鸡结膜结合淋巴组织(CALT)对新城疫疫苗点眼免疫应答

１８０只１日龄公雏平均分成Ａ、Ｂ、Ｃ三组。Ａ组于１日龄手术切除下眼睑结膜。Ａ、Ｂ两组于１０日龄和２０日龄用鸡新城疫Ⅱ系（ＮＤⅡ）弱毒疫苗点眼首免和二免，Ｃ组为对照组。定期收集泪液、血清、ＣＡＬＴ和哈德氏腺，比较观察其抗体ＨＩ效价消长规律与免疫组织细胞变化特点。结果，Ｃ组非免鸡泪液ＨＩ效价比血清ＨＩ效价稍低，１０至３４日龄均呈直线下降，３４至４８日龄维持在极低的水平上（１．２～２Ｌｏｇ２）。Ｂ组点眼免疫鸡，血清母源抗体ＨＩ效价下降速率减缓，并产生高滴度抗体ＨＩ效价。但泪液抗体ＨＩ效价比血清抗体ＨＩ效价高１～５Ｌｏｇ２，并维持在８～１２Ｌｏｇ２。尤其在血清抗体ＨＩ效价达到峰值之前，差异极显著（Ｐ＜０．０１）。出现上升和达到峰值的时间分别比血清早６ｄ和１４ｄ。Ａ组ＣＡＬＴ缺失鸡点眼免疫后，泪液母源抗体ＨＩ效价迅速下降，产生的泪液ＨＩ效价比正常免疫鸡低１～２Ｌｏｇ２，其哈氏腺的免疫细胞也比Ｂ组少。实验结果说明点眼免疫可产生良好的局部和全身免疫反应，ＣＡＬＴ是眼区重要的免疫应答组织之一，协同哈德氏腺完成独特的局部免疫功能。

免疫途径对雏鸡分泌型免疫球蛋白A细胞分布的影响

通过饮水、滴鼻和肌肉注射用鸡新城疫弱毒苗免疫雏鸡，以葡萄球菌Ａ蛋白－辣根过氧化酶（ＳＰＡ－ＨＲＰ）和兔抗鸡分泌型免疫球蛋白Ａ（ＳＩｇＡ）间接组化染色，显示消化道相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）和呼吸道相关淋巴组织（ＲＡＬＴ）中ＳＩｇＡ细胞的生成和分布。结果表明：滴鼻和饮水免疫组雏鸡ＧＡＬＴ和ＲＡＬＴ中产生ＳＩｇＡ细胞较早、较多，并于首免后２４ｄ和３０ｄ达到最高峰；肌肉注射组雏鸡ＳＩｇＡ细胞在各相应部位仅零星存在，其数量在整个免疫期间变化不显著。作者还对３种免疫途径与粘膜免疫过程中ＳＩｇＡ细胞的产生、分布。

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗的免疫反应Ⅰ.局部与循环抗体检测

实验将 60只 1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C 3组。A组为CALT缺失组 ,B组为免疫组 ,C组为非免疫对照组。A组于 1日龄手术切除下眼睑结膜 ,A、B两组于 1 2日龄结扎鼻泪管后进行点眼免疫接种新城疫克隆 30疫苗。2 3日龄时 ,收集A、B、C各实验组鸡的血清和泪液 ,做红细胞凝集抑制试验 (HI试验 )、酶联免疫吸附试验(ELISA)。比较观察各实验组雏鸡血清和泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量的变化特点。结果 ,1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失 ,CALT缺失鸡点眼免疫后 ,泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量比免疫组雏鸡低。但对雏鸡的抗体生成的规律并不产影响。故实验证实了CALT对眼区局部抗体的产生及其种类有重要的调控作用 。

