铅暴露对神经胶质瘤细胞铜代谢的影响及其机制

目的：研究铜转运蛋白1（CTR1）、铜转运 ATP 酶α多肽（ATP7A）在铅暴露诱导大鼠 C6胶质瘤细胞铜离子代谢紊乱及氧化应激反应中的作用。方法采用噻唑蓝法（MTT），通过 C6细胞暴露于醋酸铅0～100μmol·L -124和48 h 筛选适合剂量。C6细胞用醋酸铅10μmol·L -1分别处理24和48 h 后，分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸比色法（TBA）检测铅对细胞 SOD 活性和 MDA 含量；原子吸收分光光度法观察铅对细胞内铜水平；荧光实时定量 PCR 和 Western blot 分别检测铅暴露后细胞 CTR1和ATP7A 的 mRNA 和蛋白表达水平的变化。结果醋酸铅浓度高于10μmol·L -1时，细胞活力受到显著抑制，故选择铅10μmol·L -1为铅暴露浓度。与正常对照组相比，单独铅或铜处理组 SOD 活性下降，MDA 含量增高，而铅与铜联合处理组 SOD 活性下降及 MDA 含量增高的程度更加显著（P ＜0．01）。与正常对照组比较，醋酸铅10μmol·L -1处理 C6细胞24和48 h 后，细胞对铜的吸收量分别增加1．2倍和2．5倍（P ＜0．01），CTR1 mRNA 水平分别增高23．2％和58．7％（P ＜0．01），而 ATP7A mRNA 水平分别下调58．1％和50．0％（P ＜0．01）。与正常对照组比较，醋酸铅10μmol·L -1暴露组 CTR1蛋白水平显著增高，而ATP7A 蛋白表达降低（P＜0．01）。结论铅暴露可以导致细胞中铜的蓄积和氧化应激反应的增强，其分子机制可能与影响 C6细胞 CTR1和 ATP7A 的表达水平有关。

土壤表层中的Cu、Cd、Pb的垂直运移规律

通过人工模拟重金属Cu、Cd、Pb污染土壤的试验，研究了不同浓度的重金属Cu、Cd、Pb在砂壤土、壤土和粘壤土3种不同质地土壤中垂直运移的规律。结果表明，重金属Cu2＋、Cd2＋、Pb2＋在土壤中垂直分布的规律随土壤质地不同而有所不同，其中土壤对重金属的吸附能力大小为粘壤土〉壤土〉砂壤土，重金属在土壤中的运移能力大小为砂壤土〉壤土〉粘壤土。Cu2＋、Cd2＋、Pb豺主要积累层在土壤表层，尤其是0～10cm的土层，随着土壤深度的增加，土壤Cu2＋、Cd2＋、Pb2＋含量逐渐减少。

铅暴露诱导铜蓄积对小鼠神经元氧化应激的促进作用

目的:探讨铅(Pb)暴露诱导小鼠神经元铜(Cu)蓄积,促进细胞氧化应激损伤的机制。方法:C57BL/6小鼠饮用300 ppm醋酸铅水溶液2个月建立铅暴露动物模型;小鼠海马神经元细胞系HT22细胞暴露于0~100μmol/L醋酸铅24 h,采用噻唑蓝(MTT)法筛选适宜的铅作用剂量,建立铅暴露细胞模型。石墨炉原子吸收分光光度法(AAS)检测铅暴露后小鼠脑组织和HT22细胞铜水平变化;Western Blot法检测铅暴露对小鼠脑组织和HT22细胞中铜转运蛋白1(CTR1)、铜转运ATP酶α肽(ATP7A)、铜转运ATP酶β肽(ATP7B)表达水平的影响;2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法、硫代巴比妥酸比色法(TBA)分别测定铅暴露后HT22细胞内活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)活性变化情况,并观察特异性铜螯合剂四硫代钼酸铵(TTM)的保护作用。结果:与对照组相比,铅暴露组小鼠血铜水平降低,而皮质和海马组织铜水平均显著升高(P<0.05);以5、10μmol/L铅暴露24 h后,HT22细胞的铜吸收呈剂量-依赖性增高(P<0.05)。铅暴露后小鼠脑组织和HT22细胞中CTR1蛋白水平显著增高,而ATP7A和ATP7B蛋白水平显著降低(P<0.05)。铅暴露引起HT22细胞ROS、MDA水平较对照组呈剂量-依赖性升高(P<0.05);而TTM的处理逆转了铅暴露引起的氧化应激(P<0.05)。结论:铅暴露可能通过影响神经元铜转运蛋白水平导致细胞铜蓄积,进而诱导细胞氧化应激损伤。

