川楝素对人结肠癌细胞LoVo生物行为学的影响

目的探讨川楝素对人结肠癌细胞LoVo生物行为学的影响。方法采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭实验,观察川楝素对人结肠癌细胞LoVo增殖、黏附和侵袭能力的影响。结果川楝素能有效抑制人结肠癌细胞LoVo增殖(P<0.01)。川楝素作用人结肠癌细胞LoVo 24 h后,细胞的黏附能力明显降低(P<0.01),侵袭的细胞数与对照组比较明显减少(P<0.01)。结论川楝素有抑制人结肠癌细胞LoVo的增殖、黏附及侵袭的能力。

大黄素通过ROS介导大肠癌细胞株LOVO凋亡的实验研究

目的观察大黄素对人大肠癌细胞株LOVO凋亡的影响,并探讨活性氧(ROS)是否介导了大黄素诱导细胞凋亡的过程。方法体外分组培养人大肠癌细胞株LOVO,设空白对照组和大黄素3个不同浓度干预组(40,80,120μmol.L-)1,大黄素干预时间分别为12,24,48 h。以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率、AnnexinⅤ-FITC和PI双染流式细胞术检测凋亡,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内ROS水平,Western印迹法检测caspase-3表达。结果与空白对照组比较,大黄素干预组呈浓度依赖性诱导大肠癌细胞株LOVO凋亡,细胞内ROS水平明显增加,caspase-3的表达明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论大黄素通过ROS介导线粒体凋亡信号通路诱导大肠癌细胞凋亡,可能是大肠癌细胞凋亡诱导途径之一。

LoVo细胞系中结肠癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定

目的:从结肠癌LoVo细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAMhigh特异表型的结肠癌干细胞样细胞,观察其生物学行为,证实该细胞系中结肠癌干细胞样细胞的存在。方法:从普通血清培养的LoVo细胞系中以流式细胞仪分选具有CD44+/EPCAMhigh表型的细胞,接种于添加生长因子的无血清培养基中,观察其增殖过程,继而诱导分化。MTT法、流式细胞术检测CD44+/EPCAMhigh、EPCAMlow和未分选LoVo细胞的增殖能力及细胞周期分布。3种细胞接种裸鼠,比较不同细胞的成瘤率;免疫荧光技术检测小鼠次代CD44+/EPCAMhigh细胞中CD44/EPCAM的表达。结果:LoVo细胞中有17.4%的CD44+/EPCAMhigh细胞,并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长,且可连续传代;在血清的诱导下,呈贴壁分化生长,其形态与未分选LoVo细胞无差别。CD44+/EPCAMhigh细胞增殖能力高于EPCAMlow细胞及未分选LoVo细胞,且细胞周期多集中在G0/G1期。以500个CD44+/EPCAMhigh细胞接种裸鼠成瘤率为90%(9/10),而1×104个EPCAMlow细胞成瘤率为0(0/10)。小鼠移植瘤中次代CD44+/EPCAMhigh细胞仍能少量表达CD44和EPCAM。结论:LoVo细胞中存在CD44+/EPCAMhigh结肠癌干细胞样细胞,CD44+/EPCAMhigh可用于结肠癌肿瘤干细胞的深入研究。

科罗索酸调控STAT3信号通路诱导结肠癌LoVo细胞凋亡

目的探讨科罗索酸对结肠癌Lo Vo细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法将结肠癌Lo Vo细胞随机分成阴性对照组和不同浓度科罗索酸组。阴性对照组正常培养,科罗索酸组分别以5,10,20,40μmol·L-1科罗索酸作用24 h。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞凋亡情况,Western blot检测STAT3的表达及磷酸化STAT3(pSTAT3)水平。结果经5,10,20,40μmol·L-1科罗索酸作用Lo Vo细胞24 h后,细胞活性与阴性对照组相比,分别为(98.02±14.05)%,(78.25±8.71)%(P<0.05)、(36.63±13.36)%(P<0.01)和(18.41±10.38)%(P<0.01);阴性对照组凋亡细胞比例为(7.37±1.34)%;5,10,20,40μmol·L-1科罗索酸组凋亡细胞比例依次为(7.45±1.55)%,(12.72±3.46)%(P<0.05),(22.22±5.73)%(P<0.01)和(58.52±7.27)%(P<0.01)。Western blot显示科罗索酸处理后Lo Vo细胞p-STAT3水平明显降低。结论科罗索酸呈浓度依赖性地抑制结肠癌Lo Vo细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与阻断STAT3通路有关。

