水蛭及其复方制剂对急性缺血性脑卒中的作用及其机制研究进展

急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)又称急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI),是一种严重的神经系统疾病。活血化瘀药水蛭具有多组分、多功效、多靶点的特点。为明确水蛭及其复方制剂在对急性缺血性脑卒中的作用及其机制,特归纳了中药水蛭、水蛭有效成分、水蛭药对以及含水蛭复方及其制剂在防治急性缺血性脑卒中时的一些关键病理环节,包括抗凝、抗血栓、抗凋亡、抑制炎症反应及自由基损伤、保护血管内皮和血脑屏障等。指出了水蛭及其复方制剂在防治急性缺血性脑卒中时的作用机制和靶点,以期为水蛭及其复方制剂在临床防治急性缺血性脑卒中以及进一步开展相关研究时提供参考。

复方水蛭素的药效学研究

目的:探讨复方水蛭素抗肿瘤的作用机理。方法:①对W256肿瘤的影响:于大白鼠左前腋下接种W256瘤种细胞液(0.3 ml/只),次日开始用药。阴性对照组给予生理盐水;阳性对照组给予5-FU;中药组分别给予不同剂量的复方水蛭素;②对胃癌靶细胞(NKM)的影响:将药物稀释成1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640的浓度,接种于多孔培养板内的人胚胎肺细胞(HEL)和肿瘤靶细胞(NKM)上,37℃、CO2培养,观察细胞病变,计算抑瘤指数;③对超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化物(MDA)的影响:取小鼠44只,随机分成四组,给药方法同W256肿瘤实验组,连续用药30 d,次日摘取小鼠眼球取血,用微量快速检测法测定SOD和MDA的含量。结果:复方水蛭素对W256肿瘤具有明显的抑制作用(P<0.01),该药浓度在1∶80(最大抑瘤浓度)时抑制肿瘤靶细胞的效应最大,1∶640(最小抑瘤浓度)时,抑制肿瘤靶细胞的效应最小。同时,复方水蛭素还能明显提高小鼠血中SOD的活性和降低MDA代谢产物的含量(P<0.05)。结论:复方水蛭素具有明显的体内外抗肿瘤作用。

物理因子联合喜辽妥治疗动静脉内瘘外渗临床疗效观察

目的探讨超短波疗法与低频磁电疗法联合喜辽妥治疗动静脉内瘘外渗的临床疗效.方法将60例在昆明医科大学第一附属医院血透室接受维持性血液净化治疗期间,因内瘘穿刺致血管外渗的的患者,随机分为2组各30例,观察组采取复方喜辽妥软膏外涂的基础上增加了超短波与低频磁治疗.对照组单纯采取喜辽妥软膏外涂.于治疗前、治疗7 d后分别对2组患者疼痛程度及疗效进行比较.结果治疗7 d后观察组总有效率(96.67%);对照组总有效率(80.00%),均较治疗前改善,以上指标以观察组改善较明显,与对照组间差异具有统计学意义(P<0.05).结论超短波疗法与低频磁电疗法联合喜辽妥治疗动静脉内瘘外渗、促进血肿的吸收、减轻疼痛和软化血管等方面明显优于单纯的喜辽妥软膏外敷.

紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子的调控作用

目的探讨支架涂层复合物紫杉醇水蛭素对脂多糖(LPS)诱导人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子表达的影响。方法选用4~6代的HCASMC,将细胞分为空白对照组(正常HCASMC,未做任何处理)、LPS模型组(LPS干预)、紫杉醇水蛭素高浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.2 mg/ml水蛭素+LPS干预)、紫杉醇水蛭素低浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.0125 mg/ml水蛭素+LPS干预)。每组设置3个复孔。ELISA法检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的表达水平,用Q-PCR法对各组细胞NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA进行检测,用Western Blotting检测NF-κ B p65蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,LPS模型组NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1β的m RNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P均<0.05);HCASMC经高、低浓度紫杉醇水蛭素复合物预处理,LPS刺激后,上述指标低于LPS模型组,差异有统计学意义(P均<0.05)。LPS模型组NF-κ B p65蛋白表达水平明显高于空白对照组,而紫杉醇水蛭素预处理组NF-κ B p65蛋白表达水平较LPS模型组明显降低,其中高浓度处理组降低更为显著。与空白对照组比较,LPS模型组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。与LPS模型组比较,紫杉醇水蛭素低浓度与高浓度组TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。其中高浓度紫杉醇水蛭素干预后IL-1β表达下降较低浓度更为显著,差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中NF-κ B p65的激活具有明显的抑制作用,有效下调核转录因子NF-κ B p65的转录活性,显著抑制下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达。

