荧光光谱法和分子模拟技术研究考马斯亮蓝G-250与牛血清白蛋白的相互作用

采用多种光谱技术结合圆二色谱技术研究了考马斯亮蓝G-250(CBBG-250)相互作用于牛血清白蛋白(BSA),探究了两者之间的作用机理。荧光光谱结果表明BSA与CBBG-250结合形式是静态猝灭,随CBBG-250浓度增加,其形成常数随温度逐渐减小,结合比为1∶1,根据Stern-Volmer曲线计算焓变值(ΔH)和熵变值(ΔS)分别为-4.38kJ·mol^(-1)和-6.16J·mol^(-1)·K^(-1),均小于零,证明该过程是一个自发过程。傅里叶红外光谱测定结果表明CBBG-250的加入引起BSA结构的变化,随着CBBG-250溶液浓度的增加,BSA中色氨酸微环境极性被改变,在1 600~1 700cm^(-1)(酰胺带Ⅰ)和1 600~1 500cm^(-1)(酰胺带Ⅱ)处的特征吸收带蓝移。其中1 650cm^(-1)移动至1 710cm^(-1),1 544cm^(-1)移动到1 573cm^(-1),显示BSAα-螺旋(1 650~1 658cm^(-1))和β-折叠(1 620~1 640cm^(-1),1 675cm^(-1))结构发生变化,且α-螺旋含量比结合前有所降低。圆二色谱分析结果表明,两者间通过氢键和范德华力为主的作用力使得BSA二级结构发生变化,α-螺旋含量由42.15%下降至1.27%,该结果进一步被分子建模对接技术证明。

考马斯亮蓝G-250染色法测定柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白含量

目的:建立快速、灵敏的蛋白质含量测定方法,对柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白质含量进行测定;方法:运用超声与研磨两种方法提取柠条锦鸡儿种子中的可溶性蛋白,采用考马斯亮蓝G-250染色法对其进行测定;结果:超声提取与研磨提取得到可溶性蛋白含量分别为6.91%、6.87%,RSD分别为0.72%0,.67%;结论:考马斯亮蓝G-250染色法简单、迅速,且两种方法提取的蛋白质含量差别不大。

考马斯亮兰G-250法测定苹果浓缩汁生产中的蛋白含量

考马斯亮兰G 250法(Bradford法)是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。将其用于检测果汁中的蛋白,研究发现,苹果 汁中的几种主要成分,如:果糖、葡萄糖、蔗糖和苹果酸等不会对测定造成干扰,其最大吸收波长不变,标准曲线的线性较 好。并对苹果浓缩汁生产中不同工序物料中的蛋白含量进行测定,测定结果的精密度较好,加标回收率在97.76%～103.20% 之间。

考马斯亮兰G-250法测定胃液蛋白质含量及其临床意义

目的：探讨考马斯亮兰Ｇ２５０法测定胃液蛋白质含量的方法和意义。方法：采用改进的Ｂｒａｄｆｏｒｄ法对２６例正常人、８例胃癌、２４例溃疡及慢性胃炎、４例肠上皮化生以及４例萎缩性胃炎患者胃液进行蛋白质含量测定。结果：Ｇ２５０与胃液蛋白结合后的最大吸收波长为５９５ｎｍ，反应体系中加入２０μｌ１０ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ后明显提高光吸收值（Ｐ＜０．０５），线性范围在０～５００μｇ／ｍｌ间，比文献报道的高，胃液蛋白质与Ｇ２５０结合后３０ｍｉｎ内保持稳定，本法重复性好，回收率达９３．７％。结果还提示：胃癌组的胃液蛋白质含量明显高于正常对照组和其它胃疾病组（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。结论：用Ｇ２５０法测定胃液蛋白质含量是一种可靠、简便、快速、灵敏的方法，结果具有一定的临床意义。

次氯酸钠脱色考马斯亮蓝G-250废液的优化研究

本研究利用次氯酸钠对测蛋白试验废水考马斯亮蓝G-250废液进行脱色处理,利用响应面法优化了次氯酸钠溶液的投加量、废液的pH值和反应时间对考马斯亮蓝G-250废液脱色率的影响.结果表明:次氯酸钠法氧化降解考马斯亮蓝G-250废液的最佳条件为,10 mL的废液里次氯酸钠投加量为10μL,反应时间为15 min,pH为4.77,此条件下废液脱色率达92.55%.研究结果为次氯酸钠脱色处理实验室考马斯亮蓝G-250废液提供参考.

响应面法优化Fenton试剂脱色考马斯亮蓝G-250废液

研究使用响应面法优化Fenton试剂脱色考马斯亮蓝G-250废液.探究pH、H2O2和FeSO4溶液浓度三个单因素对G-250废液褪色率的影响.在单因素实验的基础之上,响应面法优化G-250废液脱色条件.结果表明,Fenton试剂脱色考马斯亮蓝废液G-250的最佳优化条件为:20 mL G-250废液体系中,H2O2投加量为60μL,FeSO4投加浓度为1.5 g/L,pH值为4,该条件下G-250废液褪色率为95.93%.光谱扫描结果表明褪色的废液中含有大量具有苯环结构的分子.实验验证结果为实验室考马斯亮蓝G-250废液的脱色提供了实验依据.

