密度梯度离心法分离脐血干细胞:分离介质的筛选

背景:应用脐血分离干细胞的目的是获得以干细胞为主要群体的单个核细胞群,密度梯度离心法是最简单有效的方法之一。密度梯度离心法使用的分离介质以聚蔗糖泛影葡胺最为常用,但哪种浓度获得干细胞最多,目前尚未深入研究。目的:探讨密度梯度离心法分离人脐血干细胞分离介质的最佳浓度,建立临床级干细胞分离应用方案。方法:采用两步法分离脐血流程,先用羟乙基淀粉沉淀脐血红细胞,再使用质量浓度分别为(1.0730±0.0001),(1.0750±0.0001),(1.0770±0.0001)g/mL的分离液,分离沉淀脐血红细胞后的上清液,得到单个核细胞,分别计数细胞获得率及细胞存活率。采用流式细胞仪测定单个核细胞表面标志物,将各亚组分绘制成直方图或散点图,分析所得脐血单个核细胞中所含单个核细胞亚组分的比例和绝对数量。结果与结论:应用质量浓度(1.0730±0.0001)g/mL的分离液可得到最大比例间充质干细胞群,是分离间充质干细胞的最佳质量浓度。使用质量浓度(1.0750±0.0001)g/mL的分离液可得到较高比例的造血干细胞群,是分离造血干细胞的最佳质量浓度。使用质量浓度(1.0770±0.0001)g/mL的分离液得到细胞总数最高,但获得的间充质干细胞、造血干细胞比例最低。采用两步法分离干细胞流程,建立严格的实验室条件和标准,可获得密度梯度离心法分离人脐血干细胞的最佳分离方案。

连续流动离心式血细胞分离术减除白细胞治疗白血病患者的护理要点研究

目的探讨采用连续流动离心式血细胞分离术对白血病患者实施减除白细胞治疗期间给予护理干预的可行性。方法选择我院2018年2月至2019年2月收治的120例白血病患者作为实验对象;数字奇偶法分组后探究每组减除白细胞治疗期间采用护理理念;比照组(60例):采用基础护理理念展开;实验组(60例):采用基础护理理念+针对性护理理念展开;最终对比两组白血病患者护理结果。结果实验组白血病患者护理服务总满意度(96.67%)高于比照组(71.67%)明显(P<0.05);实验组白血病患者减除治疗后不良反应总发生率(8.33%)低于比照组(28.33%)明显(P<0.05)。结论临床在采用连续流动离心式血细胞分离术对白血病患者实施减除白细胞治疗期间给予针对性护理干预,对于护理服务满意度以及减除治疗后白血病治疗安全性的提升可发挥明显作用,最终对于白血病患者预后状态提升,奠定基础。

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集

目的 :从孕妇外周血中分选富集出胎儿有核红细胞 ,以便用于无创伤性产前诊断。方法从 32例孕 11～ 2 0周的孕妇血中用Histopaque 10 77密度梯度离心富集以及流式细胞仪计数出胎儿有核红细胞 ,并用喹吖因荧光染色检测Y 染色体以及用PCR检测Y -染色体DNA特异序列。结果流式细胞仪计数 ,每毫升孕妇外周血中计数到 0 .93× 10 3 ～ 8.11× 10 3 个GPA阳性细胞 ;PCR结果与产后性别证实 ,符合率为 90 .0 6 %。结论孕妇外周血中的胎儿有核红细胞经密度梯度离心和流式细胞仪分离后 ,可得到一定程度的富集和纯化 ,11～ 2 0周内FNRBCs数与孕期似无相关性 。

不同外周血单个核细胞分离方法对流式细胞术分析结果的影响

目的探讨3种外周血单个核细胞(PBMC)分离方法对后续流式细胞术分析结果的影响,并比较PBMC冻存前后流式细胞术分析结果。方法2019年5月,选择四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室6位体检健康的工作人员为受试对象,采集每位受试者外周血15 mL,平均分为3份,分别采用Ficoll离心法、羟乙基淀粉(HES)沉降法和HES+Ficoll法分离PBMC。显微镜下观察3种方法分离所得PBMC的形态,并采用细胞计数仪进行细胞计数。分离所得PBMC于冻存前和冻存6个月后行流式细胞术分析,计算PBMC中淋巴细胞所占比例、淋巴细胞中活细胞(FVS780荧光强度小于102为活细胞)所占比例(细胞存活率)和活细胞中CD4^(+)T细胞数与CD8^(+)T细胞数的比值(CD4^(+)T/CD8^(+)T)。结果3种分离方法得到的PBMC形态均一致。与其他2种分离方法相比,HES沉降法分离得到的PBMC除淋巴细胞外还有部分红细胞。HES沉降法所得PBMC数量显著多于Ficoll离心法与HES+Ficoll法(P<0.05);Ficoll离心法所得PBMC数量高于Ficoll+HES法(P<0.05)。冻存前和冻存6个月后,Ficoll离心法、HES沉降法和Ficoll+HES法得到的PBMC的存活率比较差异均无统计学意义(P>0.05);HES沉降法得到的PBMC中淋巴细胞比例显著低于Ficoll离心法和HES+Ficoll法(P<0.05);Ficoll离心法与HES+Ficoll法所得到的PBMC中淋巴细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05);Ficoll离心法、HES沉降法与Ficoll+HES法得到的存活细胞中CD4^(+)T/CD8^(+)T比值比较差异无统计学意义(P>0.05)。3种方法分离得到的PBMC冻存后淋巴细胞存活率均低于冻存前(P<0.05),PBMC中淋巴细胞比例均高于冻存前(P<0.05);存活细胞中CD4^(+)T/CD8^(+)T比值与冻存前比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论HES沉降法分离得到的PBMC纯度(混有少量红细胞)不如其他2种方法,但其操作更为简便。且无论是冻存前的PBMC还是冻存6个月后的细胞,流式细胞术分析3种方法分离得到的PBMC的结果无统计学差异,因此,HES沉降法适用于抗凝全血的PBMC分离提取。

密度梯度离心法和红细胞裂解法对小鼠外周血淋巴细胞表面分子表达的影响

目的比较密度梯度离心法和全血红细胞裂解法对小鼠外周血淋巴细胞表面分子表达的影响。方法采用流式细胞术检测密度梯度离心法和全血红细胞裂解法获得的小鼠外周血存活淋巴细胞比例以及表型分子(CD3、CD4、CD8、CD19和CXCR5)的频数。结果密度梯度离心法获得的小鼠外周血存活淋巴细胞比例较全血红细胞裂解法获得的存活淋巴细胞显著升高(92.70%vs 85.90%,P<0.05)。与密度梯度离心法相比,全血红细胞裂解法可使外周血淋巴细胞中CD3、CD4和CD8表达显著下降(60.10%vs 35.90%,P<0.05;42.90%vs 20.30%,P<0.05;24.60%vs 14.80%,P<0.05),而CD19和CXCR5表达则显著升高(12.80%vs 35.30%,P<0.05;15.00%vs 35.10%,P<0.05)。结论密度梯度离心法获得的小鼠外周血淋巴细胞活力强且表型稳定,可作为分离此类细胞的优选方法。