Characterizations of Chinese isolates of Coxiella burnetii in the com1 gene sequence

Objective: To know some genetical characterizations of Coxiella burnetii Chinese isolates by comparing the coml gene sequence. Methods: com1 gene sequences of Chinese isolates were amplified, se-quenced, and analyzed by comparing our result and the previous published data. Results: Three different com1 sequences were identified in 7 Chinese isolates. Sequence comparison indicated that the isolates harboring the QpRS plasmid could be defined as a new group and, in addition, the isolates carrying the same plas-mid type showed similar com1 gene sequence. Conclusion: Study suggests that the classification of the group based on the coml gene sequence is highly associated with the plasmid type of the isolates and, however, little related to disease forms and geographical origins of the isolates.

贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

目的 克隆和表达贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii) 2 7kDa外膜蛋白基因 (com1 )。方法 采用PCR方法 ,从质粒pGEM -T/com1扩增出Com1基因片段 ,经鉴定后 ,将其克隆于原核表达载体 pQE30 ,构建成重组质粒 pQE30 /com1 ,IPTG诱导表达。结果 (1 )获得长约 760bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知com1序列相同。 (2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 2 7kDa处有表达条带。经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌体蛋白的 1 7 2 %。 (3)经分析 ,有较好的抗原性。 (4)表达菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于包涵体中。结论 贝氏柯克斯体com1基因在大肠杆菌中获得了高效表达 。

滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物感染贝氏柯克斯体的调查

目的调查滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物贝氏柯克斯体感染情况。方法2015年12月至2016年10月,课题组以云南省玉龙县、剑川县和梁河县鼠疫疫源地为采样点,使用夹夜法在不同季节、不同海拔、不同生境捕获野外鼠形动物,收集到2524份肝脾样本。采用巢氏PCR方法对Q热病原体贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)Com 1基因的保守片段进行扩增。应用SPSS20.0软件,采用χ^(2)检验或Fisher确切概率法分析不同疫源地、海拔梯度、生境、季节、性别间Cb在野外鼠形动物中的流行分布情况。结果检测2524份样本,Cb阳性23份,阳性率为0.91%。检出Cb的鼠形动物包括齐氏姬鼠、中华姬鼠、黄胸鼠、社鼠、锡金小鼠、大绒鼠、臭鼩鼱和毛猬。不同生境、性别间野外鼠形动物Cb阳性率无差异(χ^(2)_(生境)=6.514,χ^(2)_(性别)=0.076,P>0.05);季节间Cb阳性率春季(2.44%)高于秋季(0.37%)(χ^(2)=11.550,P<0.008);剑川鼠疫疫源地Cb阳性率(1.46%)高于玉龙鼠疫疫源地(0.34%)(χ^(2)=6.121,P<0.017);剑川鼠疫疫源地海拔2450 m以上野外鼠形动物Cb阳性率(4.64%)高于2450m以下(0.13%)(χ^(2)=28.504,P<0.001)。同源性和系统发育分析显示滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物Cb Com1序列和Genbank相关参考序列高度同源。结论滇西鼠疫疫源地野外鼠形动物Cb阳性率较低,但野外鼠形动物Cb感染广泛,Cb Com 1基因片段在野外鼠形动物中呈现出高度保守的流行与分布。