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Uncertainty in Measuring Construct-specific Fragments of Genetically Modified Maize MON863 by Real Time Quantitative PCR
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作者 宋君 雷绍荣 +5 位作者 刘勇 王东 尹全 张富丽 刘文娟 常丽娟 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第12期1777-1780,1957,共5页
[Objective] The study aimed at evaluating the uncertainty in measuring the construct-specific fragments of genetically modified maize MON863 by real time quantitative PCR.[Method] The content of construct-specific fra... [Objective] The study aimed at evaluating the uncertainty in measuring the construct-specific fragments of genetically modified maize MON863 by real time quantitative PCR.[Method] The content of construct-specific fragments in MON863 samples was determined by real time quantitative PCR,and then the uncertainty of measurement result was evaluated according to the sources of uncertainty like the PCR system,the data processing and the micropipette.[Result] Type A evaluation of uncertainty(uA) in the measurement was 1.7×10^-2;Type B evaluation of uncertainty(uB) was 9.0×10^-4;the combined standard uncertainty(uC) was 1.7×10^-2;the expanded uncertainty(U95) was 0.036 and the finally measured result was 1.08%±0.036.[Conclusion] The main uncertainty of the result measured by real time quantitative PCR came from the randomizing effect in the experimental process. 展开更多
关键词 Genetically modified maize(Event MON863) Content of construct specific fragment UNCERTAinTY
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基于酿酒酵母的多片段质粒的构建
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作者 汤雅萍 程毅 +7 位作者 王吐虹 陈佳 高春生 郭利桃 宋志强 唐超 严准 李智敏 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期421-427,共7页
为避免现有的多片段质粒构建技术的弊端,提高多片段质粒构建效率,以构建树干毕赤酵母Agglutinin-like基因的敲除载体为例,利用酿酒酵母活体细胞重组系统,一次性将多个外源DNA片段和线性化质粒重组,形成环状质粒。通过引物设计在相互连接... 为避免现有的多片段质粒构建技术的弊端,提高多片段质粒构建效率,以构建树干毕赤酵母Agglutinin-like基因的敲除载体为例,利用酿酒酵母活体细胞重组系统,一次性将多个外源DNA片段和线性化质粒重组,形成环状质粒。通过引物设计在相互连接的DNA片段之间引入50bp重叠序列,用PCR扩增DNA片段后,与线性化质粒一起转化酿酒酵母,再用PCR和测序等方法鉴定阳性酵母菌落中质粒的正确性。通过本方法构建的多片段质粒正确率高、耗时短。 展开更多
关键词 质粒构建 多片段质粒 酵母同源重组系统
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转基因玉米NK603结构特异定量PCR方法的建立 被引量:3
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作者 宋君 雷绍荣 +3 位作者 向冰 刘勇 王东 尹全 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期2044-2048,共5页
根据转基因玉米NK603载体构建特异序列,设计引物和Taqman探针,建立了转基因玉米NK603载体构建特异结构定量PCR检测方法,并采用该法检测了2%含量的NK603标准品(不确定度为10%)。结果显示,采用本文构建的方法获得的标准曲线斜率,在-3.6~-... 根据转基因玉米NK603载体构建特异序列,设计引物和Taqman探针,建立了转基因玉米NK603载体构建特异结构定量PCR检测方法,并采用该法检测了2%含量的NK603标准品(不确定度为10%)。结果显示,采用本文构建的方法获得的标准曲线斜率,在-3.6~-3.1之间,相关系数大于0.99,扩增效率为98.1%,在90%~110%的范围内。样品检测结果(1.6%)接近已知含量(2%,不确定度为10%)。表明本文建立的转基因玉米NK603结构特异定量PCR检测方法,可以在日常检验中推广应用。 展开更多