染铅大鼠脉络丛中铜及铜转运蛋白的变化

目的 探讨不同剂量铅染毒后对大鼠脑组织和血清中铜含量以及脉络丛中铜转运蛋白表达的影响,为铅的神经毒性机制研究提供理论依据.方法 SPF级SD大鼠60只,随机分为对照组和3个铅染毒组,每组8只.铅染毒组大鼠摄入含有0、500、1 000、2000 mg/L醋酸铅饮用水8周,对照组给予2 000 mg/L醋酸钠饮水.用ICP-MS进行海马、血清、皮质、脉络丛、骨骼和脑脊液中铅、铜含量检测;用激光共聚焦和real-time PCR的方法进行铜转运蛋白Ctr1、ATX1和ATP7A的mRNA表达进行检测.结果 与对照组比较,各染毒组大鼠血清、皮质、海马、脑脊液、脉络丛和骨骼中铅含量明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;各染毒组大鼠血清总铜、脑脊液、脉络丛和海马中铜的含量明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.激光共聚焦结果显示,对照组Ctr1表达在脉络丛的细胞质和细胞膜,铅暴露后脉络丛中Ctr1可移动到CSF面的微绒毛上.随着铅染毒剂量的增加,Ctr1的荧光强度逐渐增强,而2000 mg/L染毒组大鼠脉络丛中Ctr1的荧光强度低于1 000 mg/L染毒组.1 000和2 000 mg/L染毒组脉络丛中ATX1的荧光强度比对照组有所降低.Real-time PCR结果显示,各染毒组Ctr1、ATP7A mRNA表达均明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 铅染毒可影响脉络丛中的铜稳态的调控,引起脑组织中铜稳态失调,这可能是铅致神经损伤的机制之一.

清中期的铜铅运销与币材供给

清中期的铜铅产地集中于西南一隅,而币材需求遍及全国。产销分离使铜铅运输成为币材供给不可或缺的重要环节,关乎全国的币制稳定和经济发展。本文从清前期的币材危机出发,探讨清中期铜铅运销体系和币材供给格局形成的原因、过程及保障机制。研究认为,清中期西南边疆矿业的兴起是政府应对前期币材危机的结果,伴随滇铜黔铅外销区域的扩展,形成了以云贵为源头、辐射全国、水陆联运的铜铅运销体系,构成了涵盖全国的币材供给格局。这一体系和格局持续长达一个多世纪,反映出清政府币材安全保障和战略资源调控的能力和水平。

铜转运相关蛋白在醋酸铅致C6细胞铜蓄积中作用

目的探讨铜转运蛋白和铜伴侣蛋白在醋酸铅染毒致大鼠神经胶质瘤细胞株C6细胞铜蓄积中的作用。方法 1采用CCK-8实验,以终浓度为0～50μmol/L醋酸铅处理C6细胞24.0 h,筛选合适的后续实验染毒剂量。2将C6细胞分为对照组和铅染毒组,分别予终浓度为0和10μmol/L醋酸铅处理24.0 h,再予浓度为2μmol/L的氯化铜培养,于培养后0.0、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 h收获细胞。以电感耦合等离子体-质谱法检测C6细胞内铜和铅水平,荧光实时定量聚合酶链式反应检测C6细胞中铜转运蛋白铜转运体1（CTR1）、二价金属转运体1（DMT1）、铜转运三磷酸腺苷酶α肽/β肽（ATP7A/ATP7B）和铜伴侣蛋白抗氧化蛋白1（ATOX1）、细胞色素C氧化酶17（COX17）、超氧化物歧化酶铜伴侣蛋白（CCS）的mRNA表达,以激光共聚焦检测铅染毒后细胞中CTR1和ATP7A的蛋白表达。结果 1CCK-8实验结果显示,浓度为10μmol/L的醋酸铅对C6细胞增殖尚未造成有统计学意义的影响（P〉0.05）,以该浓度作为后续铅染毒剂量。2醋酸铅染毒24.0 h后,铅染毒组C6细胞中铅和铜的水平均高于对照组（P〈0.01）,但2组C6细胞存活率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。经染铜处理后,铅染毒组C6细胞存活率低于对照组（P〈0.01）。C6细胞中铜水平在铅染毒处理和染铜时间的交互效应间有统计学意义（P〈0.01）;其中,在染铜后0.5～8.0 h 5个时间点,铅染毒组C6细胞中铜水平均高于对照组（P〈0.05）;对照组C6细胞中铜水平在染铜后2.0 h时间点达到高峰,此后直至8.0 h时间点均维持在较为平稳的水平;而铅染毒组C6细胞中铜水平呈随着染铜时间的增加而升高的时间-效应关系,在染铜后8.0 h时间点达到高峰。醋酸铅染毒24.0 h后,与对照组比较,铅染毒组C6细胞中CTR1和DMT1的mRNA相对表达水平分别上调113.00%和36.00%（P〈0.01）,ATP7A mRNA相对表达水平下调25.00%（P〈0.01）,CTR1蛋白表达水平上调76.04%（P〈0.01）,ATP7A蛋白表达水平下调16.00%（P〈0.01）。2组C6细胞中ATP7B、ATOX1、COX17和CCS的mRNA相对表达水平分别比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论醋酸铅染毒可导致C6细胞中铜水平呈随时间增加而增加的时间-效应性蓄积;铜转入蛋白CTR1表达的上调和铜转出蛋白ATP7A表达的下调可能是醋酸铅染毒后致细胞中铜蓄积的机制之一。

