白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中优化表达及人群血清抗体水平分析

目的 构建白喉毒素突变体CRM197的原核表达载体,在大肠杆菌中表达CRM197蛋白。分析健康人群血清中的CRM197抗体水平。方法 对CRM197基因进行大肠杆菌密码子优化并克隆至pET28a(+)中,经表达条件优化后采用镍柱亲和层析和离子交换层析对重组蛋白CRM197进行纯化,对纯化的CRM197进行Western blot鉴定。最后,经纯化后的CRM197蛋白与健康人群血清进行反应,检测人群血清中针对该蛋白的抗体水平。结果 CRM197蛋白进行了密码子及表达条件优化后,获得了可溶性表达蛋白。经镍柱亲和层析和离子交换层析后其纯度可达95%以上,Western Blot鉴定后能得到单一的特异性条带。经纯化的CRM197蛋白与不同年龄阶段健康人群血清均发生不同程度的抗原抗体反应。结论 利用本研究的策略,CRM197得到高效的可溶性表达,但人群血清中含有高水平的CRM197抗体,这些抗体的存在可能会影响到应用CRM197结合多糖作为抗原进行特异免疫效果的评价以及作为诊断抗原的应用。

难治性炎症性肠病患者英夫利西血药浓度的检测及疗效评价

目的探讨炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）患者英夫利西（infliximab,IFX）血药浓度与疗效的关系,了解抗IFX抗体产生情况。方法选取2013年5月-2014年8月应用IFX治疗的14例难治性IBD住院患者,每例患者于应用IFX前空腹抽取血样1~4份,共获得血液样品31份,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测量全部31份血清中IFX血药浓度及其中的26份血清中抗IFX抗体产生情况,同时每个采血点对溃疡性结肠炎患者进行Mayo评分,克罗恩病患者进行CDAI评分从而进行疗效评价。结果 31次抽血时有17次患者有效,有效率为54.8%,IFX有效浓度为2.16~41.83μg/ml,平均（15.79±13.87）μg/ml;14次抽血无效时IFX浓度为0.69~23.67μg/ml,平均（6.36±6.09）μg/ml,两组间比较差异有统计学意义（t=2.359,P=0.025）。26份血清样品检测了抗IFX抗体,结果显示1份3.8%（1/26）为阳性,其余25份均为阴性。结论 IFX疗效与其血药浓度呈正相关;抗IFX抗体产生率较低。

血清英夫利昔单抗浓度检测对炎症性肠病患者疗效的评估价值

我国炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)发病率逐年上升,本文主要介绍IBD发病的免疫学机制,并且对目前新出现的生物制剂之一-英夫利昔单抗(infliximab,IFX)在这类疾病中应用的理论学基础及疗效进行介绍,讨论IFX血清浓度与临床持续应答和内镜下缓解的相关性,IFX血清浓度在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)和克罗恩病(Crohn's disease)中的差异,术前IFX血清浓度对手术预后的影响,重点讨论对于复发患者、有IFX抗体(anti-IFX antibodies,ATI)产生或对药物失去应答(lose a response,LOR)患者在用药选择上,IFX血清浓度检测有重要的指导价值.

中华鳖血清中抗体含量的研究

The concentration of serum antibody of the soft shelled turtle was measured using SRID. The concentrations of non immune serum and immune serum antibodies were about 9 623 mg/mL and 17 097 mg/mL respectively. The later was about two folds as much as the former. This showed that the level of serum antibody of turtle would increase quickly and keep higher level when it is stimulated with antigen.

反复自然流产患者甘露聚糖结合凝集素和生殖相关抗体的检测及意义

目的了解不明原因反复自然流产(RSA)和正常妊娠妇女血清中甘露聚糖结合凝集素(MBL)浓度及与5种生殖相关抗体的关系。方法用ELISA法测定RSA患者及正常早、中、晚妊娠期妇女血清中MBL的含量,同时检测RSA患者血清中抗弓形虫抗体(ATAb)、抗人巨细胞病毒抗体(HCMV-IgM)、抗精子抗体(ASAb)、抗子宫内膜抗体(EMAb)和抗心磷脂抗体(ACL)。结果RSA组(n=51)、对照组(n=55)、正常早孕(n=32)、中孕(n=34)和晚孕(n=28)妇女组的血清MBL浓度分别为1.40±0.63 mg/L,2.03±0.89 mg/L,2.47±0.85 mg/L,2.73±1.07 mg/L和3.22±1.08 mg/L。RSA组血清MBL浓度显著低于对照组(t=4.15,P<0.01)。正常妊娠妇女血清MBL浓度随妊娠时间逐渐增高,浓度显著高于对照组(P<0.05-0.01)。RSA组血清中4种生殖相关抗体(ATAb、ASA、EMAb和ACL)阳性率显著高于对照组(P<0.01-0.05)。RSA组MBL浓度<1.0 mg/L者27.5%(14/51),抗体总阳性率为85.7%(12/14)显著高于MBL浓度≥1.0 mg/L患者的抗体阳性率32.4%(12/37)(P<0.01)。结论部分RSA患者血清MBL浓度降低与免疫调理功能缺陷和感染率增加有关,这可促使发生RSA。