反义DLC-1基因对结直肠癌LoVo细胞增殖和细胞周期的影响

目的应用核糖核酸干扰(RNAi)技术,通过对大肠癌细胞株LoVo中DLC-1基因mRNA表达的抑制,初步探讨DLC-1基因对大肠癌细胞株的生物学行为影响。方法构建DCL-1的RNAi重组体pGCsiDLC,转染大肠癌LoVo细胞株。采用RT-PCR观察转染前后细胞株中DLC-1 mRNA以及Bax、Bcl-2基因表达的改变,MTT比色法检测转染前后细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。结果成功构建发卡siRNA真核表达载体pGCsiDLC;pGCsiDLC转染LoVo细胞后,电泳显示DLC-1 mRNA表达水平明显下降;LoVo细胞生长曲线增长幅度亦随时间的增加而逐渐增高,在48h最为明显,RNAi组细胞比脂质体组及空白对照组细胞增殖明显增高(P<0.05);干扰后的LoVo细胞株G0/G1期发生阻滞,而G2/M期细胞数量分布减少。而Bax和bcl-2基因表达在干扰前后未见明显改变。结论成功构建载体介导的DLC-1靶向RNAi重组体可有效抑制LoVo细胞DLC-1 mRNA表达;DLC-1基因可抑制结直肠癌细胞增殖并且对细胞周期重新分布,其可能与结直肠癌的发生发展有一定关系,可能是一个新的抑癌基因。

血桐叶水提物对人结肠癌LoVo细胞的增殖抑制作用

水煮浸提血桐叶,减压浓缩后冻干制成粗体样品;以MTT、生长曲线法、集落形成实验考察血桐叶提取物对人结肠癌LoVo细胞的增殖抑制作用,并且以倒置显微镜观察其对细胞形态影响.实验结果表明,血桐叶水提物对LoVo细胞的增殖有显著抑制作用,呈明显剂量依赖关系,并且对细胞的形态有改变作用.

大肠癌细胞系Lovo中亚群(SP)细胞的分离培养和鉴定

目的:应用无血清培养液(SFM)培养Lovo细胞系,克隆分离具有干细胞样特性SP细胞.方法:应用SFM培养Lovo细胞,分离成球样生长的细胞群作为SP细胞,并通过有限稀释,分化,自我更新,含血清培养基(SSM)和SFM交替培养及Musashi-1化学染色方法来鉴定SP细胞.结果:Lovo细胞中约含有0.54%-0.62%的SP能够在无血清培养基中能够存活、增殖,形成悬浮的肿瘤细胞球;在SFM中加入血清可促使SP细胞分化;SP细胞可以连续传代,并可交替培养于SSM和SFM中,细胞形态无明显变化;SP细胞Musashi-1染色阳性.结论:应用SFM可从Lovo细胞中分离出极少量的具有干细胞特性的SP细胞.

CEA-rv诱导特异性CIK细胞对Lovo细胞株杀伤作用的研究

目的探讨癌胚抗原重组基因痘苗(CEA-rv)负荷脐血来源树突状细胞(DCs)诱导特异性CIK细胞对结肠癌细胞株Lovo杀伤活性的影响作用。方法取制备好的CEA-rv,用脐血单个核细胞(CBMC)分别制备DCs和CIK细胞;用负荷CEA-rv的DCs和CIK细胞共培养,诱导CEA-rv-DC-CIK细胞。用流式细胞术检测DC免疫表型,MTT法检测CBMC、CIK、Ag-CIK、Ag-DC-CIK和CEA-rv-DC-CIK对Lovo肿瘤细胞株的杀伤活性。结果脐血DCs高表达CD86、CD40,中度表达CD83和CD80。实验组细胞(CEA-rv-DC-CIK)对Lovo细胞的杀伤能力(62%)明显高于对照组(P<0.01)。结论 CEA-rv负荷的DCs能增强CIK细胞对Lovo细胞的杀伤活性,为CEA阳性肿瘤的免疫治疗提供了新的思路。

结肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu中microRNA表达的初步研究

目的建立结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU并初步筛选可能的耐药相关的microRNA。方法采用5-FU浓度递增法建立人结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线;用MTT法鉴定耐药细胞株耐药性并计算耐药指数(RI);用microRNA芯片技术检测耐药细胞株LoVo/5-FU与其亲本细胞株LoVo中mi-croRNA的表达谱,筛选差异表达的microRNA;用实时荧光定量PCR方法对筛选出的部分差异microRNA在耐药细胞及其亲本细胞中的表达情况进行验证。结果 LoVo/5-FU细胞与LoVo细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大,耐药株LoVo/5-FU细胞相对于其亲本LoVo细胞的耐药倍数为8.08。microRNA芯片的结果显示,耐药株LoVo/5-FU细胞与亲本LoVo细胞比较,有10个microRNA表达上调,13个microRNA表达下调;实时荧光定量pcr的结果进一步证实mir-210、mir196a、mir-1281在LoVo/5-FU中显著上调,而let-7f、mir-1228显著下调,其中mir-210在LoVo/5-FU与LoVo中的表达有明显差异。结论 LoVo/5-FU细胞株耐药性稳定,筛选获得的差异miRNA可能通过调控其靶基因而参与人结肠癌细胞对5-Fu的耐药,为进一步研究microRNA在结肠癌耐药机制中的作用奠定基础。

TNP-470对人结肠癌Lovo细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨TNP 4 70对体外培养的人结肠癌Lovo细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 采用MTT法检测TNP 4 70对体外培养的Lovo细胞的生长抑制作用 ,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡百分率。结果 TNP 4 70对Lovo细胞生长具有抑制作用 ,并存在量效和时间依赖性。流式细胞仪分析表明 :G0 /G1期细胞百分率上升 ,S期细胞百分率下降 ,增值指数 (PI)下降 ,凋亡率上升 ,电镜下可见典型的细胞凋亡形态改变。结论 TNP 4 70对Lovo细胞的增殖具有抑制作用 。

苹果酸舒尼替尼对人结肠癌细胞株LoVo的增殖抑制作用

目的探讨苹果酸舒尼替尼体外对结肠癌LoVo细胞的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法利用四亚基噻唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法观察苹果酸舒尼替尼对结肠癌LoVo细胞生长抑制作用。应用流式细胞仪、电子显微镜检测苹果酸舒尼替尼诱导LoVo细胞的凋亡作用。结果 MTT结果显示苹果酸舒尼替尼在(2.5～20μM)的浓度范围内对结肠癌LoVo细胞的生长具有显著的抑制作用。生长曲线结果显示各个浓度的药物对LoVo细胞的抑制作用呈时间依赖性。流式细胞仪可以观察到细胞周期阻滞在G0/G1期。透射电子显微镜下见到典型的早期凋亡形态学表现。结论在一定的浓度范围内,苹果酸舒尼替尼可以抑制LoVo细胞的生长,并呈剂量和时间依赖效应。其抗肿瘤的特性与引起肿瘤细胞的凋亡有关。

西咪替丁对人结肠癌细胞株LoVo生长及凋亡的影响

目的:探讨西咪替丁对体外培养的人结肠癌细胞株LoVo的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法:采用MTT比色法、流式细胞术、形态学观察和TUNEL法检测不同浓度的西咪替丁溶液处理LoVo细胞后的生长状况、形态学、分子生物学改变。结果:西咪替丁可抑制LoVo细胞的增殖,且有剂量依赖性的趋势:1×10 -2 mol/L西咪替丁处理LoVo细胞4 8h后,在光镜、电镜检测中,可见典型的凋亡细胞;流式细胞术检测凋亡率为32 .7% ,bcl- 2相关蛋白表达率为36 .74 % ;TUNEL法进一步从分子生物学角度证实凋亡的发生。结论:西咪替丁对结肠癌细胞LoVo有抑制作用,主要机制为诱导其发生凋亡,凋亡发生的原因与西咪替丁可下调bcl- 2蛋白的表达有关。