关键词 NK603 zSSⅡb 载体构建特异片段 定量检测
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实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863结构特异基因的测量不确定度 被引量:17
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作者 宋君 雷绍荣 +6 位作者 刘勇 向冰 王东 尹全 张富丽 刘文娟 常丽娟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第33期20312-20315,共4页
[目的]对实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863结构特异基因的测量不确定度进行评定。[方法]使用转基因玉米MON863结构特异实时定量PCR方法测定含量为1%的转基因玉米MON863样品(CRM)中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微... [目的]对实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863结构特异基因的测量不确定度进行评定。[方法]使用转基因玉米MON863结构特异实时定量PCR方法测定含量为1%的转基因玉米MON863样品(CRM)中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源,评定测量的不确定度。[结果]研究得到uA=1.7×10-2,uB=9.0×10-4,uC=1.7×10-2,U95=0.036,测量结果为1.08%±0.036。[结论]转基因玉米MON863结构特异实时定量PCR方法检测结果的主要不确定度来自检验过程中的随机效应。 展开更多
关键词 转基因玉米MON863 结构特异基因含量 不确定度
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一种载体构建的新方法:一步克隆法 被引量:13
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作者 欧阳平 李玉 +1 位作者 严红 马立新 《湖北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2007年第2期178-181,共4页
报道一种载体构建的新方法,在PCR引物设计时,相连片断设计15 bp同源序列,PCR克隆目的片段后,产生多个首尾具同源末端的片段,然后进行多片段定向连接、转化和重组子鉴定.以4片段拼接的叶绿体单交换质体载体pSMGA(pBluescriptⅡSK(+)-man-... 报道一种载体构建的新方法,在PCR引物设计时,相连片断设计15 bp同源序列,PCR克隆目的片段后,产生多个首尾具同源末端的片段,然后进行多片段定向连接、转化和重组子鉴定.以4片段拼接的叶绿体单交换质体载体pSMGA(pBluescriptⅡSK(+)-man-gfp-aadA)的构建为例,应用上述方法构建仅需做一次连接、转化即可.该方法设计操作相对简便,无需中间载体的构建,减少连接和转化次数.利用该法构建了10多个6 kb以内的载体,证明这是一种简便、通用、高效并值得推广的构建小载体的方法. 展开更多
关键词 载体构建 一步克隆 新方法 同源片段 水稻
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陆地棉异质型ACCase基因的种子特异表达载体构建与遗传转化 被引量:8
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作者 刘正杰 张园 +5 位作者 王彦霞 李朋波 苏莹 张曦 王玉美 华金平 《分子植物育种》 CAS CSCD 2011年第3期270-277,共8页
异质型ACCase催化乙酰CoA形成丙二酰辅酶A是植物脂肪酸合成途径中的第一个关键的步骤,也是限速步骤;植物体内过量表达ACCase能够增加脂肪酸合成的底物,有可能导致植株种子含油量的增加。本实验采用GUS基因瞬时表达检测棉花愈伤组织中种... 异质型ACCase催化乙酰CoA形成丙二酰辅酶A是植物脂肪酸合成途径中的第一个关键的步骤,也是限速步骤;植物体内过量表达ACCase能够增加脂肪酸合成的底物,有可能导致植株种子含油量的增加。本实验采用GUS基因瞬时表达检测棉花愈伤组织中种子特异性表达启动子AGP的活性;利用RT-PCR扩增,克隆了陆地棉异质型ACCase四个亚基编码基因(BCCP1,BC1,CTa2和CTb);利用基因融合等方法,分别构建种子特异表达的过量表达载体p2301MαBCCP1、p2301MαBC1、p2301MαCTa2和p2301MαCACtp-CTb,同时,用这些载体转化拟南芥获得抗性植株,经PCR检测均获得转基因阳性植株,为利用陆地棉异质型ACCase编码基因特异性提高植物种子油份含量等后续研究提供了工作基础。 展开更多
关键词 ACCASE 种子特异启动子 载体构建 遗传转化 陆地棉
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转基因玉米MON863结构特异定量PCR方法的建立 被引量:2
