同种异体带瓣管道的研究进展

根治复杂性心瓣膜病需采用心外管道,目前心外管道有人工材料、同种异体带瓣管道(VHC)及异种带瓣管道。VHC具有符合人体的抗钙化、抗感染和无需终生抗凝等生理特点,然而VHC仍存在供体短缺和无法长期保存等问题,导致其无法被大力推广,但深低温保存技术有望解决长期保存这一问题。笔者综述了VHC供体的筛选、保存方法及其临床应用的研究进展,为VHC在临床上对左、右心室流出道的重建提供参考。

同种带瓣大动脉的制备与低温保存技术的研究

本文介绍采用液氮（－１９６℃）超低温保存方法，对５０根同种带瓣大动脉（２５根主动脉，２５根肺动脉）处理后低温长期保存．并建立了一整套同种带瓣管道的处理方法，包括：取材、剥离、消毒、组织活力测试和冷藏．该材料已用于临床重建右室流出道和肺动脉纠治复杂性先心病１７例，效果良好．

新生动物同种主动脉带瓣管道移植的免疫反应与钙含量的相关性

目的 :探讨新生动物同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后免疫反应与钙含量之间关系。方法 :体重 15 0～ 2 0 0g的新生新西兰兔 2 4只作为 VAHC的供体 ,0 .9～ 1.2及 2 .1～ 2 .9kg的幼兔和成年兔各 12只为受体 ,建立新生兔的 VAHC移植模型。术后 1个月和 6个月分别取材作免疫荧光染色及钙含量测定。结果 :免疫荧光检查显示各移植组 VAHC血管壁 Ig G荧光染色结果均为阳性。半定量分析显示植入幼兔体内 1个月及成年兔 1个月和 6个月体内的阳性积分显著高于植入幼兔体内 6个月的 VAHC(P<0 .0 5 )。各移植组 VAHC血管壁的钙含量及植入幼兔体内 6个月和成年兔体内瓣膜的钙含量显著高于对照组 (P<0 .0 5 )。血管壁免疫荧光强度积分结果与钙含量呈明显的正相关 (r=0 .6 2 ,P<0 .0 5 )。结论 :新生兔的

同种带瓣大动脉重建右心室流出道

目的 应用自行采集和冷冻保存的同种带瓣大动脉 (VHC)完成先天性心脏病右心室流出道的重建 ,并观察其疗效及存在的问题。 方法 用 VHC材料治疗先天性心脏病 95例 ,90例手术根治 ,5例行 VHC右心室流出道与肺动脉连接姑息手术。 结果 院内死亡 13例 ;术后随访 6 8例 ,死亡 2例 ,均为感染。 6 6例长期生存者中 2 5例胸部 X线片示 VHC有钙化 ,多为主动脉材料 ,仅 5例有轻中度压力阶差 (35～ 6 0 mm Hg)。 结论 VHC可广泛用于治疗复杂先天性心脏病。程序降温、超低温保存和两步化冻是 VHC使用质量的保证。 VHC的长期通畅比合成管道好 ,随植入时间延长钙化率增加 ,肺动脉 VHC优于主动脉。有肺动脉高压者宜尽早手术。为了预防 VHC植入后感染 ,应重视、改进其收集和保存的方法。

不同处理方法对同种带瓣主动脉组织结构及机械抗张强度的影响

对同种带瓣主动脉的取材、处理、保存进行了研究，建立了梯度降温的计算机程序，通过组织学及超微结构观察，组织机械抗张强度测试，证实抗生素灭菌，深低温保存方法可以较好地保持同种移植物的生理特性，保持纤维组织及成纤维细胞的结构完整，保持组织机械抗张强度。

有活性的人类同种带瓣管道的制备和保存

目的 :建立长期有效的有活性的人类同种带瓣管道的制备及保存方法。方法:无菌条件下取健康成年、脑死亡6h以内志愿损献者的心脏 ,修剪成同种带瓣主、肺动脉管道 ,37℃灭菌12h ,程控降温至 -60℃ ,取出后放入液氮罐中保存。应用光镜、电镜及流式细胞仪比较新鲜和液氮保存后的同种带瓣管道在组织结构、超微结构及细胞活性之间的差异。结果 :程控降温后液氮保存的同种带瓣管道与新鲜标本在组织结构、超微结构及细胞活性等方面无明显区别。结论 :无菌条件下制备的同种带瓣管道经程控降温、液氮保存后结构完整 ,具有良好的细胞活性 。

