹性口炎病毒(BPSV)及BVDV临床分离株评估该试纸条的特异性,结果显示,除阳性对照和BVDV临床分离株检测为阳性外,其余病毒均为阴性,表明该试纸条的特异性较强,无交叉反应。将BVDV-NADL株(10^(6.6)ELD_(50)/mL)10倍倍比稀释后,利用该试纸条检测,结果显示其最低检出量为10^(4.6)ELD_(50)/mL。利用同一批次和不同批次制备的试纸条对CSFV、IBRV、BPSV、BVDV临床分离株检测,结果显示检测结果均一致,表明该试纸条的重复性良好。将制备的试纸条应用于检测临床采集的68份牛血清样品,并以RT-PCR方法同时检测,结果显示胶体金试纸条对BVDV的阳性检出率为17.5%(12/68),RT-PCR对BVDV的阳性检出率为26.5%(18/68),两者之间的总符合率为88.24%。本研究于国内首次采用双抗体夹心方式制备了检测BVDV的胶体金免疫层析试纸条,该方法方便快捷,特异性及敏感性均较好,适宜于牛场BVDV的快速筛选,为进一步研制BVDV胶体金检测试剂盒提供了实验依据。

免疫层析试纸条在食品安全检测中的应用

随着现代食品安全问题的日益凸显,研发快速、准确、低成本的食品安全检测方法具有重要意义。免疫层析试纸条作为一种常用的检测工具,已被广泛应用于食品安全领域。本研究旨在探究免疫层析试纸条在食品安全检测中的应用潜力。通过对相关文献进行综述,可知免疫层析试纸条具有高度的选择性和敏感性,能够迅速检测出食品中的有害物质和致病菌。此外,免疫层析试纸条还具有操作简便、不需要复杂仪器设备、检测周期短等优点,适用于在实验室和现场进行食品安全快速检测。

免疫胶体金法快速检测水产品中喹诺酮类药物

利用QH12杂交瘤细胞株生产抗体,研制高灵敏度的免疫胶体金试剂条,其对洛美沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星的最低检出限分别为2.0、2.5、2.5、5.0 ng·m L^(-1)。通过样品预处理方法优化,建立免疫胶体金快速检测方法(GICT)。将其与HPLC法进行比较,并用LC-MS/MS法验证效果。结果表明,GICT灵敏度高于HPLC法,检测结果与LC-MS/MS法较一致,单个样品检测耗时25 min。综合比较分析,GICT宜作为水产品中喹诺酮类药物残留的快速筛查检测方法进行推广。

检测抗白色念珠菌烯醇化酶IgG抗体免疫胶体金层析试纸的制备

目的建立一种快速检测抗白色念珠菌烯醇化酶IgG抗体的免疫胶体金层析试纸法。方法以重组烯醇化酶包被于硝酸纤维素膜上,与金标垫上包被的金标小鼠抗人IgG单克隆抗体配对,优化试纸制备条件并制备试纸条,检测人血清中的抗念珠菌烯醇化酶IgG抗体。用该方法对38例确证念珠菌血流感染者和50例健康体检者血清进行检测,分析其检测效能。结果用直径30 nm金颗粒制备的烯醇化酶IgG抗体检测试纸条,最适烯醇化酶包被浓度为1. 0 mg/ml。该试纸用于检测多种念珠菌引起的血流感染中的抗烯醇化酶IgG抗体,检测灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为71. 1%,96. 0%,93. 1%和83. 4%。结论用重组白色念珠菌烯醇化酶制备的免疫胶体金层析试纸条有较好的检测效能,具有准确、快速、方便的优点,可用于人血清抗念珠菌IgG抗体的检测。

应用胶体金试纸条诊断方法检测牛结核病的试验

采用牛结核MPB70/83抗体检测胶体金试验方法对贵阳周边及某县奶牛场共309头奶牛进行牛结核病检测,同时采用结核菌素（PPD）皮试进行对比试验,结果显示,该病的感染率为4.48%-6.47%,胶体金试纸条试验与PPD反应具有一定的符合率[75%（15/20）],采用生物统计分析,进行χ2检验,计算得χ2c=0.703,χc2〈χ20.05,显示两种试验差异极不显著。同时试验还证明了牛结核MPB70/83抗体检测胶体金试纸条试验方法具有快速、简便、特异、敏感的特点,并且可作为PPD反应的辅助诊断方法。因此,该方法具有良好的应用前景。

