基于原代肺癌细胞3D培养模型的建立及其药物敏感性研究

目的构建基于原代肺癌细胞的3D水凝胶培养模型并研究其在抗肿瘤药物敏感性测试中的应用。方法采用条件性重编程技术培养患者来源的肺癌细胞;利用海藻酸钠与钙离子凝胶反应原理构建海藻酸钠-透明质酸3D微球培养原代肺癌细胞;应用扫描电子显微镜观察3D微球的结构;流式细胞术检测细胞周期分布;Transwell实验考察细胞的迁移和侵袭能力;MTS法检测原代肺癌细胞经顺铂、卡铂、紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、扁塑藤素等药物处理后的细胞活力;Caspase-3活力检测试剂盒检测细胞内Caspase-3含量;Western blot实验检测细胞蛋白表达水平的变化。结果海藻酸钠-透明质酸微球内部呈均匀多孔结构,3D培养的原代肺癌细胞以细胞团形式生长。与2D培养方式相比,3D微球培养的原代肺癌细胞G0/G1期细胞阻滞增多,增殖速率变低,迁移和侵袭能力增强,肿瘤干细胞标志物表达显著提升,对抗肿瘤药物敏感性下降,且细胞抗凋亡能力增强;此外,与2D培养的细胞相比,3D微球培养的原代肺癌细胞Akt/GSK3β通路激活水平显著升高。结论3D水凝胶细胞培养能够更好地模拟体内肺癌肿瘤组织的生长特点和微环境,客观反映体内肺癌肿瘤组织对药物的反应过程,有利于更准确地体外评估抗肿瘤药物的敏感性。

人原代肺癌细胞体外长期培养及个体化药敏研究

目的应用条件性重编程细胞(Conditionally Reprogrammed Cells,CRCs)技术建立高效、稳定的人肺癌细胞体外长期培养体系,并利用该体系进行体外药敏检测,预测患者对常用化疗药物的敏感性,为肺腺癌精准化疗敏感药物的选择提供参考。方法采用胶原酶消化法将肺肿瘤组织分散成单个细胞后,用条件性培养基及3T3饲养细胞诱导培养,观察其生长情况,采用HE染色、免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞,MTS药敏试验检测顺铂、奈达铂、卡铂、长春瑞滨4种临床常用化疗药物的敏感性。结果利用CRC技术成功分离培养了14例肺癌细胞,鉴定发现细胞形态、核分裂相以及细胞标记蛋白符合肺癌细胞特征,细胞体外连续培养时间可达5个月以上,并可稳定传代至23代以上。对6例肺腺癌的药敏结果显示,6例原代肺腺癌细胞对顺铂、奈达铂敏感,但对卡铂、长春瑞滨的敏感率较低,这与临床上铂类药物作为肺腺癌一线治疗药、而长春瑞滨作为二线治疗药物相符合。结论 CRCs技术可作为一种体外长期高效培养原代肺癌细胞的方法,应用此方法培养出的原代肿瘤细胞可作为体外药敏检测模型,对肺癌的个体化治疗具有重要意义。

条件重编辑共培养技术体外培养人甲状旁腺细胞的研究

目的利用条件重编辑共培养（CRC）体系对人原代甲状旁腺细胞进行体外培养，建立具有生理功能且能够稳定生长的甲状旁腺主细胞株。方法使用放射后的成纤维细胞3T3-J2与Rho激酶抑制剂Y-27632（5×10μmol／L）构建CRC培养体系，人甲状旁腺原代细胞与之共培养，通过形态学、化学发光法检测甲状旁腺激素等指标评估人甲状旁腺细胞生长状况和生理活性。结果CRC培养体系中，原代甲状旁腺细胞体外培养时间为50～55d，有效时间窗为30-35d，持续传代2次，证实其具有激素内分泌活性。结论成功建立具有生理活性的甲状旁腺主细胞株，为甲状旁腺组织的进一步研究提供细胞基础。