无血清培养的大肠癌Colo205细胞生成肿瘤干细胞球的研究

目的通过含生长因子的无血清培养基(SFM)培养大肠癌Colo205细胞,分离并扩增出肿瘤干细胞球。方法SFM培养大肠癌Colo205细胞,以含血清培养基(SSM)组为对照。观察细胞形态,检测正常肠道干细胞标志Musashi-1的表达,更换培养基为SSM诱导其分化,分别检测SFM组细胞分化前、分化后以及SSM组细胞表面标志CD133、CD44表达的改变,分析各细胞周期的比例,最后进行核型分析。结果Colo205细胞能在SFM中存活、增殖并形成肿瘤干细胞球,高表达Musashi-1,SFM组细胞分化前CD133、CD44的表达高于SSM组和SFM组分化后,差异有统计学意义(P<0.05),SFM组分化后与SSM组相比差异无统计学意义(P>0.05)。细胞周期分析发现肿瘤干细胞球处于高增殖状态,核型分析发现SFM组细胞与SSM组细胞染色体条数未见明显差别。结论含生长因子的SFM培养Colo205细胞,可生成肿瘤干细胞球,这种细胞球富集了肿瘤干细胞。

常春藤皂苷元的糖化学修饰与体外抗COLO205细胞增殖活性

通过连接不同糖片段的三氯乙酰亚胺酯衍生物、甲基衍生物、对甲基苯硫酚衍生物等合成了4个常春藤皂苷元衍生物(4~7,其中6和7为新化合物),其结构经1H NMR和13C NMR表征。采用MTT法检测了化合物对人结肠癌细胞COLO205的抑制活性。结果表明:4和5对COLO205细胞有部分抑制作用,与浓度正相关;6对COLO205只在高浓度(1.00×10-4mmol/L)有较好抑制作用(98.36±0.43%);7只在中等浓度(1.00×10-5mmol/L)对COLO205有微弱抑制作用(2.75±1.22%)。

瑞芬太尼对人结肠癌COLO205细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨瑞芬太尼对人结肠癌COLO205细胞增殖及凋亡的影响。 方法 体外培养人结肠癌细胞COLO205，按完全随机法分为两组：正常对照组和瑞芬太尼干预组。四甲基偶氮唑盐（monotetrazolium， MTT）法检测瑞芬太尼在相同浓度的条件下不同时间点对结肠癌COLO205细胞增殖的影响，测得抑制率并计算半数抑制浓度值，应用凋亡试剂盒结合流式细胞仪检测瑞芬太尼对人结肠癌COLO205细胞凋亡的影响。 结果 MTT结果显示，相同浓度的瑞芬太尼干预结肠癌COLO205细胞，分别在24、48、72 h测算半数抑制浓度结果为（50.6±4.0）、（43.6±3.7）、（36.0±1.1） nmol/L；瑞芬太尼干预组凋亡率为（59±9）%，对照组凋亡率为（71±15）%。 结论 瑞芬太尼能抑制结肠癌COLO205细胞增殖，促进其凋亡。

塞来昔布抑制人结肠癌细胞COLO205增殖及对COX-2、MMP-9mRNA表达影响的体外实验研究

目的研究塞来昔布在体外对人结肠癌细胞COLO205生长增殖及对环氧化酶2(COX-2)、金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA表达的影响。方法体外培养人结肠癌细胞COLO205,分组为正常对照组和塞来昔布干预组,MTT法检测正常对照组和塞来昔布组抑制率,塞来昔布在不同时间且相同浓度的条件下,不同时间对于结肠癌细胞增殖的影响,测得抑制率并算得半抑制浓度(IC50)值;RT-PCR检测COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同浓度的塞来昔布干预结肠癌COLO205细胞,分别在24 h,48 h,72 h测算IC50结果为:96.620±9.044μmol/L、71.561±5.706μmol/L、58.982±11.069μmol/L,塞来昔布浓度提高和干预时间延长,结肠癌COLO205细胞活力下降。RT-PCR结果显示:正常对照组与塞来昔布干预组COX-2 mRNA灰度值分别为:0.832±0.012,0.113±0.001,干预组塞来昔布干预细胞的COX-2mRNA表达降低,所应显示的条带消失,无表达率,两组比较差异有显著性(t=18.051,P=0.000);正常对照组与塞来昔布干预组MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.756±0.050,0.171±0.001,干预组MMP-9 mRNA表达明显降低,条带消失,无mRNA表达,两组比较差异有显著性(t=17.286,P=0.001)。结论体外实验表明:塞来昔布抑制结肠癌COLO205细胞增殖,通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现抗肿瘤作用。

结肠癌细胞系Colo205细胞膜表面表达血小板和T细胞活化抗原1的配体

目的 对血小板和T细胞活化抗原 1(PTA1)配体的表达做初步鉴定。方法 首先克隆PTA1胞膜外区基因片段、构建PTA1/Ig融合蛋白表达载体 ,制备PTA1/Ig融合蛋白。通过粘附实验及组化实验证实PTA1配体的分布。结果 PTA1/Ig能特异性结合于Colo2 0 5细胞表面 ,并能阻断活化Jurkat细胞对Colo2 0 5细胞的粘附。结论 证实结肠癌细胞系Colo2 0 5表达PTA1配体 ,为今后进一步了解肿瘤细胞与活化T细胞的相互作用在肿瘤发病机理中的意义创造了条件。

PIAS3在结肠癌组织和细胞中的表达及意义

[目的]观察PIAS3在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨PIAS3在结肠癌发生发展中的作用。[方法]采用免疫组织化学染色法检测60例结肠癌及同源癌旁组织中PIAS3蛋白的表达,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)、Western blot检测人结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中PIAS3 m RNA及蛋白表达水平。[结果 ]结肠癌组织中PIAS3蛋白表达显著高于癌旁正常组织(χ~2=8.543,P=0.006);且表达强度随肿瘤病理分化程度的降低、Dukes分期的增高及肿瘤体积的增大而逐渐增高,差异有统计学意义(P均<0.05);PIAS3在结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中均有表达,其中COLO205细胞株中PIAS3蛋白及m RNA表达高于SW480和SW620细胞株(P<0.05)。[结论 ]PIAS3的表达水平以及活性与结肠癌的发生发展有关,可能为结肠癌的早期诊断及靶向治疗提供新的分子靶点。