沉默Livin基因表达对结肠癌LoVo细胞生物学特性的影响

目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默结肠癌细胞株LoVo中Livin基因的表达,研究Livin对LoVo细胞增殖和凋亡等生物学特性的影响。方法:构建针对Livin基因的干扰质粒pSilencer4.1-L1和pSilencer4.1-L2,转染LoVo细胞,通过RT-PCR、Western blotting检测转染后LoVo细胞Livin的表达,并用流式细胞术、克隆形成实验、MTT法检测转染后LoVo细胞的凋亡、细胞周期、克隆形成、增殖以及对顺铂的敏感性。结果:成功构建pSilencer4.1-L1、pSilencer4.1-L2干扰质粒,pSilencer4.1-L1可有效沉默LoVo细胞中Livin mRNA和蛋白的表达(P<0.01),但pSilencer4.1-L2效果不明显。与对照组相比,pSilencer4.1-L1转染后LoVo细胞的凋亡率增加[(24.2±3.2)%vs(8.1±1.4)%,P<0.01];细胞增殖明显抑制,转染后72 h增殖抑制率约70%;细胞的克隆形成率明显下降[(15±4.6)%vs(85±5.8)%,P<0.01];S期细胞明显增加[(45.7±4.9)%vs(28.0±3.0)%,P<0.01],G_1期细胞明显减少[(43.0±5.2)%vs(62.8±5.1)%,P<0.01];对顺铂的敏感性增加,细胞凋亡率增加[(65.3±6.2)%vs(43.4±6.9)%,P<0.01]。结论:pSilencer4.1-L1可有效沉默结肠癌LoVo细胞中Livin基因的表达,抑制细胞增殖和克隆形成、诱导细胞凋亡、增加细胞对顺铂的敏感性。

miRNA-19a对结肠癌LoVo细胞生物学特性影响的机制研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-19a对结肠癌LoVo细胞生物学特性影响的可能机制。方法采用脂质体介导的转染方法将miRNA-19a模拟物转染到人结肠癌细胞系LoVo细胞;检测转染后miRNA-19a基因的表达;利用CCK8试剂盒检测细胞的增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡影响,细胞侵袭小室法检测细胞的体外侵袭力,RT-PCR和Western blot检测Hsp90/Akt信号通路的变化。结果转染miRNA-19a的结肠癌LoVo细胞,miRNA-19a表达上调,细胞体外增殖能力增强,细胞凋亡减少,细胞的侵袭力增强;细胞Hsp90和Akt的基因和蛋白表达升高。结论 miRNA-19a可通过上调Hsp90/Akt信号通路表达,促进LoVo细胞增殖,减少细胞凋亡,增强LoVo细胞的侵袭能力。

OSU-03012对人结肠癌LoVo细胞增殖侵袭及COX-2、VEGF、MMP-2表达的影响

目的:探讨OSU-03012对人结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭及环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法:分别使用0μmol/L、3μmol/L、5μmol/L、10μmol/L的化合物OSU-03012处理人结肠癌LoVo细胞作为研究对象.MTT法检测各组细胞的增殖能力,Transwell法检测各组细胞的侵袭能力,qRT-PCR法和Western Blot法检测各组细胞COX-2、VEGF、MMP-2的表达情况.结果:OSU-03012作用结肠癌LoVo细胞24h、48h和72h,随着药物浓度的增加LoVo细胞的增殖能力逐渐降低,相同时间点不同浓度间两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05).不同浓度OSU-03012作用LoVo细胞24h,穿过基底膜的LoVo细胞数量,LoVo细胞COX-2、VEGF、MMP-2 mRNA和蛋白的表达明显降低,不同浓度间两两比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:OSU-03012可抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖与侵袭,其作用的分子机制可能与下调COX-2、VEGF和MMP-2的表达有关.

共培养的树突状细胞与CIK细胞治疗结肠癌血源性肺转移的实验研究

目的 观察树突状细胞 (dendriticcellsDCs)与同源CIK(cytokineinducedkiller)细胞共培养后治疗转移性肺癌的可能性。方法 将Lovo结肠癌细胞经尾静脉注射给Balb/c裸鼠建立转移性肺癌模型 ,应用树突状细胞与同源CIK细胞进行免疫治疗。结果 经尾静脉注射的Lovo结肠癌细胞可播散致肺 ,导致荷瘤裸鼠死亡。应用树突状细胞和CIK细胞进行免疫治疗 ,可以抑制转移病灶的形成及延长荷瘤裸鼠的生存期。结论 树突状细胞可增强CIK细胞抗肿瘤效应 ,共培养DC CIK细胞有效抑制血源性转移肿瘤的生长 ,为临床过继免疫治疗的应用提供理论基础。

