复方肠泰抑制小鼠结肠癌血管生成及其机制的实验研究

目的研究复方肠泰对小鼠结肠癌血管生成的影响及其机制。方法建立结肠癌CT26.WT小鼠移植瘤模型,测量复方肠泰给药后小鼠肿瘤体积变化;免疫组化检测肿瘤组织MVD,ELISA检测小鼠血清VEGF、CD44v6和MMP-2表达;RT-PCR检测肿瘤组织VEGFR2和HIF-1α的转录水平;Western blot检测肿瘤组织VEGFR2、HIF-1α、p-AKT和AKT的表达。结果复方肠泰抑制小鼠结肠癌生长(P<0.05),抑制肿瘤组织MVD,下调血清VEGF、CD44v6和MMP-2的水平(P<0.05,P<0.01),抑制结肠癌组织VEGFR2和HIF1α的转录(P<0.05,P<0.01),抑制VEGFR2、HIF-1α和p-AKT的表达。结论复方肠泰抑制小鼠结肠癌生长,具有抗小鼠结肠癌血管生成作用且呈剂量依赖关系,可能通过抑制HIF-1α表达和下调AKT信号通路发挥作用。

复方肠泰抑制人结肠癌SW480细胞增殖的实验研究

目的:考察复方肠泰(人参、薏苡仁、莪术等)对人结肠癌细胞SW480细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法:采用噻唑蓝比色法测定不同浓度复方肠泰在不同作用时间内对在体外培养SW480细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果:复方肠泰可在G0/G1期以及G2/M期阻滞人结肠癌细胞SW480的增殖,使S期细胞比率降低。结论:复方肠泰在3.51～7.81mg/mL范围内呈现明显的量效关系。

复方肠泰方通过抑制Akt/mTOR/p70S6K通路诱导CT26细胞自噬的研究

目的:研究复方肠泰方对结肠癌CT26细胞增殖和自噬的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT法检测不同浓度复方肠泰方对CT26细胞增殖的影响,MDC染色法和透射电镜观察复方肠泰方干预CT26细胞后是否形成自噬体。蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的蛋白表达。采用自噬诱导剂雷帕霉素研究复方肠泰方是否诱导CT26细胞自噬性死亡。采用蛋白质印迹法检测Akt/mTOR/p70S6K通路相关蛋白表达水平。结果:复方肠泰方可以抑制CT26细胞的增殖;透射电镜观察到复方肠泰方干预的细胞中有类似自噬溶酶体结构;MDC结果显示,与空白对照组相比,复方肠泰方组细胞荧光强度增强;复方肠泰方能增加LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1的表达水平(P<0.05);与复方肠泰方组相比,复方肠泰方和雷帕霉素共同处理使CT26细胞的病死率显著增加(P<0.05);此外,复方肠泰方干预后,CT26细胞Akt、mTOR和p70S6K的蛋白表达基本不变,p-Akt、p-mTOR和p-p70S6K的蛋白表达较空白对照组显著降低(P<0.05)。结论:复方肠泰方可能通过抑制Akt/mTOR/p70S6K通路诱导结肠癌CT26细胞自噬,从而发挥抗肿瘤作用。

正交试验优选复方肠泰颗粒提取工艺

目的：优选复方肠泰颗粒的提取工艺，为该制剂的工业化生产提供参考。方法：以浸出物、人参皂苷Rb，及常春藤皂苷元得率为综合评价指标，采用L9（3^4）正交试验考察加水量、提取时间和煎煮次数对提取效果的影响。采用HPLC测定人参皂苷Rb，和常春藤皂苷元含量，流动相分别为流动相乙腈（A）-水（B）梯度洗脱（0-5min，10％-30％A；5-20min，30％-45％A；20-22min，45％-10％A）和乙腈-0.1％甲酸水溶液（70：30）。结果：最佳提取工艺为分别加10，8，8倍量水提取3次，每次1h。人参皂苷Rb1和常春藤皂苷元质量分数分别为2.48，10.50mg·g^-1，浸出物得率16.72％。结论：优选的提取工艺重复性好、稳定可行，适用于复方肠泰颗粒的工业化生产。

复方肠泰体外抗大肠癌活性的有效部位筛选

目的:在复方肠泰不同极性提取部位中筛选出体外抗大肠癌有效部位。方法:取对数生长期结肠癌细胞SW480进行体外培养,加入复方肠泰浓缩液及其不同极性部位加以干预,以氟尿嘧啶作为阳性对照,采用MTT法检测对癌细胞的抑制率。结果:复方肠泰浓缩液能显著抑制结肠癌细胞SW480的增殖,且其抑制率呈现一定的量-效关系。复方肠泰石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位抗肿瘤活性存在差异,其中正丁醇部位对结肠癌细胞的抑制率较高,其低、中、高剂量的抑制率分别为34.40%、52.50%、93.83%。结论:在体外试验中,复方肠泰抗大肠癌作用的主要有效部位为正丁醇部位。