亚低温脑保护对重型创伤性颅脑损伤患者预后的影响

目的探讨亚低温脑保护对重型颅脑损伤患者预后的影响。方法选取我院收治的重型创伤性颅脑损伤患者资料(2013年3月~2019年12月),依照治疗方法分为实验组300例和对照组300例。对照组入院后均进行生命体征监护,如呼吸、心率、体温、血压,定期行血常规、血气分析、血电解质、肝肾功能、心肌酶谱、血糖检查等。行脑室外引流监测颅内压,当ICP>15 mmHg时,静脉给予呋塞米、甘露醇。锁骨下静脉穿刺输液维持水、电解质平衡,给予神经营养药物治疗。实验组在对照组基础上给予患者亚低温脑保护。观察、对比两组患者预后良好率、颅内压、血清抗脑抗体浓度及脑血流动力学。结果实验组预后良好率为51.00%,对照组为35.62%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组颅内压降低,实验组各时间点低于对照组(P<0.01);两组血清抗脑抗体浓度均呈上升趋势,实验组整体低于对照组(P<0.01);两组Vs、Vm呈升高趋势,PI指数呈下降趋势;两组Vs各时间点比较,差异均有统计学意义(P<0.01),Vm、PI指数治疗7 d、14 d比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论重型创伤性颅脑损伤患者采用亚低温脑保护治疗,可降低颅内压、血清抗脑抗体含量,增加脑血流量,预后良好。

用ELISA法检测血清中抗TNF-α单克隆抗体药物浓度的方法开发与验证

目的建立检测一种测定血清中抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)单克隆抗体浓度的间接酶联免疫吸附测定(ELISA)方法。方法对TNF-α包被浓度及酶标抗体种类、存放稳定性和浓度等进行考察,确定关键试验参数。考察优化后方法的专属性、精密度与回收率、标准曲线与定量下限。结果TNF-α包被浓度为400 ng·mL^(-1),选择Sigma辣根过氧化物酶标记羊抗人免疫球蛋白G,以1∶3.0×10^(5)倍进行稀释;稀释后的酶标抗体4℃保存3 d稳定性良好。同时确认了方法专属性良好,回收率为84.00%~10^(6).82%,不同浓度样品精密度的变异系数均≤10%,方法线性良好,曲线方程为y=(-8.37×10^(3)-2.37×10^(6))/[1+(x/29.80)1.06]+2.37×10^(6)(R2=0.999),定量下限:1 ng·mL^(-1),均符合要求。结论本研究建立了一种准确、可靠的ELISA法测定血清中抗TNF-α单克隆抗体药物的浓度。

人脑膜炎球菌参考血清 Men10的制备及其抗A、C、Y、W135群脑膜炎血清群荚膜多糖抗体IgG含量和体外杀菌试验滴度

目的：制备人脑膜炎球菌参考血清，对其中A、C、Y、W135血清群的抗荚膜多糖抗体IgG含量和体外杀菌试验（ serum bactericidal assay ， SBA）滴度进行定值。方法用4价A、C、Y、W135群脑膜炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人，采集免疫后的血浆进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干，得到人脑膜炎球菌参考血清Men10。在兰州生物制品研究所有限责任公司（ LIBP ）实验室，用标准检测人血清中抗脑膜炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法，以国际标准血清CDC1992为标准，对其中4个血清群抗荚膜多糖抗体IgG含量定值；以临时定值的Men10和CDC1992分别为标准检测12份美国疾病预防控制中心（ CDC）的校正血清、56份4价多糖疫苗免疫后的血清，通过比较对定值的准确性进一步验证。同时以体外杀菌试验测定针对4个血清群的SBA滴度。结果制备了4000支（0．5 ml/支）冻干人脑膜炎球菌参考血清Men10。该血清HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋体检测均阴性，残留水分含量2．3％。以Men10为标准检测的12份CDC校正血清和56份4价多糖疫苗免疫后的血清群抗荚膜多糖抗体结果，与以CDC1992为标准检测的结果均具有良好的直线相关关系（ r＝0．99，P＜0．05）；以Men10为标准检测的CDC1992的4个血清群抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较，各血清型的误差均＜10％。同时确立了Men10中各血清群的体外杀菌试验滴度。结论 LIBP成功制备了人脑膜炎球菌参考血清Men10并完成了对其中的4个血清群抗荚膜多糖抗体IgG含量的准确定值，并确定了其中各群别抗体的体外杀菌试验滴度。

