激光扫描共聚焦显微镜研究储层孔隙结构

这是一项首次应用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)的激光荧光技术于油气储层的孔隙结构研究。供LSCM用的样品 ,用环氧树脂加入荧光剂后 ,经加压灌注 ,磨制成岩石薄片 ,在LSCM显微镜下观察孔喉的分布 ,可以测量面孔率 ,并可标出需要测量的每个孔喉的大小以及观察孔喉形状及分布状况。该法的优点 :1.可直接测量和观察到 2 μm左右大小的孔喉。 2 .在LSCM显微镜下可区分孔隙空间中的充填粘土杂基等 ,因此面孔率的测定较一般镜下统计和图像分析更为精确 ,因粘土矿物由于吸附染色剂后在颜色或灰度上有的不易区分。 3.岩石薄片中的微裂缝 ,在LSCM显微镜下可以更清楚地观察到。

用共聚焦激光扫描显微镜观测GFP标记的内生固氮菌Klebsiella oxytoca SA2侵染水稻根

用高效绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)突变体EGFPmut2的基因标记内生固氮菌———产酸克雷伯氏菌 (Klebsiellaoxytoca (Fl櫣ｇｇｅ)Lautrop)SA2 ,用标记菌接种限菌培养条件下生长的水稻 (OryzasativaL .)幼苗 ,在接种后 1、2、4、8、12、16和 2 1d ,用共聚焦激光扫描显微镜对水稻鲜根进行光学切片 ,显示了标记菌从水稻根成熟区表面向根内入侵的过程。定殖在根表面的标记菌主要从侧根伸出的位置侵入侧根皮层 ,从邻近发生侧根的位置进入内皮层和维管柱。SA2还能从初生根成熟区无侧根伸出的位置侵入皮层向维管柱迁移。SA2入侵水稻根引发了水稻根局部的过敏反应以阻滞细菌进一步入侵 ,表现为侵入根内的细菌周围的根细胞细胞壁变厚 ,在蓝光下发出很强的黄绿荧光。

荧光原位杂交技术和流式细胞仪在菌斑中致龋性变形链球菌定量检测中的应用

目的：建立快速定量检测菌斑中主要致龋菌变形链球菌的方法，为龋齿活跃性评估提供参考数据。方法：收集无龋（caries free，CF）和高龋（caries susceptible，CS）儿童牙菌斑各15例，将不同荧光素标记的寡核苷酸探针：细菌通用探针和变形链球菌特异性探针进行荧光原位杂交，结合流式细胞仪检测菌斑中变形链球菌所占的比例。结果：在无龋儿童菌斑中，变形链球菌在总菌中所占比例数是1．24％～3．4％（2．25±0．71），而在高龋儿童菌斑中比例为5．04％-9．7％（7．37±1．34），两组比较有着明显的统计学差异（P〈0．01）。结论：流式细胞仪结合荧光原位杂交技术，可作为一种细菌定量检测方法应用于致龋性变形链球菌的定量分析中。

利用Fura-2/AM荧光探针法和LCSM法研究受磁场处理S.aureus细胞Ca^(2+)的跨膜行为

研究受脉冲磁场处理金黄色葡萄球菌(S.aureus)细胞Ca2+的跨膜行为,为此研究了表征S.aureus胞内Ca2+浓度变化Fura-2/AM荧光探针检测法,并检测了不同脉冲数下经脉冲磁场处理后S.aureus细胞荧光强度的变化,采用激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)观察了经脉冲磁场处理前后S.aureus胞内Ca2+浓度的变化。研究结果表明,Fura-2/AM可成功的负载于S.aureus中,可以应用于S.aureus胞内游离钙离子浓度变化的测定。经脉冲磁场处理后,S.aureus胞内钙离子浓度显著上升,且与活菌数的减少高度相关,相关度达到-0.989 15;胞内光点显著增多,光点荧光强度明显增大,说明大量胞外钙离子跨膜进入胞内。因此,可以判断微生物细胞膜通透性的改变和胞内Ca2+浓度的上升是高强度脉冲磁场具有杀菌作用的重要原因。

应用共聚焦激光扫描显微镜对脑脊液淋巴白血病细胞线粒体的研究

目的通过共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)对脑脊液淋巴白血病细胞线粒体进行立体、动态、定量研究。方法将所观察的脑脊液细胞分为正常淋巴细胞组、急性淋巴白血病细胞组、鞘膜内注射治疗后急性淋巴白血病细胞组。以线粒体荧光探针MitotrackerGreenFM标记后,得到线粒体的断层扫描图像、荧光强度地形立体分布图定量测量线粒体的荧光强度值。结果急性淋巴白血病细胞(357.13+60.99)与正常淋巴细胞(269.38+56.11)、鞘膜内注射治疗后淋巴白血病细胞(317.41+57.57)相比,平均荧光值有非常显著性差异(P<0.01),线粒体空间立体分布有明显差别。结论采用CLSM对中枢神经系统淋巴白血病的诊断、鉴别诊断、细胞分化程度和功能状态判断有一定意义。

