地鼠肾细胞狂犬病纯化疫苗临床研究观察

了解地鼠肾细胞狂犬病纯化疫苗接种安全性及有效性。分别以 1.0ml及 0 .5ml的剂量 ,按暴露后及暴露前免疫程序给 313人接种 ,用小鼠中和试验法检测血清中和抗体效价。结果显示 :临床副反应轻微 ,副反应率为0 .89%～ 15 % ;免疫全量疫苗和半量疫苗的人群均获保护力 ,抗体阳转率为 10 0 % ,免后抗体GMT滴度分别为35 .2IU/ml(n =32 )和 31.4IU/ml(n =37) ,经检验两组无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;免疫全量疫苗和半量疫苗两组的免疫前、后相比 ,经检验有显著性差异 (P <0 .0 5 ) 。

柱层析法纯化人用地鼠肾细胞狂犬病疫苗

用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－６Ｂ凝胶层析法纯化原代地鼠肾细胞狂犬病苗，可去除绝大部分杂蛋白，总蛋白含量减少９９．４％以上，纯化后抗原比活性提高２１０倍，单位疫苗剂量中牛血清含量降低１８．７倍以上。方法简单，价廉。

人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)基质残余蛋白标准品的建立

目的:研制用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中地鼠肾细胞蛋白质残留量检测(ELISA法)的国家标准品。方法:分两步进行协作标定和量值溯源,第一步采用Lowry法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品原液进行赋值,第二步采用ELISA法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品进行赋值。结果:数据经统计学处理结果,最终原代地鼠肾细胞蛋白质标准品量值为4.0μg·mL^(-1),95%可信限为:(4.0±0.5)μg·mL^(-1)。结论:建立了国家原代地鼠肾细胞蛋白质标准品,赋值准确可靠、科学严谨,可用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)基质残余蛋白的质量控制。

狂犬病免疫程序研究(英文)

报道我院1990～1991年对四川省泸县玄滩区157例大伤患者用国产地鼠肾细胞狂犬病疫苗进行免疫程序研究。在157例犬伤患者按不同免疫程序随机抽样分为4组，在免疫前（即O日）和免疫后15，30，60，90，180日取血分离血清，6次血清进行一次检测。其结果以Ⅲ组和Ⅳ组产生的保护性抗体效价较满意，在30日出现较高，维持时间最长（180日），均有高度显著性差异（P＜0．005）。Ⅲ组免疫程序可节约一剂疫苗，减少两次注射时间，又达到保护作用，为此，我们推荐Ⅲ给免疫程序．

浓缩地鼠肾细胞狂犬病疫苗与纯化Vero细胞狂犬病疫苗接种人体的血清学效果观察

为了解国产浓缩地鼠肾细胞狂犬病疫苗与法国纯化Vero细胞狂犬病疫苗接种人体后中和抗体产生情况。分别用两种疫苗接种 1 0人 ,用小鼠中和试验方法检测中和抗体滴度。国产疫苗五针全程免疫后 30天 (第一针接种后 6 0天 )可 1 0 0 %达到保护水平 ,法国疫苗在第一针接种后 30天 1 0 0 %达到保护水平。第一针接种后 1 4、30、6 0天时 ,前者抗体平均滴度分别是 0 0 6IU /ml、1 .0 2IU/ml、2 .0 7IU/ml;后者抗体平均滴度分别是 0 2 5IU /ml、3.2 4IU/ml、1 1 .86IU/ml,后者比前者产生抗体的滴度高 ,具有显著性差异 (P <0 0 2 )。

不同抗原和佐剂对超免疫马匹抗狂犬病血清免疫效价的影响

用羊脑狂犬病疫苗和地鼠肾狂犬病疫苗，加福氏不完全佐剂或AI（OH）3佐剂，对60匹马进行超免后，检测血清中和抗体，结果表明，羊脑狂犬病疫苗的中和抗体滴度（5726．95±2．365～10028．77±1．559，n=38）显著高于地鼠肾狂犬病疫苗（728．50±2．558～2265.75±1．554，n=32）（p＜0．01）。以羊脑狂犬病疫苗作为抗原，加福氏不完全佐剂，血清中和抗体滴度（5726．9±2．365～10028．27±1．259，n=56）明显高于以1％Al（OH）3为佐剂者（655.39±1．357～5369．7±1.606n=60）（P＜0.01）．加福氏不完全佐剂，羊脑疫苗抗原用量减少1/2，而血清中和抗体滴度仍可达到较高的水平。

