蛋白质电泳中考马斯亮蓝R-250染色方法的优化与改进

为了优化与改进蛋白质电泳中传统考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue,CBB)R-250染色法凝胶背景深、脱色时间长、试剂消耗多等弊端,通过优化试验,建立了一种简单经济的CBB R-250染色方法。与传统方法相比,该方法在染色液配制中降低了甲醇、冰醋酸的比例,增加了硫酸铵成分,从而有效改善了染色效果,改进后的方法,染色几乎无背景,不需专用脱色液,只需用清水洗涤即可观察效果,大大缩短了试验时间,节约了成本,值得推广应用。

考马斯亮蓝G-250染色法测定草乌中可溶性蛋白质含量

采用考马斯亮蓝G-250染色法对草乌药材中可溶性蛋白质含量进行了测定,建立了快速、灵敏的测定蛋白质的方法.结果表明,考马斯亮蓝G-250染色法简单、迅速,且相对较为准确,是测定低浓度蛋白质含量的有效方法.

考马斯亮蓝G-250染色法测定柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白含量

目的:建立快速、灵敏的蛋白质含量测定方法,对柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白质含量进行测定;方法:运用超声与研磨两种方法提取柠条锦鸡儿种子中的可溶性蛋白,采用考马斯亮蓝G-250染色法对其进行测定;结果:超声提取与研磨提取得到可溶性蛋白含量分别为6.91%、6.87%,RSD分别为0.72%0,.67%;结论:考马斯亮蓝G-250染色法简单、迅速,且两种方法提取的蛋白质含量差别不大。

考马斯亮兰G-250法测定苹果浓缩汁生产中的蛋白含量

考马斯亮兰G 250法(Bradford法)是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。将其用于检测果汁中的蛋白,研究发现,苹果 汁中的几种主要成分,如:果糖、葡萄糖、蔗糖和苹果酸等不会对测定造成干扰,其最大吸收波长不变,标准曲线的线性较 好。并对苹果浓缩汁生产中不同工序物料中的蛋白含量进行测定,测定结果的精密度较好,加标回收率在97.76%～103.20% 之间。

一种新的考马斯亮兰R—250固相染料结合法测蛋白质含量的方法

本文介绍了一种用考马斯亮兰Ｒ—２５０因相染料结合法测蛋白质含量的方法。将蛋白样品点在滤纸上，甲醇固定，考马斯亮兰Ｒ—２５０染色，脱色，用洗脱液洗脱下与染料结合的蛋白质，在波长６１０ｎｍ处测其光密度（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ．Ｏ．Ｄ）值。方法简便，所用样品少，灵敏度高，检测线性范围在０．１ｇ／Ｌ～５ｇ／Ｌ间，重复性较好，批内变异３．５６％～６．６７％，批间变异１．４８％～７．０２％。样品稳定，染色后的滤纸可保存一个月，洗脱液体放置４８ｈ颜色不变。受干扰物质少是本法的一个特点，仅受ＳＤＳ、强碱等少数几种物质的干扰，不受叠氮钠、硫酸铵、ＴｒｔｏｎＸ－１００等物质的干扰。

考马斯亮兰G-250法测定胃液蛋白质含量及其临床意义

目的：探讨考马斯亮兰Ｇ２５０法测定胃液蛋白质含量的方法和意义。方法：采用改进的Ｂｒａｄｆｏｒｄ法对２６例正常人、８例胃癌、２４例溃疡及慢性胃炎、４例肠上皮化生以及４例萎缩性胃炎患者胃液进行蛋白质含量测定。结果：Ｇ２５０与胃液蛋白结合后的最大吸收波长为５９５ｎｍ，反应体系中加入２０μｌ１０ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ后明显提高光吸收值（Ｐ＜０．０５），线性范围在０～５００μｇ／ｍｌ间，比文献报道的高，胃液蛋白质与Ｇ２５０结合后３０ｍｉｎ内保持稳定，本法重复性好，回收率达９３．７％。结果还提示：胃癌组的胃液蛋白质含量明显高于正常对照组和其它胃疾病组（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。结论：用Ｇ２５０法测定胃液蛋白质含量是一种可靠、简便、快速、灵敏的方法，结果具有一定的临床意义。

考马斯亮蓝法测定果汁中蛋白质的含量

采用考马斯亮蓝法,对不同果汁中的蛋白质含量进行了测定。结果表明:蛋白质浓度在10-80μg/mL内与吸光度有良好的线性关系(R2=0.9964);样品平均回收率(n=3)分别为99.2%、98.8%、101.8%,RSD分别为0.64%、0.81%和0.58%(n=3)。该方法具有快速、灵敏度高、重现性好等特点。

考马斯亮蓝法快速测定乳品中蛋白质含量

采用考马斯亮蓝G-250染料染色法对市售乳品中蛋白质进行测定,在595 nm波长处测定溶液的吸光度。实验结果表明,标准蛋白质在10～80μg/mL之间呈现良好的线性关系。该法简便快速、灵敏度高、重现性好,是测定乳品中蛋白质的有效方法。