考马斯亮蓝G250染色法测定啤酒中蛋白质含量

以啤酒为原料,利用蛋白质与考马斯亮蓝显色原理,测定啤酒中蛋白质含量,并对测定条件进行优化研究,实验结果表明:波长在595nm处蛋白质有最大吸收峰,反应时间3～5min为最适宜,SDS对马斯亮蓝测定蛋白质含量有干扰。测定所用的标准曲线方程为:y=0.1296x+0.0907。考马斯亮蓝G-250法测量蛋白质含量与凯氏定氮法相比较误差范围3%～8%。

一种新的考马斯亮兰R—250固相染料结合法测蛋白质含量的方法

本文介绍了一种用考马斯亮兰Ｒ—２５０因相染料结合法测蛋白质含量的方法。将蛋白样品点在滤纸上，甲醇固定，考马斯亮兰Ｒ—２５０染色，脱色，用洗脱液洗脱下与染料结合的蛋白质，在波长６１０ｎｍ处测其光密度（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ．Ｏ．Ｄ）值。方法简便，所用样品少，灵敏度高，检测线性范围在０．１ｇ／Ｌ～５ｇ／Ｌ间，重复性较好，批内变异３．５６％～６．６７％，批间变异１．４８％～７．０２％。样品稳定，染色后的滤纸可保存一个月，洗脱液体放置４８ｈ颜色不变。受干扰物质少是本法的一个特点，仅受ＳＤＳ、强碱等少数几种物质的干扰，不受叠氮钠、硫酸铵、ＴｒｔｏｎＸ－１００等物质的干扰。

蛋白质电泳中考马斯亮蓝R-250染色方法的优化与改进

为了优化与改进蛋白质电泳中传统考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue,CBB)R-250染色法凝胶背景深、脱色时间长、试剂消耗多等弊端,通过优化试验,建立了一种简单经济的CBB R-250染色方法。与传统方法相比,该方法在染色液配制中降低了甲醇、冰醋酸的比例,增加了硫酸铵成分,从而有效改善了染色效果,改进后的方法,染色几乎无背景,不需专用脱色液,只需用清水洗涤即可观察效果,大大缩短了试验时间,节约了成本,值得推广应用。

用分光光度法快速测定蛋白质含量的研究

基于分光光度法检测技术,建立了样品中蛋白质含量的快速分析方法.利用试样中蛋白质与染色剂考马斯亮蓝G-250间的快速结合反应,生成有色结合物,在最大吸收波长610 nm处生成物吸光值与样品中蛋白质浓度成比例,线性范围0～100μg/mL,相关系数为0.997,检测时间少于2 min,可用于样品中蛋白质含量的快速测定.

考马斯亮蓝G-250与牛血清白蛋白的相互作用研究

利用紫外-可见光谱、傅里叶变红外光谱、圆二色谱和分子建模技术研究了考马斯亮蓝G-250与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。紫外-可见光谱测定结果表明,随BSA的浓度的增加,以1:1形成复合物,在不同温度条件下,结合形成常数值分别为5.03×104、3.04×104、2.84×104和1.99×104 L/mol,随温度升高而减小,整个反应过程是焓、熵联合驱动自发进行,热力学焓变(ΔH)和熵变(ΔS)分别为-45.3229 k J/mol和-139.1847 J/(K·mol),说明分子间作用力以氢键和范德华力为主;采用傅里叶红外技术研究了作用前后BSA中α-螺旋特征酰胺带(I和II)的变化,结果表明酰胺带I由1650 cm-1移动到1710 cm-1,酰胺带II从1544 cm-1移动到1573 cm-1,α-螺旋结构降低;圆二色谱测定结果和分子对接技术进一步验证了BSA结构的变化,α-螺旋含量由42.15%下降至1.27%。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法

目的建立一种操作简便、快速、灵敏度高、无毒的蛋白质电泳染色方法。方法利用考马斯亮蓝G-250(CBB G-250)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后对蛋白质条带进行染色,对不同染色条件进行探讨,并与考马斯亮蓝R-250(CBB R-250)染色法进行比较。结果 CBB G-250染色法试剂无毒,背景浅,经改良其灵敏度与CBB R-250染色法相当,达到0.1～0.5μg。结论 CBB G-250染色方法简单经济,灵敏度能够满足一般要求,适用于蛋白质电泳结果的快速分析。

考马斯亮蓝与牛血清白蛋白相互作用机理的研究(英文)

利用光谱探针技术研究在酸性溶液中考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250,CBBG)与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)相互作用机理,考察了不同实验条件对CBBG-BSA复合物吸收光谱的影响。实验结果表明:CBBG与BSA相互作用产生光谱蓝移主要是由CBBG与BSA间的疏水相互作用引起,而静电作用则是形成CBBG-BSA蓝色复合物的必要条件。同时,CBBG聚集体的聚集程度是影响CBBG-BSA蓝色复合物形成的重要因素。