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作者 宋君 王东 +4 位作者 游米沙 尹全 刘勇 雷绍荣 向云 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期1251-1255,共5页
根据转基因玉米MON863载体构建特异结构,设计引物和Taqman探针,建立了转基因玉米MON863载体构建特异结构定量PCR检测方法,并采用该法定量检测了1%含量的MON863标准品(不确定度为10%)。结果显示,采用本文构建的方法获得标准曲线斜率,在-... 根据转基因玉米MON863载体构建特异结构,设计引物和Taqman探针,建立了转基因玉米MON863载体构建特异结构定量PCR检测方法,并采用该法定量检测了1%含量的MON863标准品(不确定度为10%)。结果显示,采用本文构建的方法获得标准曲线斜率,在-3.6~-3.1之间,相关系数大于0.99,扩增效率为105.436%,在90%~110%的范围内。待检样品的定量检测结果(1.08%)非常接近真实值(1%,不确定度为10%),表明本文建立的转基因玉米MON863结构特异定量PCR检测重复性好,灵敏度和准确度高,可以在日常检验中推广应用。 展开更多
关键词 MON863 zSSⅡb 载体构建特异片段 定量检测
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Cre/loxP位点特异性重组系统在植物中应用的研究进展 被引量:5
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作者 孙家利 闫晓红 +1 位作者 王力军 魏文辉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1099-1107,共9页
Cre/loxP位点特异性重组系统自发现以来,在植物基因重组领域得到了广泛应用,已成为提高转基因植物安全性的有效方法。本文介绍了该系统的基本概况及其在转基因植物表达载体构建方面的应用,尤其是在基因删除、定点整合、多基因表达以及... Cre/loxP位点特异性重组系统自发现以来,在植物基因重组领域得到了广泛应用,已成为提高转基因植物安全性的有效方法。本文介绍了该系统的基本概况及其在转基因植物表达载体构建方面的应用,尤其是在基因删除、定点整合、多基因表达以及杂种优势利用等方面的应用做了重点阐述。 展开更多
关键词 CRE/LOXP系统 位点特异性重组 转基因 载体构建
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实时荧光定量PCR检测转基因玉米NK603结构特异基因的测量不确定度研究 被引量:4
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作者 宋君 雷绍荣 +5 位作者 刘勇 王东 刘文娟 尹全 张富丽 常丽娟 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期1147-1151,共5页
应用四川省农业科学院分析测试中心实验室建立的转基因玉米NK603结构特异实时定量PCR方法测定含量为2%的转基因玉米NK603样品中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源,评定了测量的不确定度。结果表明... 应用四川省农业科学院分析测试中心实验室建立的转基因玉米NK603结构特异实时定量PCR方法测定含量为2%的转基因玉米NK603样品中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源,评定了测量的不确定度。结果表明,uA=0.0003,uB=0.001,uC=0.001,U95=0.002,测量结果为1.6%±0.002%。NK603结构特异实时定量PCR方法检测结果的主要不确定度来自检验过程中的随机效应。 展开更多
关键词 转基因玉米NK603 结构特异基因含量 不确定度
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菊苣质体同源片段的克隆及非抗生素标记的质体定点整合表达载体构建 被引量:3
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作者 王玉华 郝建国 贾敬芬 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期72-81,共10页
依据烟草、玉米、拟南芥和大豆质体基因组rps7基因和16S rDNA基因的保守序列设计引物,以菊苣质体基因组DNA为模板,PCR扩增到1段4.8 kb的片段。序列分析表明,该片段全长4 751 bp(GenBank登录号为GQ199478),包括449 bp的rps7基因5′端序列... 依据烟草、玉米、拟南芥和大豆质体基因组rps7基因和16S rDNA基因的保守序列设计引物,以菊苣质体基因组DNA为模板,PCR扩增到1段4.8 kb的片段。序列分析表明,该片段全长4 751 bp(GenBank登录号为GQ199478),包括449 bp的rps7基因5′端序列、793 bp的rps12基因、72 bp的trnV基因、1 315 bp的16S rDNA基因5′端以及大部分的基因间隔区,该序列与烟草对应区段的相似性为92%,与莴苣对应区段的相似性为97%。以此片段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了非抗生素标记的菊苣质体定点整合表达载体pJBADH-GFP,酶切分析及PCR检测证明构建的载体符合预期设计。该载体的构建为建立高效、稳定的菊苣质体转化和无抗生素筛选体系奠定基础,为进一步通过质体基因工程手段将更多感兴趣的基因导入菊苣进行遗传改良,或以菊苣质体作生物反应器生产动物口服疫苗等搭建技术平台。 展开更多