β-丙内酯在人用纯化地鼠肾细胞狂犬疫苗制备中的应用研究

我们将β－丙内酯（简称ＢＰＬ）用于人用纯化地鼠肾细胞狂犬疫苗的灭活，虽然ＢＰＬ是一种致癌物，但极易水解，用毛细管气相色谱法检测含ＢＰＬ的疫苗在３７℃水浴中水解０ｈ、０．５ｈ、１．０ｈ、１．５ｈ、２．０ｈ 时的含量（ｐｐｍ ）分别为２６２．０、７０．０、１３．０、５．１，未检出，结果表明疫苗中的ＢＰＬ随水解时间延长，其含量逐渐变小，２ｈ 以后彻底消失，这为我们应用ＢＰＬ灭活狂犬病毒所需水解时间提供了科学依据。用病毒灭活试验及病毒增殖试验的常规方法对用ＢＰＬ灭活后的疫苗进行有效性实验，结果小白鼠均健康存活，这表明已无活病毒存在。

地鼠肾细胞狂犬病疫苗的纯化研究

我们应用凝胶过滤及离子交换柱层板法对地鼠肾细胞狂犬病疫苗进行纯化，结果表明，凝胶柱层析法即可使该疫苗效价达到４．８ＩＵ／ｍｌ，小牛血清残留置小于５０ｎｇ／ｍｌ，符合《中国生物制品规程》要求。并经离子交换柱层板后，效力降低至１．９ＩＵ／ｍｌ，病毒损失较大。故只采用凝胶过滤柱层析法做为该苗的纯化工艺，并为大规模生产提供依据。

冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)过敏性试验研究

目的研究冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)有无过敏反应。方法采用豚鼠主动全身过敏试验、小鼠腘窝淋巴结试验和大鼠被动皮肤过敏试验,全面评价冻干人用狂犬病疫苗肌肉注射能否引起过敏反应。结果冻干人用狂犬病疫苗豚鼠主动全身过敏试验出现弱阳性反应;小鼠腘窝淋巴结试验结果为阳性,大鼠被动皮肤过敏试验出现潜在的阳性反应。结论冻干人用狂犬病疫苗肌肉给药可能引起过敏反应,临床应用需密切关注。

冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)肌肉刺激性试验研究

目的观察冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)肌肉给药后有无刺激反应。方法选取新西兰兔4只,左侧股四头肌肌肉注射冻干人用狂犬病疫苗1 m L 3次,右侧同法肌肉注射生理盐水作为对照。药后72 h取给药部位肌肉进行病理组织学检查。结果病理组织学检查结果显示给药侧肌组织肌纤维呈凝固性坏死,间质出血、水肿,单核细胞浸润;对照侧肌肉亦未见刺激反应。结论冻干人用狂犬病疫苗肌肉注射可能引起注射部位刺激反应。

重组猪胰酶在冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中的应用

目的 探究重组猪胰酶(recombinant porcine trypsin, RPT)代替猪源胰酶在冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产中的可能性。方法 选用SPF级地鼠,无菌取肾,用4种不同浓度(0.05、0.10、0.15和0.20 mg/mL)的重组猪胰酶消化原代地鼠肾(primary hamster kidney, PHK)细胞,比较细胞总数、细胞活率以及培养6 d的细胞形态,筛选出最佳重组猪胰酶的工作浓度;对消化液A(含0.30%柠檬酸钠的0.30 mg/mL重组猪胰蛋白酶溶液)和消化液B(含0.30%柠檬酸钠的0.15 mg/mL重组猪胰蛋白酶溶液)消化效果进行对比,选择合适的消化液;对P1代PHK细胞接种狂犬病病毒aG株,确定最佳病毒感染复数(multiplicity of infection, MOI);对不同胰酶消化的细胞接种狂犬病病毒aG株,并比较两者病毒滴度。结果 重组猪胰酶对原代PHK细胞消化的最佳浓度为0.10 mg/mL,消化液A更适用于P1代PHK细胞的消化,细胞培养6 d后形成致密单层,胞体饱满;最佳MOI范围为0.10~0.50,且试验具有高度重复性;镜下观察细胞病变无明显变化,但是重组猪胰酶消化后的细胞比猪源胰酶脱落较少,肉眼可见病毒收获液更澄清;2种胰酶消化制备的P1代PHK细胞病毒滴度差异无统计学意义(P=0.630,P>0.05)。结论 重组猪胰酶可以替代猪源胰酶用于制备冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞),为冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产工艺的改进奠定基础。