考马斯亮兰法(Bradford法)测定驼乳中蛋白质的含量

用考马斯亮蓝G-250显色,以牛血清蛋白为对照品,采用可见分光光度法在检测波长595 nm处测定驼乳中蛋白质的含量。结果表明,CBB G-250显色测定牛血清蛋白浓度在0.008~0.024 mg/m L（r=0.999 3）范围内与吸光度呈现良好的线性关系,加样回收率（100.20±2.25）%、RSD为2.24%。考马斯亮蓝显色法,具有简便、快速、灵敏度高、成本低、重现性好等特点,为新疆驼乳的进一步开发利用奠定基础。

用分光光度法快速测定蛋白质含量的研究

基于分光光度法检测技术,建立了样品中蛋白质含量的快速分析方法.利用试样中蛋白质与染色剂考马斯亮蓝G-250间的快速结合反应,生成有色结合物,在最大吸收波长610 nm处生成物吸光值与样品中蛋白质浓度成比例,线性范围0～100μg/mL,相关系数为0.997,检测时间少于2 min,可用于样品中蛋白质含量的快速测定.

柞蚕微孢子虫侵染后柞蚕5龄雌雄个体血淋巴蛋白质含量和组成的变化及差异分析

以柞蚕5龄幼虫为材料添食柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi,Np),通过测定与分析不同性别5龄幼虫血淋巴蛋白质含量和组成变化的差异,为探究柞蚕对柞蚕微孢子虫感染的免疫应答提供依据。感染柞蚕微孢子虫的不同性别柞蚕5龄幼虫的血淋巴蛋白质含量随蚕体发育进程出现不同的变化:雌性个体与雄性个体分别在添食Np后24 h与48 h,血淋巴蛋白质含量极显著增加(P<0.01),且持续至添食后96 h,其中雌性个体的血淋巴蛋白质含量又极显著高于雄性个体(P<0.01);在添食Np后120 h,雌、雄个体的血淋巴蛋白质含量与对照组无显著性差异(P>0.05)。SDS-PAGE分析表明,添食Np后的柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质组成与对照组基本一致,均显示出20条分子质量在20.1～97.2 kD的蛋白条带,其中雌、雄个体在添食后96 h,大小约44 kD的蛋白条带明显加深,大小约28 kD的蛋白条带雌性个体在添食后144 h、雄性个体在添食后120 h明显加深,且雄性个体在添食后120～168 h大小约42 kD的蛋白条带明显加深,但在添食后192 h与对照组无明显差异。研究结果说明Np侵染后,柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质的含量及组成均产生了一定的变化,并且雌雄个体间的变化存在差异。

流动注射分光光度法快速测定乳制品中的蛋白质含量

建立了快速测定乳制品中真蛋白质含量的交替合并带异步注入流动注射分光光度法。样品和试剂自动同时定量,分别同时被注入到超纯水和缓冲液中,以合并带中试样包裹试剂的方式进行汇合、反应,生成的蓝色络合物进入流通检测器,在595 nm下进行定量分析。得到的最佳测定条件为:反应试剂中考马斯亮蓝的浓度为150 mg/L,缓冲液中HCl的浓度为1.0%(V/V),NaCl的浓度为0.1 mol/L,采样体积为150μL,显色剂注入体积为30μL,反应盘管长度为200 cm,系统总流量为2.65 mL/min,分析速度为60样/h,方法的线性范围为0.5～15.0 mg/L;相对标准偏差小于1.9%(n=11),检出限为0.05 mg/L,回收率为93.9%～107.3%;。本系统的人为误差小,自动化程度高,重现性好,分析速度快,试剂用量少,且不受三聚氰胺、尿素等假蛋白的干扰,实现了对乳制品中真蛋白质含量的简便、快速、准确测定。

考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究

采用考马斯亮蓝G-250染色法对蛋白质含量进行了测定,建立了快速、灵敏的检测蛋白质的方法。结果表明,考马斯亮蓝G-250染色法简单、迅速,且相对较为准确,是测定低浓度蛋白质含量的有效方法。

几种蛋白质测定方法的比较

蛋白质与生命的起源、存在和进化都密切相关。蛋白质测定涉及到生产和科研的众多领域。本试验用凯氏定氮法、等电点沉淀法、紫外吸收法、双缩脲法、考马斯亮蓝染色法分别对牛奶、鸡蛋、酸奶、豆浆、杏仁露进行蛋白质含量的测定。依此分析比较各种测氮方法,总结出各方法的特点及适用条件。凯氏定氮法是适用范围最广测定结果最准确的方法,比色法则是操作最为简捷快速的方法,适用于结果要求不很精确的实验。