基于侧流免疫层析技术制备胶体金试纸条检测莲子中黄曲霉毒素B_1的研究

目的基于侧流免疫层析技术制备一种适用于快速检测莲子中黄曲霉毒素B1(AFB1)的试纸条。方法利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,金颗粒标记单克隆抗体制成金标偶联物作为结合垫,特异性抗原(AFB1-BSA)和羊抗鼠Ig G二抗分别作为检测线和控制线。结果经组装测试,试纸条的灵敏度为2.5ng·m L-1,检测时间在10 min以内。在检测的23份莲子样品中,6份样品有AFB1,阳性样品经UFLC-MS/MS确证,试纸条假阳性和假阴性率为0。结论所制备的试纸条检测快速、操作简便、结果准确,适合大批量莲子中AFB1的现场检测。

免疫胶体金技术影响因素分析

免疫胶体金技术以其快速、准确、简捷的特点,受到国内外科研工作者及基层工作人员的普遍关注。笔者从耗材的选择、胶体金的制备及标记、膜包被条件、缓冲液和产品保存及验证等方面分析免疫胶体金技术的影响因素,为制备胶体金检测产品提供理论依据和技术参考。

胶体金免疫分析方法的进展

1971年胶体金被引入了免疫化学 ,这一年被公认为是免疫金技术正式诞生的一年 .1996年为纪念胶体金用于免疫化学和组织化学 2 5周年 ,一些学者对免疫金电镜分析、免疫金光镜分析以及免疫金标记组织和细胞的各种技术做了总结 ,但是作为免疫金一项重要的应用 ,免疫金试纸膜和试剂盒检测法 ,却没有谈及 .这篇综述补充了免疫金电镜分析、免疫金光镜分析在最近几年的进展 ,并且着重总结了免疫金在试剂盒和试纸膜上的应用现状 .

鸡传染性法氏囊病快速诊断试纸的研制

本文简述了如何以胶体金免疫层析技术,构造鸡传染性法氏囊病快速诊断试纸。该试纸主要由测试端、显色区和手柄端3部分构成,能在很短的时间内完成对鸡传染性法氏囊病的诊断,且无需任何仪器设备,具有简便、快速、敏感、特异的特点。

不同梅毒螺旋体抗体检测方法的临床应用评价

目的通过对不同梅毒血清抗体检测试验临床应用价值的评价,为临床医师合理选择梅毒血清抗体检测方法提供依据。方法使用的梅毒血清学试验分别是:梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、胶体金层析试验、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)。结果对该院2009年7月至2010年7月输血前、手术前患者6 539例和门诊患者714例进行TP-ELISA检测,前者阳性率为1.72%,后者阳性率为21.57%。其中207例TP-ELISA阳性的患者进行了TPPA确证,阳性率为91.8%;做胶体金层析试验快速检测,阳性率为97.1%;做TRUST检测,阳性率为19.81%。对诊断为梅毒TRUST滴度大于1∶4的17例患者进行抗梅毒治疗后,14例症状消失,复检TRUST滴度小于1∶2。结论 TP-ELISA是良好的梅毒感染筛查试验;TPPA用于梅毒感染的确证能有效排除TP-ELISA和胶体金层析试验的假阳性问题,同时检测TPPA滴度可提高梅毒感染的早期诊断率;TRUST不适合用于梅毒感染的筛查,但TRUST滴度检测有利于判断疗效。

HIV金标法检测在无偿献血中的应用效果分析

目的评估HIV金标法检测在无偿献血中的应用效果。方法对使用HIV金标法进行献血者筛查前后1年,血液HIV ELISA检测和WB确认情况进行对比分析。结果快筛前(对照组)ELISA法检出抗-HIV阳性546人(0.32%)、双阳92人(0.0538%);快筛后(观察组)检出抗-HIV阳性531人(0.29%)、双阳17人(0.0094%)。观察组与对照组ELISA抗-HIV阳性率无明显下降(χ2=18.2,P>0.05),双阳人数显著下降(χ2=55.80,P<0.01);观察组和对照组WB阳性分别为5人(0.028‰)、81人(0.474‰),快筛后HIV感染者献血率(WB确认阳性率)显著降低(χ2=71.4,P<0.01)。结论在采血现场开展HIV金标法检测可以大大降低HIV阳性确认的比例,同时应加大对献血者的宣传和教育,引进先进技术,提高输血的安全性。

呼和浩特市乳制品三聚氰胺残留情况调查

目的了解呼和浩特市乳制品中三聚氰胺残留情况。方法从超市采集69份奶粉制备的休闲乳制品及奶酪和奶皮等传统乳制品,另外采集4个品牌128份液态奶。采用高效薄层色谱法和免疫胶体金检测卡进行三聚氰胺残留检验。结果 197份样品中除了7份奶粉制备的休闲乳制品和2个工厂制作奶酪免疫胶体金法检验结果可疑外,其他样品检验结果均为阴性。结论 高效薄层色谱法虽不如免疫胶体金法灵敏,但检测成本较低,适合进行日常大规模筛查性检验。