TNP-470联合5-FU抑制结肠癌生长的实验研究

背景与目的:新生血管生成是肿瘤生长转移的一个重要条件,本研究通过体内外实验观察血管生成抑制剂TNP-470联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对结肠癌生长的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测TNP-470和5-FU对LOVO细胞的生长抑制效应,用Burgi法分析联合用药效果。建立结肠癌皮下移植瘤模型,观察TNP-470单独或联合5-FU对移植瘤的生长抑制作用,采用免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,抗Ⅷ因子抗体标记计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果:TNP-470和5-FU对体外培养的LOVO细胞的生长具有抑制作用,半数抑制浓度(IC50)分别为55.8ng/ml和4.6ng/ml,Burgi法分析表明两者联合应用具有协同效应,LOVO细胞生长进一步受到抑制。体内实验表明:各治疗组肿瘤的生长明显受到抑制,而联合治疗组抗瘤作用进一步增强。联合治疗组和5-FU组肿瘤组织中VEGF的表达较对照组显著减少,联合治疗组和TNP-470组肿瘤组织中的MVD与对照组比较也显著降低。结论:TNP-470能够抑制LOVO细胞及其皮下移植瘤的生长和新生血管形成,与5-FU联合应用具有协同作用,可提高抗瘤效应。

RNAi介导的组织因子基因沉默抑制裸鼠移植性结肠癌的生长

组织因子(tissue factor,TF)是机体外源性凝血途径的启动因子,发挥生理性止血的重要作用.近来研究表明,TF除凝血功能外尚与多种恶性肿瘤的血管生成,侵袭转移及预后密切相关.为探讨TF对人结肠癌细胞(LoVo细胞)生长能力的影响,构建带有TFsiRNA的重组腺病毒Ad-pTF和不带有TFsiRNA的对照病毒Ad-pDC,分别感染LoVo细胞,采用RT-PCR和Western免疫印迹法检测被感染LoVo细胞的TFmRNA和蛋白表达水平,并通过体内成瘤实验,进一步分析对LoVo细胞生长能力的影响.结果显示,与感染Ad-pDC的LoVo细胞相比,感染Ad-pTF的LoVo细胞的TF mRNA和蛋白表达水平更低,皮下种植瘤的体积更小,局部侵袭范围也更局限.研究表明,腺病毒介导的RNAi能特异而有效地沉默LoVo细胞中TF基因的表达,进而抑制LoVo细胞体内种植瘤的生长侵袭能力.

人结肠癌紫杉醇耐药细胞株的建立及耐药相关基因mRNA表达的研究

目的建立紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol,探讨结肠癌细胞紫杉醇获得性耐药的可能机制。方法反复用紫杉醇处理结肠癌LoVo细胞,诱导建立结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol;通过MTT法检测细胞药物敏感性,光学显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR法测定细胞中多药耐药基因MDR1、MRP1、LRP、GST-π和TopoⅡ的表达。结果建立的紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol对紫杉醇的耐药指数为42,为高度耐药;对阿霉素及5-氟脲嘧啶也产生强烈的交叉耐药,耐药指数分别为796和187。相较于亲本细胞LoVo,LoVo/Taxol细胞形态发生明显的变化,G2/M期阻滞和细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。在五种经典的耐药相关蛋白中MRP1、MDR1基因m RNA的转录水平分别提高了37倍和2倍,LRP、GST-π基因m RNA的转录水平分别下降了11倍和3倍(P均<0.05),To Po II基因转录水平无明显变化。结论成功建立的人结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol为典型的多药耐药细胞模型,其耐药机制可能与MRP1基因的过表达有关。

白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖与p38 MAPK的关系研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)抑制人结肠癌细胞生长的作用与p38 MAPK的可能关系。方法利用结晶紫染色、Western blot和流式细胞术检测Res对LoVo细胞增殖的抑制作用;Western blot分析Res对LoVo细胞凋亡的促进作用,以及Res对p38 MAPK磷酸化的影响;利用p38MAPK抑制剂,通过结晶紫染色和Western blot实验,分析Res抑制结肠癌LoVo细胞增殖的作用与p38 MAPK之间的关系。结果与对照组相比,Res在20μmol·L^(-1)时就能明显抑制LoVo细胞增殖(P<0.05),并促使细胞周期阻滞在S期,上调PCNA蛋白水平;Res能呈浓度依赖性增加Bad的蛋白水平,而抑制Bcl-2蛋白表达;Res对p38 MAPK总蛋白水平无明显影响,但可明显增加p38 MAPK的磷酸化水平;抑制p38 MAPK明显促进LoVo细胞增殖,并能减弱Res对LoVo细胞增殖的抑制作用、对Bad表达促进作用和对Bcl-2表达的抑制作用。结论 Res对LoVo细胞的增殖具有抑制作用并促进凋亡,其机制可能与Res促进p38 MAPK的磷酸化有关。