双抗体夹心-酶联免疫吸附法测定家兔血清中短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的浓度及其药动学研究

目的:建立测定家兔血清中短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白(PBAP)浓度的方法,并考察其药动学特征。方法:取家兔随机分为低、高剂量组(短尾蝮蛇毒PBAP,0.4、0.8mg·kg-1)和阴性对照组(生理盐水),每组5只,耳缘静脉单次给予相应药物,给药前及给药后1、5、15、30、60、120、240、480min分别从颈总动脉取血,加入到短尾蝮蛇毒PBAP抗体包被酶标板(浓度为100μg·mL-1)中,以给药前的正常血清作为空白对照,用双抗体夹心-酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同时间点血清中短尾蝮蛇毒PBAP的浓度,并用DAS2.0软件计算其药动学参数。结果:短尾蝮蛇毒PBAP检测浓度的线性范围为0.0024～10μg·mL-(1r=0.9703),平均回收率为98.78%,平均板内变异系数为7.96%,平均板间变异系数为10.94%;低、高剂量短尾蝮蛇毒PBAP的主要药动学参数分别为t1/2α(9.553±4.668)、(9.873±1.433)min,t1/2β(201.295±66.060)、(205.798±76.834)min,cmax(0.685±0.160)、(2.333±0.478)mg·L-1,AUC0～∞(27.114±2.781)、(61.625±11.631)mg·min·L-1。结论:ELISA法准确、灵敏、特异性强,可用于短尾蝮蛇毒PBAP在家兔血清中的药动学研究。

人源抗M试剂血清的制备和应用

目的:利用南京红十字血液中心废弃抗M抗体阳性血浆制备人源抗M试剂血清,达到报废血液再利用的目的。方法:将抗M抗体阳性的血浆通过中和稀释,冻融浓缩,海藻糖-PEG浓缩等一系列方法,制备成人源化的抗M试剂血清。结果:制备的血清抗M效价可提高4倍,与市售试剂血清相比凝集强度有提高,1～2个月后制备的抗体效价基本不变。结论:利用废弃抗M抗体阳性血浆制备的人源抗M试剂血清亲和力在一定程度上高于市售血清,可适当用于日常标本检测,达到废血再利用的目的。

体外血清检测过敏性鼻炎过敏原检测研究

目的 分析体外血清检测在过敏性鼻炎患者过敏原检测中的价值。方法 筛选80例过敏性鼻炎患者为研究对象,80例患者均选自2020年4月~2021年12月通过体外血清对过敏原进行检测,对常见过敏原及特异性IgE抗体进行定量检测并分析不同年龄段患者过敏原分布情况。结果 引起过敏性鼻炎最常见的过敏原为尘螨、霉菌、狗毛、牛奶、鸡蛋白、腰果等,其中食入性过敏原多见于0-5岁人群,而吸入性过敏原多见于5-19岁人群。80例患者经体外血清检测发现同一患者存在一种过敏原者28(35.00%)例、两种过敏原者17(21.25%)例、三种过敏原者13(16.25%)例、四种过敏原者7(8.75%)例、五种过敏原者6(7.50%)例、六种过敏原者4(5.00%)例、七种过敏原者3(3.75%)例、八种过敏原者2(2.50%)例,其中IgE抗体浓度<100IU/ml者3(3.75%)例、IgE抗体浓度在100-200IU/ml者11(13.75%)例、IgE抗体浓度在200-400IU/ml者20(25.00%)例、IgE抗体浓度>100IU/ml者46(57.50%)例。结论 尘螨、霉菌、狗毛、牛奶、鸡蛋白、腰果等为过敏性鼻炎患者常见过敏原,在生活中存在过敏体质人群需加强饮食及生活管理,避免接触过敏原导致疾病反复发作。