关键词 菊苣 质体同源片段 非抗生素标记 定点整合 表达载体
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玉米特异启动子驱动下结核hsp65基因植物表达载体构建及鉴定 被引量:2
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作者 李君武 黄清华 +3 位作者 王珊 刘艳 黄泽棋 宋东 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期14-18,共5页
以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-Hsp65联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA... 以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-Hsp65联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。结果表明:成功构建了pC1300GHsp65质粒,酶切鉴定得到3Kb和8.6Kb两条带,测序分析表明,克隆的Hsp65与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒条带大小与预期结果相符合。结果显示,已成功构建和转化了pC1300GHsp65质粒,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 玉米 特异启动子 基因表达 载体构建
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八氢番茄红素脱氢酶(Pds)基因果实特异表达载体的构建 被引量:2
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作者 刘顺枝 孙莉丽 +1 位作者 杨礼香 王小兰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第13期196-199,共4页
八氢番茄红素脱氢酶(Pds)是番茄红素合成的关键酶,本研究通过PCR法获取pds基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pMD1中,构建了含果实特异表达启动子的pds基因的植物表达载体。并采用PCR、限制性内切酶酶切和... 八氢番茄红素脱氢酶(Pds)是番茄红素合成的关键酶,本研究通过PCR法获取pds基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pMD1中,构建了含果实特异表达启动子的pds基因的植物表达载体。并采用PCR、限制性内切酶酶切和序列测定分析法,对重组质粒进行鉴定。结果表明:番茄果实特异性表达pds的重组质粒构建成功;通过农杆菌直接转化技术将其成功转入转化农杆菌LBA4404、EHA105中,为下一步pds在番茄果实中特异表达奠定了基础。 展开更多
关键词 八氢番茄红素脱氢酶 果实特异性启动子 载体构建
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一步法快速构建多片段连接的同源臂载体 被引量:5
13
作者 张金脉 杨冠恒 +1 位作者 程艳 黄英 《生物技术通讯》 CAS 2013年第3期385-389,共5页
目的:建立一种简便、高效,可一步完成多个片段连接,从而构建含同源臂的载体的方法。方法:按照酶切后可产生前后片段相匹配的粘性末端接头的原则设计PCR引物,在目的片段两端均引入BsaⅠ酶切位点。以G160基因为例,PCR扩增打靶用左... 目的:建立一种简便、高效,可一步完成多个片段连接,从而构建含同源臂的载体的方法。方法:按照酶切后可产生前后片段相匹配的粘性末端接头的原则设计PCR引物,在目的片段两端均引入BsaⅠ酶切位点。以G160基因为例,PCR扩增打靶用左右同源臂片段、示踪基因CMV-EGFP片段、载体骨架pMD19-T等4个片段,纯化后一起加入一个反应管中,并加入BsaⅠ限制性内切酶和T7DNA连接酶及相应缓冲液,进行酶切、酶连接共10~50个循环反应,一步构建含同源臂载体的质粒;产物经高温处理后,直接转化感受态细胞,并进行重组子PCR鉴定;对pMD19-T载体进行优化,突变载体上的BsaⅠ酶切位点,把示踪基因CMV-EGFP片段引入pHSG298-T载体,再选择不同的G160基因同源臂片段组合对构建系统进行验证。结果:重组质粒酶切和PCR结果表明,应用一步法可成功连接多个片段来构建含同源臂及示踪基因的克隆载体;用优化后的pMD19-T-O载体体系,在2d内即完成了6种各含4个片段的载体的构建。结论:多个基因片段一步无缝连接的方法简便、易行、可靠,不仅可快速构建某类载体系统,还可对基因进行精确的点突变,该系统可用于快速构建基因打靶载体。 展开更多
关键词 同源臂 多片段酶连接 载体构建 一步连接法
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香蕉果实特异表达启动子驱动下的乙肝表面抗原基因植物表达载体的构建 被引量:1
14
作者 胡伟 徐碧玉 +4 位作者 张建斌 杨晓颖 李美英 宁文彬 金志强 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期691-694,共4页