同种带瓣管道在儿童先心病治疗中的应用

目的 :报告应用同种带瓣管道 (VHC)在儿童先心病治疗中的经验。方法 :全组 12例患儿男 7例 ,女 5例。平均年龄 7.5 (2 .2～ 13)岁 ,平均体重 2 1(12 .5～ 32 )kg。病种包括右室双出口 5例 ,共同动脉干 2例 ,矫正性大动脉转位合并室缺 2例 ,完全性大动脉转位 1例 ,法乐四联症合并肺动脉闭锁 1例 ,主动脉瓣关闭不全 1例。主动脉VHC应用 2例 ,肺动脉VHC应用 10例 ,均用于右室流出道重建。结果 :本组病例无手术死亡。平均随访 9.5 (3～ 19)个月 ,死亡 1例。存活患儿心功能明显改善 ,超声心动图检查显示吻合口无狭窄 ,VHC管腔通畅 ,瓣膜无明显返流。结论 :本组结果表明VHC是儿童先心病右室流出道重建的理想材料。

同种带瓣大动脉灭菌实验研究

目的探讨不同抗生素水浴灭菌方法对同种带瓣大动脉组织活性的影响。方法取带瓣大动脉30只,随机分为A、B、C实验组,每组10只,并从中随机选择10只剪取部分内膜组织作为对照组(D组),实验组用不同抗生素水浴灭菌方法处理并做细菌培养。各组测定葡萄糖代谢率和台盼蓝拒染率。结果实验组细菌培养无阳性且葡萄糖代谢率和台盼蓝拒染率均低于对照组(P<0.05),B、C两组葡萄糖代谢率和台盼蓝拒染率均高于A组(P<0.05),而B、C两组间葡萄糖代谢率和台盼蓝据染率差别无显著性(P>0.05)。结论同种带瓣大动脉在抗生素溶液中37℃水浴6h可达到满意的灭菌效果且对组织细胞活性损伤较轻。

低温保存同种异体带瓣管道在永存动脉干手术中的应用

收治永存动脉干7例,其中5例使用了同种异体带瓣管道(CVH),4例主动脉带瓣管道,1例肺动脉带瓣管道。CVH 材料经抗生素消毒,防冻超低温(-154℃)保存,保存期<1年。无住院死亡,CVH 组织培养以及术后血培养均阴性,术后肺动脉高压明显改善,发生心律失常1例。平均随访时间2.2年,1例术后2年 CVH管壁出现钙化,瓣膜有增厚,但无管道狭窄。5例均无血栓形成。心功能明显改善,无再手术病例。结果表明:CVH 具有使用方便、瓣膜性能好、耐用、无需抗凝等特点,很适用于小儿外科手术。永存动脉干应用 CVH 重建右室流出道,其死亡率和再手术率低。

生物组织材料在复杂先心病矫治中的应用

目的 :介绍用同种带瓣管道矫治复杂先心的体会。方法 :自 1996年 5月至 2 0 0 2年 12月用同种带瓣管道治疗复杂先心 2 4例 ,其中男 18例 ,女 6例 ,年龄 2～ 19岁 ,Fallot四联症 17例 ,右室双出口 3例 ,矫正型大动脉转位 4例 ,手术均在全麻低温体外循环下进行 ,共用同种主动脉管道 15例 ,肺动脉管道 9例 ,Fallot四联症和右室双出口均用同种带瓣管道作跨瓣环补片 ,保持管道动脉瓣和病人肺动脉瓣在同一平面上 ,矫正型大动脉转位作左室到主肺动脉同种主动脉反“C”字管道连接 ,管道近端接一段长约 2 5cm预凝人造血管。结果 :术后死亡 2例 ,自动出院 1例 ,1例病人随访过程中出现慢性心功能不全 ,其余病人均健康生存 ,心功能Ⅰ级 18例 ,Ⅱ级 2例。结论 :用同种带瓣管道矫治复杂先心有较好的效果 ,具有血流动力学好、毋需抗凝、抗感染效果好。

