目的:基于转录组测序(RNA-seq)技术分析益肾散结复方抑制阿霉素肾病肾小球硬化的作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为4组,分别为正常组、阿霉素模型组、盐酸贝那普利对照组和益肾散结复方组(以下统称正常组、模型组、对照组和复方组),...目的:基于转录组测序(RNA-seq)技术分析益肾散结复方抑制阿霉素肾病肾小球硬化的作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为4组,分别为正常组、阿霉素模型组、盐酸贝那普利对照组和益肾散结复方组(以下统称正常组、模型组、对照组和复方组),连续2次尾静脉注射盐酸阿霉素制备阿霉素大鼠肾病模型,对照组和复方组分别按10mg/kg/d盐酸贝那普利和6.24g/kg/d益肾散结复方煎剂灌胃6周,其余组灌胃予等剂量生理盐水,灌胃前后对比大鼠一般情况、24小时尿蛋白定量(24h UTP)、血尿素氮(BUN)及血肌酐(SCr)指标变化,电镜下观察大鼠肾脏病理改变;同时将复苏的HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞分为以上4组,以40μM浓度阿霉素诱导大鼠肾脏系膜细胞凋亡模型,分别对应处理各组细胞,观察大鼠肾小球系膜细胞凋亡情况。在此基础上,对正常组、模型组、复方组细胞进行RNA测序,筛选差异表达基因(DEG),对共同DEG进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果:动物实验研究显示益肾散结复方可改善阿霉素肾病大鼠便溏、反应迟钝、活动减少等精神状态,减少24h UTP、BUN和SCr水平( P <0.05),减少阿霉素肾病大鼠肾小球系膜区基质沉积,改善基底膜缺血、皱缩情况,从而抑制肾小球硬化程度;细胞实验研究显示:益肾散结复方可延缓阿霉素诱导的HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程,从而对肾小球硬化起抑制作用。根据细胞RNA-seq结果,益肾散结复方抗阿霉素肾病肾小球硬化的共同DEG有863个,542个上调, 321个下调;GO分析显示这些DEG主要富集在生物过程、细胞成分和分子功能三个方面,其中与肾小球硬化相关的GO功能有:正向调节细胞迁移、细胞粘附、细胞外基质、整合素结合、CXCR趋化因子受体结合、趋化因子活动等;KEGG分析显示上述DEG富集在19条通路( P <0.05)中,其中细胞外基质(ECM)-受体相互作用、核转录因子κB(NF-κB)信号通路、钙信号通路与肾小球硬化关系密切。结论:益肾散结复方可通过抑制肾小球系膜细胞凋亡和减少系膜区基质沉积来抑制阿霉素肾病肾小球硬化过程,其作用可能通过正向调节肾小球系膜细胞迁移、参与有丝分裂细胞周期、促进细胞粘附等生物过程,作用于细胞外基质,发挥整合素结合、CXCR趋化因子受体结合和促进趋化因子活动等分子功能来实现,与调控ECM-受体相互作用、NF-κB信号通路、钙信号通路密切相关。展开更多
文摘目的:基于转录组测序(RNA-seq)技术分析益肾散结复方抑制阿霉素肾病肾小球硬化的作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为4组,分别为正常组、阿霉素模型组、盐酸贝那普利对照组和益肾散结复方组(以下统称正常组、模型组、对照组和复方组),连续2次尾静脉注射盐酸阿霉素制备阿霉素大鼠肾病模型,对照组和复方组分别按10mg/kg/d盐酸贝那普利和6.24g/kg/d益肾散结复方煎剂灌胃6周,其余组灌胃予等剂量生理盐水,灌胃前后对比大鼠一般情况、24小时尿蛋白定量(24h UTP)、血尿素氮(BUN)及血肌酐(SCr)指标变化,电镜下观察大鼠肾脏病理改变;同时将复苏的HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞分为以上4组,以40μM浓度阿霉素诱导大鼠肾脏系膜细胞凋亡模型,分别对应处理各组细胞,观察大鼠肾小球系膜细胞凋亡情况。在此基础上,对正常组、模型组、复方组细胞进行RNA测序,筛选差异表达基因(DEG),对共同DEG进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果:动物实验研究显示益肾散结复方可改善阿霉素肾病大鼠便溏、反应迟钝、活动减少等精神状态,减少24h UTP、BUN和SCr水平( P <0.05),减少阿霉素肾病大鼠肾小球系膜区基质沉积,改善基底膜缺血、皱缩情况,从而抑制肾小球硬化程度;细胞实验研究显示:益肾散结复方可延缓阿霉素诱导的HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程,从而对肾小球硬化起抑制作用。根据细胞RNA-seq结果,益肾散结复方抗阿霉素肾病肾小球硬化的共同DEG有863个,542个上调, 321个下调;GO分析显示这些DEG主要富集在生物过程、细胞成分和分子功能三个方面,其中与肾小球硬化相关的GO功能有:正向调节细胞迁移、细胞粘附、细胞外基质、整合素结合、CXCR趋化因子受体结合、趋化因子活动等;KEGG分析显示上述DEG富集在19条通路( P <0.05)中,其中细胞外基质(ECM)-受体相互作用、核转录因子κB(NF-κB)信号通路、钙信号通路与肾小球硬化关系密切。结论:益肾散结复方可通过抑制肾小球系膜细胞凋亡和减少系膜区基质沉积来抑制阿霉素肾病肾小球硬化过程,其作用可能通过正向调节肾小球系膜细胞迁移、参与有丝分裂细胞周期、促进细胞粘附等生物过程,作用于细胞外基质,发挥整合素结合、CXCR趋化因子受体结合和促进趋化因子活动等分子功能来实现,与调控ECM-受体相互作用、NF-κB信号通路、钙信号通路密切相关。