人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)的免疫原性评价

目的研究狂犬病病毒aG株生产的人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)免疫接种后抗体动态水平,评价疫苗的免疫原性,并对企业A和企业B生产的狂犬病疫苗进行效力评价。方法采用企业A和B生产的人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)(简称狂苗)按暴露后免疫程序接种受试者,分别于免疫前、第1针免疫后3、7、14、42 d抽血并分离血清,用快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测中和抗体滴度,比较2组受试者血清样本的抗体阳转率和抗狂犬病中和抗体滴度;并对2015年1月至2023年3月企业A和企业B申报批签发的狂苗抽检效价结果进行回顾性分析,效力检测采用《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)2020版(三部)人用狂犬病疫苗效价测定法。结果企业A和企业B生产的狂苗第1针免疫后7 d抗体阳转率分别为50.6%、51.5%,14、42 d阳转率均为100%,抗体阳转率差异无统计学意义(χ^(2)=0.0161,P=0.899);第1针免后7 d中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为1.5、2.2 IU/mL,差异无统计学意义(t=0.316,P=0.752);第1针免后14 d的GMT分别为5.7、8.7 IU/mL,差异无统计学意义(t=0.864,P=0.388);第1针免后42 d的GMT分别为9.7、9.8 IU/mL,差异无统计学意义(t=0.092,P=0.925)。参照《中国药典》2015版附录3503和《中国药典》2020版附录3503第一法(NIH法)检测的企业A和企业B的疫苗效价几何均值分别为6.8和6.0 IU/剂,差异无统计学意义(t=1.699,P=0.094)。参照《中国药典》2020版附录3503第二法(改良NIH法)检测的企业A和企业B生产的狂苗效价均≥4.0 IU/剂。结论2家企业利用狂犬病病毒aG株在原代地鼠肾细胞上生产的狂苗均可以及时地在人体内诱导产生保护性抗体,回顾分析表明效价检测结果全部符合规定,疫苗具有良好的免疫原性。

狂犬病病毒aG株在人用狂犬病疫苗中应用的研究进展

狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的以中枢神经系统症状为主的一种动物源性传染病,病死率几乎100%,狂犬病疫苗是预防狂犬病的主要手段。1931年,研究者从狂犬病病犬脑中分离获得狂犬病病毒,经兔脑传至30多代,经驯化后获得一种固定毒(北京株),后续经多家机构合作,将狂犬病病毒北京株在豚鼠脑和原代地鼠肾细胞中交替传代15年,获得地鼠肾细胞适应株,即aG株,用于人用狂犬病疫苗生产。本文就狂犬病病毒aG株的传代适应方法、基因特性及其制备相应疫苗的免疫保护作用作一综述。

人用狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞蛋白质国家标准品的研制

目的研制用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中地鼠肾细胞蛋白质残留量检测(ELISA法)的国家标准品。方法分两步进行协作标定和量值溯源,第一步采用Lowry法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品原液进行赋值,第二步采用ELISA法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品进行赋值。随机抽取16支标准品,检测pH值,采用方差分析统计检验均匀性;将标准品分别在4、25和37℃放置不同时间(1、2、3和4周),不同时间点取3支,于-20℃保存,待所有样本放置结束后统一用ELISA法检测蛋白含量,方差分析统计检验稳定性。结果协作标定的数据经统计学分析,原代地鼠肾细胞蛋白质标准品赋值为4.0μg/mL,95%可信限为(4.0±0.5)μg/mL,均匀性及稳定性良好。结论建立了国家原代地鼠肾细胞蛋白质标准品(批号:250024-201901),赋值准确可靠、科学严谨,对人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)的质量控制具有重要意义。

冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产毒种的筛选

目的筛选冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产毒种。方法将原代地鼠肾细胞传毒种(北京固定毒7aG)和豚鼠脑传毒种(北京固定毒6aG4)平行接种于10层细胞工厂培养的原代单层地鼠肾细胞,收获病毒液,共收获8次,1、3、5、7、9号细胞工厂接种脑毒,2、4、6、8、10号细胞工厂接种细胞毒。1次收获(简称1收)培养72h,从2次收获(简称2收)开始,培养24h,收获液经超滤浓缩、柱层析纯化、除菌过滤、再浓缩配制成人用狂犬病疫苗半成品,检测各项指标,筛选最佳毒种。结果6aG4株毒种制备的病毒收获液、浓缩液、纯化液、纯化除菌过滤液、狂犬病疫苗半成品的各项检定指标都优于7aG毒种。结论豚鼠脑传毒种(6aG4)明显优于原代地鼠肾细胞传毒种(7aG),选择豚鼠脑传毒种(6aG4)作为人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产毒种。

人用狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞蛋白质国家对照品的建立

目的建立用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中地鼠肾细胞蛋白质残留量检测(ELISA法)的国家对照品。方法采用ELISA法,用原代地鼠肾细胞蛋白质标准品(量值为4.0μg/mL)对原代地鼠肾细胞蛋白质对照品进行协作标定赋值,并进行均匀性和稳定性分析。结果协作标定的数据经统计学分析后,原代地鼠肾细胞蛋白质对照品量值为34.7 ng/mL,95%参考范围为(34.7±10.1)ng/mL,该对照品的均匀性和稳定性考察也符合要求。结论建立了人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)原代地鼠肾细胞蛋白质国家对照品(批号为:250025-201901),以确保检测体系的准确、可靠。

用浓缩地鼠肾细胞狂犬病毒抗原免疫马匹获得高效价血浆

目的制备高效价马抗狂犬病免疫血浆。方法通过细胞制备、病毒的接种、培养、收获、浓缩等步骤,研制了浓缩地鼠肾细胞狂犬病毒抗原,并与羊脑狂犬病毒抗原作马匹免疫对比试验。结果浓缩地鼠肾细胞抗狂犬病免疫血浆的效价明显高于羊脑抗狂犬病免疫血浆。试验组血浆平均效价为157IU/ml,对照组为113IU/ml,两组差异有统计学意义。结论已成功制备高效价抗狂犬病免疫血浆。

628例接种人用纯化地鼠肾细胞狂犬疫苗者血清IgG抗体水平调查

目的了解人用纯化地鼠肾细胞狂犬疫苗的免疫接种效果。方法收集2009年1月-2011年12月接种人用地鼠肾细胞狂犬纯化疫苗628人的流行病学资料,并分别采集接种疫苗后第7 d和第15 d的血清标本。用ELISA方法检测血清IgG抗体,对不同性别、不同年龄组和接种后不同时间的血清抗体水平进行比较分析。结果共检测疫苗接种人群628人,免疫后7 d和15 d的IgG抗体阳性率分别为59.71%和94.11%,经χ2检验,两者间差异有统计学意义(P<0.01)。10岁以下年龄组接种人群无论是接种7 d还是接种15 d的血清IgG抗体阳性率高于60岁以上年龄组(P<0.05)。不同性别免疫接种7 d后与免疫接种15 d后的IgG抗体阳性率间差异无统计学意义(P>0.05)。结论接种人用纯化地鼠肾细胞狂犬疫苗的人群IgG抗体阳性率与接种人群的年龄、接种后的时间相关,接种后15 d的IgG抗体阳性率达到94.11%,60岁以上年龄组的IgG抗体阳性率明显低于10岁以下年龄组。