犬细小病毒单克隆抗体的制备及其在胶体金免疫层析试纸研发中的应用

为制备犬细小病毒胶体金免疫层析试纸,将F81细胞中分离的CPV免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立间接ELISA方法筛选分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3E2。3E2的亚类为IgG1型,腹水抗体效价为1.8×105,交叉试验表明,3E2可与CPV特异性结合,与其他犬常见病毒无交叉反应。用3E2单克隆抗体制备的检测CPV的胶体金免疫层析试纸条特异性良好,为诊断和研究CPV奠定了基础。

胶体金免疫层析法检测水产品中孔雀石绿前处理方法的优化

为了提高胶体金检测孔雀石绿方法的精密性、准确度、检测限等指标,并尽可能缩短样品处理时间,对样品用量、提取剂用量、离心时间、吹干温度、空气出量等检测条件进行优化,建立一种简便、快速检测水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的胶体金免疫层析方法。优化后,在满足检测限、假阳率和假阴率不变的条件下,样品处理过程更加简单,省去了传统方法需要过柱的步骤;单个样本处理,除去空气吹干的时间,只要最少7min即可完成样品的前处理,大大低于市场上样品前处理的时间;出带速度快,检测时间短,单个样本的检测时间在10~15min;对组织(鱼)中孔雀石绿的检出限可提高到2μg/kg;减少样品处理过程中耗材和试剂的用量,节约检测成本。该方法节省了大量的人力和物力,适用于日常的大批量样品检测,为胶体金免疫层析法检测孔雀石绿及其代谢物,提供了一种新的样品处理方法。

胶体金技术在鼠疫监测中的应用

目的选择快速、敏感的鼠疫检测方法,为鼠疫防治提供科学依据。方法胶体金免疫层析法(GICA)与鼠疫间接血凝(IHA)和反向血凝(RIHA)同步检测鼠疫抗体/抗原。结果在四川省191份动物肝脾标本中,GICA检出阳性10份,RIHA阳性6份;检测动物血清标本417份,GICA与IHA均检出阳性13份。结论GICA简便快速,适合现场鼠疫监测。

牛黄镇惊丸中黄曲霉毒素残留检测方法研究

目的对中药复方制剂牛黄镇惊丸中黄曲霉毒素残留检测方法进行研究。方法采用免疫胶体金(GICA)方法和免疫亲和柱-高效液相色谱(IAC-HPLC)方法对牛黄镇惊丸中黄曲霉毒素残留量进行检测,并对两种方法进行方法学研究,对8批次市售牛黄镇惊丸进行检测。结果采用推荐的免疫亲和柱-高效液相色谱方法检测牛黄镇惊丸样品时,回收率仅为46.6%~67.7%,不满足试验要求。试验采用倍比稀释的方法,发现5倍稀释待测样品后,样品加样回收率为80.7%~94.0%,符合试验要求。免疫亲和柱-高效液相色谱方法线性回归方程:Y=0.656 X-0.436,R 2=0.9981;表明黄曲霉毒素B 1(AFB 1)在4~20 ng·mL-1之间线性关系良好。试验精密度RSD为0.98%~1.55%之间,重复性为0.20%。采用免疫胶体金方法进行检测,未发现高于黄曲霉毒素检测方法定量限的样品。免疫胶体金方法和免疫亲和柱-高效液相色谱方法检测结果基本一致。结论建立了牛黄镇惊丸中黄曲霉毒素残留免疫胶体金和免疫亲和柱-高效液相色谱的检测方法。牛黄镇惊丸成分复杂,对免疫亲和柱-高效液相色谱的方法检测干扰较大,可采用稀释的方法优化样品前处理过程,提高方法的回收率,保证了检测方法的准确可靠。

术中快速检测甲状旁腺激素的胶体金免疫层析试纸的研制

目的建立一种检测甲状旁腺激素的定性检测技术,为甲状腺术中快速检测甲状旁腺激素提供一种简便、快速、准确的方法。方法采用胶体金免疫层析技术竞争检测法,研制定性检测甲状旁腺激素的胶体金试纸条,通过与化学免疫发光对比胶体金试纸条的灵敏度、特异性和稳定性。结果通过胶体金免疫层析技术检测甲状旁腺激素是可行的,检测甲状旁腺激素的最低浓度为1μg/ml。结论甲状旁腺激素胶体金试纸简便、快速、准确,可以满足对术中甲状旁腺激素的快速检测。