新生动物同种主动脉带瓣管道移植的组织形态学观察

目的 :观察新生动物同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后的组织形态学变化。方法 :新生兔为供体 ,其VAHC抗生素灭菌后经腹膜外植入幼兔及成年兔的腹主动脉 ,术后 1个月和 6个月取材作组织形态学观察。结果 :移植的VAHC搏动良好 ,内膜光滑 ,无血栓。瓣膜无皱缩 ,交界无粘连。光镜下血管壁内膜和中层有不同程度的增厚 ,可见炎性细胞浸润。电镜下的超微结构均有所改变 ,以植入成年兔体内 6个月的VAHC最为明显 ,主要表现为血管壁平滑肌细胞增生 ,胞内细胞器少 ,内质网明显扩张 ,甚至呈空泡样改变 ,可见淋巴细胞和单核细胞浸润及钙化斑。瓣膜胶原纤维排列散乱 ,部分成纤维细胞内质网扩张 ,胞浆内有脂褐素沉积。结论 :本实验表明 ,新生动物的VAHC移植后的组织形态呈较明显的慢性排异反应征象。

同种带瓣外通道治疗合并肺动脉高压的三尖瓣闭锁

三尖瓣闭锁合并肺动脉高压是一种少见的先天性复杂心脏畸形。本文报告自１９９２年４月至１９９３年７月期间收治的３例此病病儿，均为男性，年龄分别为３岁、３岁、６岁。术前均做彩色多普勒超声心动图和右心导管，以及左右室造影。测得肺动脉平均压分别为５．６ｋＰａ（４３ｍｍＨｇ）、７．６ｋＰａ（５７ｍｍＨｇ）、６．０ｋＰａ（４５ｍｍＨｇ），３例均合并房、室间隔缺损。均用右心房─右心室同种带瓣外通道施行矫治术。病儿一切顺利，无一例死亡。

新生动物同种主动脉带瓣管道移植物α-actin和PCNA的免疫组织化学研究

目的 应用免疫组织化学方法观察新生动物的同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后平滑肌肌动蛋白 (α- actin)和增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的变化 .方法 体质量 15 0～2 0 0 g的新西兰兔 2 4只作为 VAHC的供体 ,0 .9～ 1.2及2 .1～ 2 .9kg的幼兔和成年兔各 12只为受体 .建立新生兔的VAHC移植模型 ,术后 1和 6 mo分别取材作组织学检查和免疫组织化学染色 ,观察 VAHC的组织结构、α- actin及 PCNA阳性表达情况并作计算机图像分析 .结果 组织学检查显示VAHC血管壁三层结构存在 ,内膜及中层均增厚 ,管壁有少量单核细胞及淋巴细胞浸润 ,植入成年兔体内 6 mo的变化最为明显 .免疫组化染色 α- actin在各组 VAHC血管壁中层均呈阳性表达 .与对照组相比 , ～ 组血管壁中层 SMC, , 组内膜及瓣膜内皮细胞 (EC) PCNA阳性指数明显增高 (P<0 .0 5 ) , 组尤为显著 (P<0 .0 1) .图像分析结果表明 , , 组 α- actin的灰度值明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) , ～ 组血管壁及瓣膜 PCNA阳性细胞的灰度值低于对照组 (P <0 .0 5 ) .结论 新生兔 VAHC植入幼兔及成年兔体内后的变化呈较明显的慢性排异反应征象 .

3种血管替代物植入人体后的变化及比较分析

目的:了解临床上3种常用血管替代物人体内移植后的变化。方法:临床获取因治疗需要而取出的先天性心脏病患儿早期植入的Gore-Tex管道、牛颈静脉管道和同种带瓣管道标本,通过对大体标本观察,组织学切片HE染色、Masson染色、Verhoeff弹性纤维染色以及特异性细胞标记物(α-SMA、calponin、VE-cadherin)免疫组织化学染色,评价移植物植入人体后的变化。结果:Gore-Tex管道移植后原管道未降解,管道壁中无细胞长入,管腔内形成假膜,其中假膜富含胶原纤维,无弹性纤维,散在α-SMA+细胞和calponin+细胞。牛颈静脉管道移植后,原管道未降解,管道壁中无细胞长入,管腔内可见假膜,假膜较厚,富含胶原纤维,但存在特殊排列的弹性纤维,弹性纤维所在区域聚集α-SMA+细胞和calponin+细胞。同种带瓣管道移植后,管道近乎全层钙化,仅残留浅薄的内膜,内膜表面光滑,无假膜形成,可见VE-cadherin+内皮细胞层及残存的平滑肌细胞。结论:Gore-Tex管道和牛颈静脉管道难以降解,且不具备生长性,远期易出现管道狭窄;同种带瓣管道移植后无假膜形成,但易出现钙化,限制了管道的使用寿命。