针刺血清对培养海马神经元内质网活性的上调作用

目的:通过采用D-273内质网荧光分子探针来观察针刺血清调节内质网活性的作用,从而探讨针刺作用的细胞分子水平机理。方法:选用原代培养的9～11天的新生SD大鼠海马细胞,应用激光共聚焦显微镜动态扫描观察加入正常大鼠血清和电针"百会"、"足三里"、"曲池"、"三阴交"2周后的血清对培养的正常和模拟缺血缺氧海马神经元内质网活性的影响。结果:加入正常血清后对照和模型组海马神经元内质网荧光值均下降,而加入针刺血清后下降的荧光强度变化值减小。结论:针刺血清阻抑了神经元内质网活性的下降,显示针刺血清可能有提高海马神经元的内质网活性效应。

茶多酚对高糖条件下大鼠晶状体上皮细胞线粒体活性氧的影响

目的:探讨茶多酚对高糖条件下大鼠晶状体上皮细胞线粒体活性氧的影响。方法:体外培养大鼠晶状体上皮细胞,加入不同浓度的葡萄糖,加入不同浓度茶多酚进行干预,共聚焦显微镜检测各条件下大鼠晶状体上皮细胞线粒体活性氧量的变化,分析高糖及茶多酚干预对细胞线粒体活性氧表达的影响。结果:培养基中葡萄糖两种浓度(L1和L2组),大鼠晶状体上皮细胞(L)MTR、DCF荧光强度/μm2细胞面积L1组L2组比较,P<0.05。在30mmol/L葡萄糖浓度培养基中加入0.1μmol/L和0.3μmol/L浓度的茶多酚,大鼠晶状体上皮细胞死亡率CDR(%)及线粒体膜电位MMP(FI)L3组与L4组比较,P>0.05。L2组L3组及L2组与L4组比较P<0.05。结论:高糖条件下培养的大鼠晶状体上皮细胞线粒体活性氧产生增多,而应用茶多酚干预后细胞线粒体活性氧产生减少,细胞死亡率降低。

梨自花及异花授粉对其花柱自发荧光的影响

利用激光共聚焦显微技术研究了砂梨 (PyrusserotinaRehd .)品种‘丰水’自花授粉和异花(‘二十世纪’)授粉 16h后花柱自发荧光的分布规律。发现未授粉花柱整体的自发荧光比较弱 ,但从柱头端向子房端花柱自发荧光呈上升趋势 ;异花授粉和自花授粉后花柱整体的自发荧光都有所增加 ;授粉后自发荧光变化最大的部位在柱头区域 ;自花授粉后 ,在柱头及距柱头 0～ 4 0 0 μm范围内荧光值较高 ,其他区域的荧光值相近 ;而异花授粉后在花柱的中部 (距柱头 15 0 0～ 2 0 5 0 μm范围内 )荧光值最低 ;自花授粉后自发荧光除柱头以外主要分布在花柱的边缘区域 ;异花授粉后自发荧光在花柱上半部的分布情况与自花授粉类似 ,下半部分布相对均匀。

甲基对硫磷降解菌DLLBR在青菜及根际土壤中的定殖研究

将 GFP 基因标记的甲基对硫磷降解菌 DLLBR 接入 100 ml LB 培养基,过夜培养达到 1010cfu/ml,浇灌到盆钵试验的 800 g 土壤中,20 天后用激光共聚焦显微镜检测其在小青菜植株根部和植株内的定殖及分布。结果表明标记菌株能够在植株根圈较好地定殖,也能在植株内定殖。30 天后将植株各段研磨破碎,涂布 LB 平板计数发光菌落数,在根内的定殖数为 104cfu/g 根,在茎内的定殖数为 102cfu/g 茎。结果还发现与不接菌的对照相比,处理促进了植株内细菌群落结构的变化,尤其是芽孢杆菌的种类和数量明显增加。接菌 45 天后通过土壤计数检测发现,标记菌株在土壤中的存活力很高,能达到 106cfu/g 土,同时也发现与对照相比,接菌的土壤细菌群落结构明显发生了变化,细菌种类变化不大,但芽孢杆菌的数量明显增加。

钙荧光探剂的研究及其在生命科学中的应用

钙荧光探剂测量活细胞胞浆游离Ｃａ２＋浓度的方法在钙研究中已成为一种越来越重要的技术。特别是由于新的一代荧光探剂的合成和激光共聚焦显微镜的发展，使其应用更加广泛。由于国内使用这种技术的实验室逐渐增多，本文将系统介绍钙荧光探剂的发展、测量原理和方法、新的常用钙荧光探剂的比较及其在生命科学中的应用。