研制经济方便的新型乙肝植物口服疫苗是全球控制乙型肝炎的现实要求。研制乙肝植物口服疫苗遇到的一个主要的困难是HBsAg基因在受体植物中的表达量低。香蕉是植物口服疫苗理想的受体。因此,以香蕉为受体,进一步提高HBsAg基因表达量的研... 研制经济方便的新型乙肝植物口服疫苗是全球控制乙型肝炎的现实要求。研制乙肝植物口服疫苗遇到的一个主要的困难是HBsAg基因在受体植物中的表达量低。香蕉是植物口服疫苗理想的受体。因此,以香蕉为受体,进一步提高HBsAg基因表达量的研究非常必要。从pBIL2载体上克隆了香蕉果实特异表达的BanLec启动子,并引入了HindⅢ、BamHⅠ酶切位点;利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切YEPFLAG-HBS获得了HBsAg基因;通过BamHⅠ酶切位点,利用T4DNA连接酶连接了BanLec启动子和HBsAg基因,形成BanLec-HBsAg连接片段;再把该片段通过EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点插入pCAMBIA2300植物表达载体,成功构建香蕉果实特异表达启动子驱动下的乙肝表面抗原基因表达载体。 展开更多
关键词 香蕉 果实特异表达启动子 乙肝表面抗原 表达载体 构建
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人呼吸道合胞病毒FHRA-HRB片段的表达纯化与鉴定 被引量:1
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作者 夏超 沈良华 +5 位作者 李满妹 唐维 易善泽 牛得伟 王峰 李药兰 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期301-307,共7页
目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆... 目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆转录得c DNA,使用Primer 6.0软件设计特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增得到FHRA-HRB片段,测序成功后,将FHRA-HRB插入p ET-15b脱磷载体中,转化入Rosettagami表达宿主,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导FHRA-HRB的体外表达,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白.用Western-blot法鉴定FHRA-HRB蛋白表达.结果:成功扩增了大小约1100 bp的FHRA-HRB片段,克隆进p ET-15b载体后,菌液PCR验证与测序分析结果表明FHRA-HRB片段序列与预期一致且读码框插入正确,表达载体构建成功.工程菌经IPTG诱导后成功表达大小约43 000的FHRA-HRB蛋白,经Ni-NTA agarose纯化后FHRA-HRB蛋白纯度达95%以上.纯化后的FHRA-HRB蛋白经Western-blot鉴定其大小正确.结论:成功构建p ET-15b-FHRA-HRB表达载体,经表达纯化后,得到了纯度较高的FHRA-HRB蛋白,纯化蛋白经Western-blot鉴定正确.本研究为进一步研究其抗RSV活性和开发以F蛋白为靶点的抗RSV药物提供实验依据. 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 FHRA-HRB片段 载体构建 蛋白表达
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人工雄性不育基因及恢复基因表达载体的构建 被引量:3
16
作者 宋洪元 丁建刚 +2 位作者 曹必好 雷建军 宋明 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期249-253,共5页
结合Cre/loxp定位重组系统和杂种一代的育种特点,构建了雄性不育基因表达载体pCABARTABn和相应的恢复基因表达载体pBINPLUSCre。将位于质粒pTTABn中的雄性不育基因表达盒(含TA29启动子、barnase基因及Nos终止子)切下插入中间克隆载体pGl... 结合Cre/loxp定位重组系统和杂种一代的育种特点,构建了雄性不育基因表达载体pCABARTABn和相应的恢复基因表达载体pBINPLUSCre。将位于质粒pTTABn中的雄性不育基因表达盒(含TA29启动子、barnase基因及Nos终止子)切下插入中间克隆载体pGloxp2个同向lox位点之间,再将上述表达盒连同lox位点切下插入pCAMBar,获得以除草剂Basta为筛选剂的雄性不育基因表达载体pCABARTABn。PCR方法从溶原菌BM25.8基因组DNA扩增出Cre基因,克隆测序验证无误后插入PBI525CaMV35S-35S双启动子和Nos终止子之间,再将表达盒切下插入pBINPLUS质粒相应位点,得到恢复基因植物表达载体pBINPLUSCre。 展开更多
关键词 Cre/loxp定位重组系统 雄性不育基因 恢复基因 表达载体构建
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新型HMW-GS基因1Dy12.1^(*t)植物双元表达载体的构建及其遗传转化 被引量:1
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作者 张艳贞 王轲 +1 位作者 张静 晏月明 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期683-687,共5页