新城疫疫苗点眼对雏鸡结膜结合淋巴组织的影响

用鸡新城疫Ⅱ（ＮＤⅡ）系弱毒疫苗点眼免疫１日龄雏鸡。定期收集免疫组和对照组雏鸡泪液、血清做微量血细胞凝集抑制（ＨＩ）试验。同时，采取雏鸡下眼睑做宏观美兰和ＨＥ染色。疫苗点眼后，经眼观和组织学观察，免疫组雏鸡比对照组雏鸡的结膜结合淋巴组织（Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｌｙｍｐｈｏｉｄｔｉｓｓｕｅ．ＣＡＬＴ）发生早、生长快、淋巴细胞数量多，此结果证明抗原刺激能促进ＣＡＬＴ的发育成熟。通过对免疫组雏鸡泪痕、血清和对照组泪液、血清ＨＩ效价的分析，雏鸡眼区局部免疫反应比全身免疫反应发生早，抗体效价高。

新城疫疫苗对雏鸡支气管结合淋巴组织形态发育的影响

５０只１日龄雏鸡随机分成数量相等的免疫组和非免疫组。免疫组雏鸡于１日龄用鸡新城疫Ⅱ（ＮＤⅡ）系弱毒疫苗点眼免疫，非免疫组雏鸡不免疫。定期收集免疫组和对非免疫组雏鸡肺脏和支气管，制做石蜡切片，苏木素伊红（ＨＥ）、阿尔森蓝－过碘酸雪夫氏（Ａｌｃｉｎｂｌｕｅ－ＰＡＳ）和酸性非特异酯酶（ＡＮＡＥ）染色。经组织学观察，免疫组雏鸡支气管结合淋巴组织（Ｂｒｏｎｃｈｕｓ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｌｙｍｐｈｏｉｄｔｉｓｓｕｅ，ＢＡＬＴ）比非免疫组雏鸡的发生早、生长快、体积大、淋巴细胞数量多。ＢＡＬＴ中有ＡＮＡＥ阳性淋巴细胞。此结果证明抗原刺激能促进雏鸡ＢＡＬＴ的发育成熟，产生细胞免疫反应。

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗点眼免疫反应 Ⅱ.组织学与免疫组织化学研究

60只 1日龄健康雏鸡随机分为 A、B、C三组。A组于 1日龄手术切除下眼睑结膜。A、B两组于 12日龄时结扎鼻泪管 ,用新城疫克隆 30苗点眼。C组为对照组。 2 3日龄分别采取其 CAL T和哈德氏腺 ,比较观察其组织细胞。结果 ,1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡 CAL T缺失 ,点眼免疫后 ,哈氏腺的免疫细胞也较正常免疫鸡少 ,而正常接种 ND克隆 30 (B组 )后 ,CAL T发生早 ,生长快 ,淋巴细胞数量多 ,故本实验证实 CAL T对哈氏腺免疫细胞的数量与成分有一定的调控作用。 CAL

新城疫病毒感染鸡肾脏组织蛋白质组学方法条件的优化

为研究新城疫病毒(NDV)与宿主组织细胞之间的相互作用关系,本研究以NDV疫苗(La Sota)接种的鸡肾脏组织为材料,对其差异蛋白的表达进行分析,通过条件的优化,建立了NDV感染鸡肾脏组织的双向凝胶电泳检测方法。采用ImageMaster2D Platinum version 6.0软件对电泳图谱分析后显示:24 cm IPG胶条(pH4～pH7)对应的凝胶中可检测到约1 400个蛋白点,蛋白点匹配率达90%,表明NDV感染鸡肾脏组织蛋白质组双向凝胶电泳模型稳定、分辨率高、重复性好,在对4个时间点对照和人工感染凝胶分析过程中发现差异蛋白点主要集中于接种后7 d,该样品的2-DE电泳图谱中共有29个差异表达明显的蛋白点,其中上调表达蛋白点有15个,下调表达蛋白点有14个,利用荧光定量PCR对其中4个差异蛋白在mRNA水平进行检测,结果与双向电泳结果一致,NDV接种鸡肾脏组织蛋白质组学方法的建立为NDV致病机理的研究提供有效的方法。