激光免疫测定拉伸应变和加载时间对人牙周膜成纤维细胞形态和骨架的影响

通过体外人工培养人牙周膜成纤维细胞 ,对其施加不同时间不同值的机械拉伸应力应变 ,用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光技术观察其结构变化情况 ,寻求应力应变和时间与细胞形态、骨架的关系。结果发现在应变值为 0、0 .8%、12 %、16 %各组 ,细胞和细胞核投影面积与加力时间和应变值呈正比 ;细胞骨架随着应变值的增加和加力时间的延长而逐渐增粗、密度增加 ,排列更有规律 ;在应变值 2 0 %组 ,细胞和细胞核投影面积随着加力时间的增加而逐渐减少 ,细胞骨架结构变得模糊和紊乱 ,说明在机械拉伸应力应变作用下 ,人牙周膜成纤维细胞的形态和骨架发生了规律的改变。

荧光光漂白恢复技术在检测膀胱平滑肌细胞间通讯功能中的应用

目的 探讨膀胱平滑肌细胞间通讯的功能变化。方法 利用荧光光漂白恢复 (FRAP)技术检测膀胱平滑肌细胞GJIC功能。结果 在相同的时间内 ,对实验组和对照组膀胱平滑肌细胞漂白后平均荧光恢复率相比较 ,实验组显著高于对照组 (P <0 0 5 )。

激光扫描共聚焦显微镜荧光探针的选择和应用

激光扫描共聚焦显微镜是检测生物荧光信号的最新技术手段。不仅广泛用于荧光定性、定量测量，还可用于活细胞动态荧光监测、组织细胞断层扫描、三维图象重建、共聚焦图象分析、荧光光漂白恢复、激光显微切割手术等。本文拟就激光扫描共聚焦显微镜常用的检测内容及其相关荧光探针的选择和应用做一简单的介绍。

激光扫描共聚焦显微镜的原理及其在植物学中的应用概况

激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)技术是先进的分子和细胞生物学研究技术。LSCM具有高分辨率,可以实现无损伤连续光学切片,对活体或固定的组织细胞进行定性定量检测和定时定位分析。为进一步了解并应用LSCM技术,对LSCM的基本原理及LSCM技术在植物学研究中的应用及展望进行了综述。

金纳米棒标记HepG2人肝癌细胞的荧光成像及其AFM探测

金纳米棒具有独特的光学性质,在生物医学领域有着广泛而重要的应用前景。本文制备了长径比为8:1的金纳米棒,其在480 nm波长激发下,在560 nm和707 nm波长处有两个荧光发射峰。基于金纳米棒的荧光性质,将其标记于HepG2人肝癌细胞表面,利用激光扫描共聚焦显微镜对标记后的细胞进行荧光成像。在488 nm激发下,获得了绿色和红色两种颜色的荧光图像,并进一步用高分辨率的原子力显微镜探测了GNRs标记后细胞形貌及机械性质的变化。

激光共聚焦显微镜观察铜绿假单胞菌生物膜的形成

目的采用激光共聚焦显微镜技术观察铜绿假单胞菌形成生物膜,进一步揭示了铜绿假单胞菌生物膜形成过程。方法使用盖玻片生物膜培养法,培养铜绿假单胞菌的生物膜,在培养2、4、8、12、16、24、48和72h后取出盖玻片,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的刀豆蛋白A(FITC-ConA)和碘化吡啶(PI)双重免疫荧光技术染色,用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察铜绿假单胞菌生物膜形成过程与特点。结果获得生物膜形成过程不同时间点的CLSM图像,观察到铜绿假单胞菌一般在24h后开始逐渐形成生物膜,在72h形成稳定的生物膜。结论双重免疫荧光染色技术和CLSM是观察细菌生物膜形成过程的有效手段。

激光扫描共聚焦显微镜观察胰蛋白酶对肺上皮细胞游离钙离子的影响

目的:研究PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO、胰蛋白酶及其抑制剂对H292肺上皮细胞[Ca2+]i的影响。方法:应用Fluo-3/AM荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测不同因素处理的H292肺上皮细胞[Ca2+]i。结果:胰蛋白酶、SLIGKVt、c-LIGRLO均能引发H292细胞[Ca2+]i的增加,平均荧光强度分别比加入药物前增加267%,60%和37%。胰蛋白酶抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)和α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加。结论:PAR-2可以介导H292肺上皮细胞[Ca2+]i的释放增加,胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加。

双光子共聚焦显微镜在植物学研究中获取高质量图像的应用

介绍了双光子共聚焦显微镜的基本原理和特点,从仪器操作、参数调节等方面记叙了利用双光子共聚焦显微镜FV1000 MPE在植物学研究中如何获取高质量图像的问题,旨在为该仪器的使用者与管理者提供参考,使之更好地服务于的教学与科研研究。

激光扫描共聚焦显微镜原位检测核酸及蛋白质的实验教学设计

为实现实验教学与科研工作的紧密结合,该教学设计采用激光扫描共聚焦显微镜在细胞原位检测核酸和绿色荧光蛋白,分析融合蛋白的亚细胞定位。通过2个经典的检测方案,使学生更好地理解和掌握激光扫描共聚焦显微镜的检测原理、操作步骤及结果分析方法。

激光扫描共聚焦显微镜在生物科学研究中的应用

介绍了激光扫描共聚焦显微镜的工作原理和特点,在此基础上,综述了激光扫描共聚焦显微镜在生物科学研究中的应用和应用技巧。