铅暴露对大鼠海马不同亚区铜转运蛋白表达影响的研究

目的探讨铅暴露对大鼠海马不同亚区(CA1、CA3和DG区)铜转运蛋白表达的影响,为铅神经毒性的机制研究提供依据。方法选取45只SPF级SD雄性健康大鼠,随机均分为对照组(双蒸水)、低铅暴露组(0. 3 g/L乙酸铅)和高铅暴露组(0. 6 g/L乙酸铅),每组15只。采用自由饮水方式染毒,每周5 d,连续20周。Morris水迷宫测试大鼠的空间学习和记忆能力;电感耦合等离子质谱仪(ICP-MS)测定大鼠海马不同亚区铅和铜含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠海马组织病理学变化;实时PCR检测大鼠海马铜转运蛋白mRNA表达水平。结果与对照组相比,低和高铅暴露组大鼠的逃逸潜伏期明显延长,穿台次数明显减少,差异有统计学意义(P<0. 05或P<0. 01)。随着染毒剂量增加,大鼠海马不同亚区神经元排列紊乱,大量细胞死亡,细胞核固缩、破裂,其中CA1区损伤程度最小。低和高铅暴露组大鼠海马CA1、CA3和DG区中铅的含量明显高于对照组,且高铅暴露组CA3区高于低铅暴露组(P<0. 01);CA3和DG区中铜的含量分别是对照组的1. 08和1. 10倍、1. 12和1. 09倍(P<0. 01);CA1区铜转入蛋白CTR1、DMT1和铜转出蛋白ATP7A mRNA表达比对照组增加(P<0. 05或P<0. 01),CA3区内CTR1和DMT1 mRNA表达分别是对照组的1. 95和2. 84倍、2. 74和1. 20倍,ATP7A mRNA表达是对照组的0. 89和0. 51倍(P<0. 01),且与低铅暴露组相比,高铅暴露组CTR1 mRNA表达增加,ATP7A mRNA表达降低(P<0. 01);DG区CTR1和DMT1比对照组分别增加了0. 71和2. 17倍、4. 23和4. 32倍,ATP7A mRNA表达增加了3. 78和2. 01倍(P<0. 05或P<0. 01),上述差异均有统计学意义。结论铅暴露可引起大鼠海马不同亚区损伤,这可能与海马CA1、CA3和DG区铜含量增加及铜转运蛋白的异常表达有关。

铅暴露对小鼠大脑皮质中铜转运蛋白影响研究

目的探讨铅暴露对小鼠大脑皮质中铜水平、铜转运蛋白表达和氧化应激的影响。方法选择无特定病原体级成年雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、低铅暴露组和高铅暴露组,每组10只。低、高铅暴露组小鼠每天分别予饮用质量浓度为250和500 mg/L的醋酸铅饮用水,对照组小鼠饮用双蒸水,共12周。染毒结束24 h后,采用Morris水迷宫和高架十字迷宫实验检测小鼠神经行为功能;分离小鼠大脑皮质,采用电感耦合等离子-质谱法检测铅和铜水平,组织化学法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)水平,蛋白质印迹法检测铜转运蛋白细胞色素C氧化酶合成物(SCO)1、SCO2、细胞色素C氧化酶组装蛋白11(COX11)的表达。结果与对照组比较,低、高铅暴露组小鼠逃避潜伏期均延长(P值均<0.05),穿台次数、开臂进入次数百分比和开臂滞留时间百分比均降低(P值均<0.05)。与对照组比较,低、高铅暴露组小鼠大脑皮质中铅和铜水平均增加(P值均<0.05),GSH-Px和CAT活力均降低(P值均<0.05),SCO1相对表达水平均增加(P值均<0.05)。与低铅暴露组小鼠比较,高铅暴露组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),大脑皮质中GSH-Px和CAT活力均降低(P值均<0.05),MDA水平和SCO1、SCO2相对表达水平均增加(P值均<0.05)。结论铅暴露可导致小鼠大脑皮质中铜水平与铜转运相关蛋白的表达量增加,诱导氧化应激导致中枢神经系统损伤,从而导致小鼠神经行为异常。

清代云贵地区的矿务管理与地方行政——以厂员、店员、运员为中心

以往研究对于清代滇铜黔铅开发与云贵地方行政、边疆治理之间的关系缺乏应有的关注。本文从矿务管理者(即充任厂员、店员、运员的云贵地方官)切入,分析清代滇铜黔铅矿务管理与云贵地方行政之间的关系,探讨清代矿务管理对地方行政的作用与影响,以期全面认识清代滇铜黔铅开发。