维药制剂药渣中蛋白质及游离氨基酸的含量测定

目的：测定药渣中蛋白质及氨基酸的含量。方法：用考马斯亮蓝G-250、茚三酮显色,分光光度法测定蛋白质及氨基酸的含量。结果：CBB G-250显色测定蛋白质线性范围0.081~0.202 mg,加样回收率102.06%、RSD为0.99%;茚三酮显色测定氨基酸的线性范围0.016~0.029 mg/m L,加样回收率99.83%、RSD为1.82%。结论：CBB G-250和茚三酮显色,均具有简便、快速、灵敏度高、成本低、重现性好等特点。

三种小麦蛋白质测定方法的比较

为比较不同小麦蛋白质测定方法,总结各方法的特点和适用条件,该试验用凯氏定氮法、近红外透射光谱分析法和考马斯亮蓝染色法分别对14个小麦品种进行蛋白质含量的测定。结果显示,三种方法都能测定出各材料的蛋白质含量,在95%置信区间,凯氏定氮法和近红外透射光谱分析法测定值与常年平均值之间存在线性关系,三者测定结果之间没有显著差异。

尿蛋白定量方法探讨及对CBB法的改良

探讨了尿蛋白测定方法,并改良了CBB—I尿蛋白定量法,于试剂中加入SDS和TritcX-100,可改善不同比例白、球蛋白反应灵敏的差异。并观察了蛋白成份及温度对5种蛋白测定方法反应的影响。实验证明:CBB—Ⅱ法在许多方面优于其他方法,操作简单、快速,适于临床常规尿蛋白定量测定。

Bradford法测量不同加工工艺鹿茸蛋白含量研究

目的:通过测定不同加工工艺鹿茸中可溶性蛋白质的含量,为鹿茸加工工艺的优选提供理论依据。方法:采用Bradford法分别测定鲜品鹿茸、鲜品去血鹿茸、煮炸鹿茸、直接冻干鹿茸、匀浆鹿茸、冻干加保护剂鹿茸、冻干未加保护剂鹿茸、冻干加保护剂40℃,10天鹿茸样品中的蛋白质含量,通过Kruskal-Wallis检验进行统计学分析不同加工工艺对鹿茸质量的影响。结果:不同加工工艺鹿茸中的蛋白质含量由大到小依次为鹿茸鲜品、直接冻干、匀浆鹿茸、冻干未加保护剂、冻干加保护剂40℃10天、冻干加保护剂、鲜品去血鹿茸、煮炸鹿茸。经秩和检验统计分析,与鹿茸鲜品相比,其它各组的蛋白质含量均显著降低(P≤0.05);与煮炸鹿茸相比,其它各组的蛋白质含量均显著提高(P≤0.05);此外,鹿茸匀浆组显著低于鹿茸直接冻干组(P≤0.05);鹿茸冻干品组显著低于鹿茸匀浆组和鹿茸直接冻干组(P≤0.05)。结论:鹿茸加工过程中的冻干、粉碎、匀浆、加热等工艺均会影响鹿茸中蛋白质的含量。加工工艺的步骤越多,工艺越复杂,对活性蛋白质成分的破坏作用越大。特别是鹿茸传统煮炸工艺中的高温加热与去血操作极易造成鹿茸中活性蛋白质成分的破坏和损失。与传统煮炸工艺相比,冻干工艺在低温下进行,有利于保持鹿茸中蛋白类成分的含量和活性。

双波长600nm/460nm分光光度法测定蛋白质含量研究

采用双波长替代单波长,对考马斯亮蓝分光光度法测定蛋白质技术进行改进。结果表明：以酪蛋白为标准蛋白,选取600 nm和460 nm为测定波长和参比波长,建立了双波法标准曲线,工作曲线相关系数的平方R2=0.999,检测范围3~250μg/mL；干扰试验和重复实验说明该方法准确性高、稳定性好；利用双波长法测定牛奶样品中蛋白质含量,相对偏差小于2.720%。因此,双波长分光光度法是一种简便、快速、准确、实用的蛋白质含量测定方法。

玉米芯水解制木糖过程中氛态氬类成分研究

分别利用微量凯氏定氮法检测了玉米芯及木糖生产过程中物料、副产物的总氨态氮含量;利用考马斯亮蓝染色法检测了木糖生产过程中物料的蛋白质含量;利用SDS-PAGE检测了木糖生产过程中蛋白质的相对分子质量分布变化情况。结果显示,玉米芯中总氨态氮含量约为2.44%(干基);活性炭对物料中的总氨态氮和蛋白质有一定的脱除作用;离子交换树脂相对脱除作用不明显;玉米芯水解液中蛋白质相对分子质量主要分为66.4 KDa附近和小于14.3 KDa的两个区域,通过活性炭有效脱除的是低分子量的蛋白质,相对分子质量为66.4 KDa的蛋白质无法在活性炭脱色和离子交换工序有效脱除。