配合饲料和血液对菲牛蛭水蛭素活性及抗氧化指标的影响

为探究配合饲料和血液对菲牛蛭水蛭素活性和抗氧化指标的影响,用配合饲料和鸡血对菲牛蛭进行60d的养殖,测定和分析这两种投喂方式下菲牛蛭水蛭素活性和抗氧化指标的情况。结果显示:配合饲料组水蛭素活性略低于血液组,差异性不显著(P>0.05)。菲牛蛭肠道SOD和CAT活性较高,而MDA含量较低。嗉囊中SOD和CAT活性较低,而MDA含量较高。配合饲料组肠道超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于血液组肠道SOD和CAT活性(p<0.05);配合饲料组肠道丙二醛(MDA)含量稍低于血液组,而配合饲料组嗉囊SOD活性显著低于血液组(p<0.05),CAT活性稍低于血液组,而配合饲料组的嗉囊MDA含量显著低于血液组(p<0.05)。研究表明:菲牛蛭嗉囊和肠道组织(SOD和CAT)与MDA活性表现形式相反;配合饲料投喂菲牛蛭,水蛭素活性未受影响,对肠道抗氧化能力有一定的增强作用,MDA含量上达到或超过血液饲养水平。

紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对HCASMC炎性活化过程中TLR4-MyD88信号通路的影响

目的探讨支架涂层复合物紫杉醇水蛭素对脂多糖(LPS)诱导人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)炎性活化过程中TLR4-MyD88信号通路的影响。方法选用4-6代的HCASMC,用四唑盐(MTT)比色法筛选出紫杉醇水蛭素支架涂层复合物干预HCASMC的无毒性大、小两个浓度,使细胞活力保持在90%以上。进而将细胞分为空白对照组、脂多糖(LPS)造模组、LPS造模+紫杉醇水蛭素大浓度组、LPS造模+紫杉醇水蛭素小浓度组,其中大、小浓度紫杉醇水蛭素复合物处理组在LPS造模前预处理细胞4 h,继而用Q-PCR法对TLR4和MyD88 mRNA进行检测,并用Western blotting法检测对应蛋白表达的变化。结果 1μmol/L的紫杉醇配比0.8 mg/ml水蛭素对HCASMC生长有明显的抑制作用,细胞活力与空白对照组相比差异明显(P<0.05)。1μmol/L的紫杉醇配比0.4 mg/ml水蛭素干预后细胞活力降低为78.7%,对细胞生长产生了一定影响,其余各浓度组细胞活力均能保持在90%以上。紫杉醇水蛭素复合物预处理细胞4 h后,Q-PCR结果显示,与空白对照组相比,LPS造模后可同时激活TLR4、MyD88的mRNA表达(P<0.05),HCASMC炎症模型构建成功。各干预组经紫杉醇水蛭素处理后,与单纯LPS模型组相比,TLR4的mRNA基因表达量显著降低(P<0.05),但不影响MyD88基因表达(P>0.05)。Western blotting结果显示:与空白对照组相比,LPS模型组TLR4、MyD88蛋白表达明显升高(P<0.05),成功构建了稳定的HCASMC炎症模型。经紫杉醇水蛭素处理后,各干预组TLR4、MyD88蛋白表达较LPS模型组显著降低(P<0.05),其中紫杉醇水蛭素大浓度组的抗炎作用相对更强。结论紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC细胞炎性活化过程中TLR4-MyD88通路的激活具有明显的抑制作用,此抑制作用不通过影响MyD88基因表达来产生,而可能与其对MyD88蛋白水平的调控有关。

配合饲料添加赖氨酸对菲牛蛭生长及水蛭素活性的影响

探明赖氨酸对菲牛蛭生长及水蛭素活性的影响,为规模化养殖菲牛蛭提供技术参考,在配合饲料中添加不同浓度的赖氨酸对菲牛蛭进行为期37d的饲养,测定和统计菲牛蛭的生长情况及水蛭素活性。结果表明:配合饲料中添加0.7~2.1g/kg赖氨酸后菲牛蛭的特定生长率为0.77~0.82,增重率为29.76%~32.12%,水蛭素活性为280.52~285.52U/g,均显著高于不添加赖氨酸处理,其特定生长率和增重率均显著低于血液处理,水蛭素活性与血液处理无显著性差异,且略高于血液处理。添加赖氨酸浓度为1.4g/kg时,菲牛蛭的特定生长率、增重率和水蛭素活性最高,分别为0.82、32.12%和(285.52±5.68)U/g。

配合饲料和血液对菲牛蛭水蛭素活性及非特异性免疫指标的影响

为探究配合饲料和血液对菲牛蛭水蛭素活性和非特异性免疫指标的影响,用配合饲料和血液对菲牛蛭进行60 d的养殖,测定和分析这两种投喂方式下菲牛蛭水蛭素活性和非特异性免疫指标的情况。结果显示:配合饲料组水蛭素活性略低于血液组,差异性不显著(P>0.05);肠道组织中,配合饲料组溶菌酶(LSZ)活性显著低于血液组(P<0.05),而碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性显著高于血液组(P<0.05);嗉囊组织中,配合饲料组LSZ活性稍低于血液组,而AKP和ACP稍高于血液组,差异不显著(P>0.05)。研究表明:菲牛蛭摄食配合饲料,水蛭素活性未受影响;在AKP和ACP方面能达到或超过血液饲养水平,但对菲牛蛭的LSZ活性有一定的下降。