为了建立快速研究高分子量谷蛋白亚基(high molecular weightglutenin subunit,HMW-GS)基因功能活性的植物表达体系,以自主克隆的新型HMW-GS基因1Dy12.1*t为目的基因,利用限制性内切酶XhoⅠ和SalⅠ切割后5’端能形成相同粘性末端的特性... 为了建立快速研究高分子量谷蛋白亚基(high molecular weightglutenin subunit,HMW-GS)基因功能活性的植物表达体系,以自主克隆的新型HMW-GS基因1Dy12.1*t为目的基因,利用限制性内切酶XhoⅠ和SalⅠ切割后5’端能形成相同粘性末端的特性,成功构建了1Dy12.1*t的植物双元表达载体pBINHP-GluT。该载体选择使用胚乳特异性强启动子,利用已知HMW-GS基因内部均不含有的XbaⅠ和KpnⅠ内切酶位点引入1Dy12.1*t编码区,并将1Dy12.1*t的表达调控置于T-DNA区内,从而奠定了其在不同HMW-GS基因功能活性研究上的便利性。通过根癌农杆菌烟草叶盘转化研究目的基因1Dy12.1*t在植物体的表达特性,SDS-PAGE和western blotting鉴定结果表明,1Dy12.1*t在转基因烟草种子胚乳中得到高效表达,进一步证实了所克隆基因的正确性和所构建载体的有效性。 展开更多
关键词 HMW-GS基因 双元表达载体 遗传转化 植物体 高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 限制性内切酶 基因功能
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3种不同启动子构建ACC脱氨酶基因植物表达载体 被引量:1
18
作者 黄海泉 黄美娟 +3 位作者 范志祥 李建永 刘璇 刘飞虎 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期706-710,共5页
从阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)UW4菌株克隆出ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid deaminase)基因连接至pGEM-Tvector上,并采用3种不同启动子(组成型表达启动子CaMV35S、花特异表达启动子CHSA及衰老特异表达启动子SAG... 从阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)UW4菌株克隆出ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid deaminase)基因连接至pGEM-Tvector上,并采用3种不同启动子(组成型表达启动子CaMV35S、花特异表达启动子CHSA及衰老特异表达启动子SAG12)分别构建ACC脱氨酶基因的植物表达载体,经PCR及酶切鉴定均已构建成功,为后期选择不同的花卉等植物材料遗传转化研究打下基础。 展开更多
关键词 ACC脱氨酶基因 花特异表达启动子 衰老特异表达启动子 植物表达载体构建
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几个杨树木质部特异启动子片段表达载体的构建与功能分析 被引量:2
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作者 张爽 武会 杜克久 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期199-203,共5页
木质部纤维素合酶基因(CesA)在植物正常生长期的木质部特异表达,受到外界压力时可诱导在韧皮部表达,因而被用作杨树抗桑天牛转基因研究中的特异性表达启动子。将前期分离的CesA上游DNA片段JCesAP、YCesAP和MDCesAP分别替换植物表达载体p... 木质部纤维素合酶基因(CesA)在植物正常生长期的木质部特异表达,受到外界压力时可诱导在韧皮部表达,因而被用作杨树抗桑天牛转基因研究中的特异性表达启动子。将前期分离的CesA上游DNA片段JCesAP、YCesAP和MDCesAP分别替换植物表达载体pCAMBIA1302中的组成型启动子CaMV35S,构建成新的植物组织特异性表达载体pJCesAP-GFP、pYCesAP-GFP和pMDCesAP-GFP,然后采用农杆菌介导法转化烟草,均得到完整的再生烟草植株。经PCR初步检测证明目的基因已整合到烟草基因组中。荧光检测JCesAP、YCesAP和MDCesAP片段均能启动GFP蛋白的表达,在395 nm激发光下出现黄绿色荧光,显示3个CesA片段均具有在木质部特异表达的启动子活性。 展开更多
关键词 木质部特异启动子 载体构建 转基因 绿色荧光蛋白
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PVY、CMV双价抗性RNA沉默表达载体的构建 被引量:1
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作者 王凤龙 吴元华 《烟草科技》 EI CAS 北大核心 2007年第12期55-59,共5页
采用RT-PCR方法克隆了PVYCP基因、PVYHC-Pro基因、CMVCP基因和CMV2b基因的保守片段,分别将PVYCP片段和CMV2b片段、PVYHC-Pro片段和CMV2b片段、PVYHC-Pro片段和CMVCP片段连接起来,以此为靶标构建并得到3个RNA沉默表达载体pCAMPb、pCAMHb... 采用RT-PCR方法克隆了PVYCP基因、PVYHC-Pro基因、CMVCP基因和CMV2b基因的保守片段,分别将PVYCP片段和CMV2b片段、PVYHC-Pro片段和CMV2b片段、PVYHC-Pro片段和CMVCP片段连接起来,以此为靶标构建并得到3个RNA沉默表达载体pCAMPb、pCAMHb和pCAMHP。获得的载体可以应用于植物转基因抗病毒育种工程中。 展开更多
关键词 片段克隆 载体构建 RNA沉默 双价抗性
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