脱除人主动脉瓣膜细胞的研究

目的探讨人主动脉瓣叶去细胞后作为组织工程心脏瓣膜支架的可行性。方法经胰酶-EDTA、表面活性剂和核酸酶处理,去除人主动脉瓣叶的细胞成分,测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性。结果人主动脉瓣去细胞后,经光镜和电镜观察,脱细胞后血管壁无细胞残留,胶原纤维和弹性纤维保留完整,形态学无明显变化;生物学性能也没有明显改变。结论去细胞效果良好,初步制造了同种主动脉血管壁脱细胞基质材料,为构建同种带瓣管道提供了较合适的材料。

新生兔同种主动脉带瓣管道移植的形态学研究

目的 :观察新生动物的同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后的形态学变化。方法 :以体重 15 0～ 2 0 0 g的新西兰兔 2 4只作为 VAHC的供体 ,0 .9～ 1.2 kg的幼兔和 2 .1～ 2 .9kg的成年兔各 12只为受体 ,建立新生兔的 VAHC移植模型。术后 1个月和 6个月分别取材作大体形态测量及组织学观察。结果 :发现植入的 VAHC内膜光滑 ,无血栓 ;与植入时相比 ,各组 VAHC血管壁厚度及植入幼兔体内 6个月 VAHC长度和管径明显增加 (P<0 .0 5 ) ;与未植入的新生兔 VAHC相比 ,植入幼兔体内 6个月的 VAHC瓣叶高度、游离缘长度均增加 (P<0 .0 5 )。组织学检查显示 VAHC血管壁存在三层结构 ,内膜及中层轻度增厚 ,管壁有少量单核细胞及淋巴细胞浸润 ,植入成年兔体内 6个月的变化最为明显。结论 :新生兔的 VAHC植入幼兔体内后其血管的直径和长度、瓣叶的高度和游离缘长度可随幼兔的发育而增加 ,提示在临床上应用小的 VAHC是可行的。

同种带瓣主动脉和肺动脉移植在复杂先心病治疗中的应用

目的 研究同种带瓣主、肺动脉移植应用于复杂性先天性心脏病矫治的疗效。方法 制备同种带瓣管道 89根 (主动脉 5 5根、肺动脉 3 4根 ) ,临床应用 3 1例 ,其中主、肺动脉单瓣作右室流出道跨瓣补片术 14例 ,Rastelli手术 11例 ,右心室 -肺动脉连接 (RV -PA) 3例 ,肺动脉瓣置换1例 ,Ross手术 1例 ,改良Fantan手术 1例。结果 主、肺动脉单瓣作右室流出道跨瓣补片组 14例 ,1例术后 3d死于右心功能不全 ,存活 13例 ,随访 ( 4 3± 3 .2 )个月 ,超声心动图检查显示移植后瓣膜启闭功能良好 ,无增厚及粘连。复杂性先天心脏病矫治组 17例 ,死亡 7例 ,存活 10例 ,随访( 3 4.3± 6.3 9)个月 ,管道血流通过顺畅 ,管壁无变薄、钙化。结论 ①同种带瓣管道具有管壁弹性好 ,易于缝合 ,术后排斥反应少等优点 ,可广泛应用于复杂性先天性心脏病矫治术 ,左、右室流出道的重建 ;②同种带瓣管道补片既能加宽右室流出道 ,且有良好抗返流作用 ,有利于术后患儿心功能恢复 。

^(60)Co γ照射加深低温保存对大鼠同种带瓣主肺动脉免疫原性的作用

目的本实验应用60Coγ射线照射加液氮深低温保存大鼠同种带瓣主肺动脉(Valved pulmonary homograftcon-duit,VPHC),并建立大鼠VPHC颈总动脉移植模型,观察不同照射剂量对同种带瓣主肺动脉免疫原性的作用,寻找合适照射剂量,为进一步基础研究及临床应用提供理论依据。方法1月龄雌性Wistar大鼠50只,作为供体,成年雄性SD大鼠50只,作为受体,随机分为实验对照组(单纯深低温保存组)、300Gy照射组、600Gy照射组、900Gy照射组和1200Gy照射组,另取10只SD大鼠行颈总动脉切断吻合术,作为空白对照组。应用流式细胞术对VPHC移植术后1周、2周、3周受体鼠外周血行CD4+T细胞及CD8+T细胞检测。结果600Gy照射组VPHC移植术后1周、2周、3周CD4+T细胞、CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+与空白对照组相比无显著性差异(P>0.05),与实验对照组相比差异显著(P<0.01)。结论应用600Gy60Coγ射线对VPHC进行照射在保持VPHC活性的同时明显降低了其免疫原性。