柞蚕微孢子虫侵染后柞蚕5龄雌雄个体血淋巴蛋白质含量和组成的变化及差异分析

以柞蚕5龄幼虫为材料添食柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi,Np),通过测定与分析不同性别5龄幼虫血淋巴蛋白质含量和组成变化的差异,为探究柞蚕对柞蚕微孢子虫感染的免疫应答提供依据。感染柞蚕微孢子虫的不同性别柞蚕5龄幼虫的血淋巴蛋白质含量随蚕体发育进程出现不同的变化:雌性个体与雄性个体分别在添食Np后24 h与48 h,血淋巴蛋白质含量极显著增加(P<0.01),且持续至添食后96 h,其中雌性个体的血淋巴蛋白质含量又极显著高于雄性个体(P<0.01);在添食Np后120 h,雌、雄个体的血淋巴蛋白质含量与对照组无显著性差异(P>0.05)。SDS-PAGE分析表明,添食Np后的柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质组成与对照组基本一致,均显示出20条分子质量在20.1～97.2 kD的蛋白条带,其中雌、雄个体在添食后96 h,大小约44 kD的蛋白条带明显加深,大小约28 kD的蛋白条带雌性个体在添食后144 h、雄性个体在添食后120 h明显加深,且雄性个体在添食后120～168 h大小约42 kD的蛋白条带明显加深,但在添食后192 h与对照组无明显差异。研究结果说明Np侵染后,柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质的含量及组成均产生了一定的变化,并且雌雄个体间的变化存在差异。

蚓激酶提取条件的优化与酶活性测定

蚯蚓纤溶酶是目前较为理想的溶栓药物之一,具有广泛的临床应用前景。采用盐析法从蚯蚓中提取蚓激酶,通过采用考马斯亮蓝G-250染色法间接地测定蚓激酶活性,优化出最佳的提取条件。结果显示,蚓激酶的提取最佳PH为7.5-8.0,二次盐析硫酸铵饱和度应在80%以上。

一种考马斯亮蓝G-250快速染色法在SDS-PAGE中的应用

对SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中一种仅加入3m mol/L盐酸的考马斯亮蓝G-250染色液配合微波加热的快速染色方法的具体条件进行了研究。该方法能在1h内完成,比常规考马斯亮蓝R-250染色法短得多。同时未加入有机溶剂和其他酸,对人体几乎无害,对环境污染小。而其灵敏度与常规考马斯亮蓝R-250染色法相近,适于在实验教学和科研方面进行推广应用。

蛋白质SDS-PAGE电泳实验常见问题及改进措施

SDS-PAGE电泳是检测蛋白质纯度和评估蛋白质分子量的常用方法,也是一项极其重要的生物化学实验技术。本文针对SDS-PAGE电泳实验过程中凝胶渗漏、凝固时间不易把握等问题,以及染色、脱色耗时长且需使用甲醇等缺点,提出巧用白吸头解决漏胶问题,设立对照判断凝胶是否凝固,用考马斯亮蓝G250代替G250,用乙醇代替甲醇等改进措施。改进后的方法具有耗时短、少用有毒试剂、效果好等特点,比较适宜于课堂教学。

快速测定生物样品中蛋白含量的同步荧光法研究

基于胞苷酸(CMP)与人血清白蛋白(HSA)相互作用,体系的同步荧光强度和溶液中白蛋白的浓度呈良好的线性关系,建立了以胞苷酸为分子探针,运用同步荧光光谱法测定生物样品中蛋白质含量的新方法.考察了Δλ值、介质、试剂用量、离子强度、加入顺序、反应时间等因素对体系同步荧光光谱的影响,在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度与白蛋白在2.76～552.0μg·mL-1范围内的线性相关系数为0.9984,方法的检测限可达0.13μg·mL-1.用本方法对人血清、唾液和尿液等样品进行测定并做了加标回收实验,回收率在97.8%～103.6%之间.对11份空白溶液进行平行测定,相对标准差为1.16%.并用CBB法做了对照实验,取得了令人满意的结果.

二氧化钛光催化降解蓝色染料的动力学研究

本文选择两种蓝色有机染料——曲利苯蓝与考马斯亮蓝R250为研究对象,使用二氧化钛为催化剂,研究了它们在254nm紫外光下降解的影响因素以及相应的动力学模型。实验结果显示,随着二氧化钛投加量的增加以及反应时间的延长,曲利苯蓝与考马斯亮蓝R250的脱色率均随之升高;而增大曲利苯蓝与考马斯亮蓝R250的起始浓度,它们的脱色率则随之下降。此外,溶液p H也对对于这两种染料的降解存在一些影响。在二氧化钛的催化下,曲利苯蓝与考马斯亮蓝R250的降解均符合准一级Langmuir-Hinshelwood方程。

尿蛋白定量方法探讨及对CBB法的改良

探讨了尿蛋白测定方法,并改良了CBB—I尿蛋白定量法,于试剂中加入SDS和TritcX-100,可改善不同比例白、球蛋白反应灵敏的差异。并观察了蛋白成份及温度对5种蛋白测定方法反应的影响。实验证明:CBB—Ⅱ法在许多方面优于其他方法,操作简单、快速,适于临床常规尿蛋白定量测定。