羊抗钙化预处理的同种带瓣大血管作右心室流出道重建

目的探讨乙醇和氯化铝溶液浸泡作抗钙化预处理,能否降低同种带瓣主动脉(CVH)的钙化。方法 18只幼羊,分别植入经乙醇和氯化铝溶液浸泡作抗钙化预处理(实验组)和用生理盐水浸泡(对照组)的CVH,作右心室流出道移植重建。移植后18个月(1年半),处死动物,取出CVH,作肉眼、光镜(HE染色及VonKossa法染色)观察,原子吸收火焰法测定组织钙含量。处死前均作心脏彩超检查(测定肺动脉瓣膜直径、平均跨瓣压差、跨瓣峰压、心排量及心排指数)。结果共完成CVH植入18例。其中,实验组1例术中吻合口出血死亡,1例术后16天死于胸腔内感染;对照组2例分别于随访9、12个月时死亡(尸体解剖见CVH瓣膜均钙化严重、明显狭窄),其余14例均成活到18个月。心脏超声:实验组CVH瓣膜柔软,光滑,无增厚及钙化,活动正常,跨瓣压差低(接近正常)。对照组CVH瓣膜增厚及钙化,管壁亦有钙化灶,瓣膜轻、中、重度返流及狭窄,跨瓣压差增高。两组均未见赘生物及血栓形成。CVH取出后见:实验组管道质地柔软,内膜光滑。瓣膜质地纤细,无退行性或钙化改变;对照组CVH管壁多处钙化,瓣膜不均匀增厚、钙化。Von Kossa染色见:实验组CVH管壁无黑色钙盐,对照组管壁及瓣膜有黑色钙盐。光镜:实验组见血管中层纤维细胞形态完整,细胞核无裂解和浓缩,胞浆均匀,平滑肌细胞呈梭状,排列整齐,结构完整,瓣膜细胞结构清楚;对照组血管中层纤维细胞及平滑肌细胞排列疏松,纤维结构有断裂,瓣膜细胞有少许呈死后自溶,主动脉管壁及瓣膜可见较多钙化灶。与实验组比较,对照组主动脉壁及瓣膜的钙含量均明显增加。实验组带瓣血管血流动力学明显优于对照组。结论以乙醇和氯化铝溶液浸泡作抗钙化预处理CVH,可降低其钙化,作右心室流出道重建,可获得更好的血流动力学效果,有可能成为新的CVH材料。

液氮深低温保存同种带瓣血管的临床应用

目的报告应用液氮深低温保存的同种带瓣血管(valved homograft conduit,VHC)纠治复杂心脏畸形的经验。方法患者男27例,女19例,年龄1.9～31(9.5±5.1)岁,体质量10～64(29.5±13.2)kg。病种包括右室双出口15例,矫正性大动脉转位9例,共同动脉干7例,肺动脉闭锁5例,法乐氏四联症4例,完全性大动脉转位3例,先天性主动脉瓣关闭不全2例,法乐氏四联症术后肺动脉瓣重度关闭不全1例。合并畸形包括肺动脉狭窄、房间隔缺损、动脉导管未闭、多发室间隔缺损等。手术均在全麻低温体外循环下进行。结果无手术死亡。早期死亡2例,分别为术后低心排综合症和呼吸道出血。存活44例,随访(32/44)3～96(30±19.5)月,死亡2例,1例右室双出口患者术后26个月死于感染性心内膜炎,另1例为矫正性血管转位患者术后8个月死亡,死因不明。其余30例患者心功能明显改善,超声心动图检查显示吻合口无狭窄,VHC管腔通畅,瓣膜无明显返流。结论液氮深低温保存的VHC是理想的人工材料,用于纠治复杂心脏畸形可获得较好的治疗效果。