云南黄连自然资源及其保护问题的研究

目的系统调查研究云南黄连的资源分布、生物学和生态学特性、利用历史和现状,为科学保护和合理开发利用这一传统地道药材提供基础资料。方法室内文献资料和标本查阅、药用民族植物学调查和野外考察相结合的方法。结果研究报道云南黄连的生物学和生态学特性、生长发育规律、自然分布特点和利用历史及现状。结论应加强保护野生种质资源和合理开发利用这一药用植物。

云南黄连的生物学、生态学特性与地理分布研究

本文系统调查研究了云南黄连 (CoptisteetaWall.)的繁殖式样、物候和生命周期 (lifecycle)等主要生物学特性 ;生境要求、群落类型及结构特征等生态学习性以及资源分布状况。通过研究发现 :云南黄连兼具有性生殖和无性繁殖 ,在自然条件下 ,居群数量增长以发达的地下营养繁殖体 (称为“觅养枝”)行无性繁殖为主 :高黎贡山西坡居群 ,特别是野生居群的一些个体 ,能以有性生殖方式繁育实生苗 ,另外一些个体和东坡居群的几乎所有个体都以营养繁殖方式繁育无性系小株。该物种每一个体开花、结实虽然正常 ,但种子有长达半年的胚后熟过程 ,加上较低的种子传播效率 ,实生苗在居群中只有很少的比例。成年植株的花芽在 7月开始分化 ,次年 1～ 2月开花 ,5月种子成熟 ,完成生活史 ,个体生命周期则长达 1 0多年。本种以小居群规模分布在狭小、呈片断化的特殊生境中 ,生态位极其狭窄 ,基本限于在温凉湿润的常绿阔叶林下陡坡生长。土壤和群落小气候因子对其自然分布起着至关重要的作用。云南黄连为中国 -喜马拉雅特有种 ,野生居群已极为罕见 。

不同海拔云南黄连生物量和主要有效成分变化

研究了不同海拔(2100～2700m)下,野生和人工栽培云南黄连的生物量、主要有效成分含量及产量.结果表明:野生云南黄连根茎和根生物量沿海拔梯度呈上升趋势,但无显著性差异(P>0.05);人工栽培云南黄连根茎生物量平均值在海拔2600m和2700m处分别为87.5kg.hm-2和97.0kg.hm-2,显著高于海拔2300m处(34.8kg.hm-2,P<0.05),且海拔2300、2600和2700m的人工栽培云南黄连根茎和根生物量均大于野生云南黄连,但无显著性差异(P>0.05).野生云南黄连的根茎和根生物量均与全株生物量呈显著正相关.野生云南黄连根茎和根小檗碱含量在海拔2700m处最高,分别为4.60%和1.93%;根茎巴马汀和药根碱含量、根药根碱含量在海拔2600～2700m处最高;根巴马汀含量在2300m处最高.人工云南黄连根茎和根小檗碱含量在海拔2600m处最高,分别为4.41%和1.90%;根茎巴马汀含量,根小檗碱、巴马汀和药根碱含量在海拔2600～2700m处最高;根茎药根碱含量在海拔2300m处最高.海拔2600～2700m处野生云南黄连根茎和根中各有效成分产量显著高于海拔2100和2300m处(P<0.05).野生云南黄连分株的根茎生物量、根生物量、叶生物量、总生物量、高度和冠幅沿海拔梯度呈先升后降趋势.增大种植密度和加强人工管理可以提高云南黄连生物量和主要有效成分产量.

濒危药用植物云南黄连传粉生态学研究

云南黄连为中药材黄连的原植物之一,为国家二级濒危保护植物。通过对云南黄连的开花物候、花部特征、繁育系统及传粉方式进行观察研究,以探讨云南黄连濒危机制,为其种质资源保护及人工抚育奠定基础。结果表明:(1)云南黄连的花期从12月份起至第二年的3月份,花期长达4个月,花序开花可持续45～60d,同一花序上不同花的开花时间相隔1～3d,单花花期可持续40～45d。(2)云南黄连为多歧聚伞花序,苞片包被花芽,花两性,雄蕊和心皮多数。(3)云南黄连的花粉-胚珠比(P/O)为9 000左右,杂交指数(OCI)值为4或5,为自交亲和但需要传粉者完成传粉的兼性异交型繁育系统,并存在无融合生殖现象。

云南黄连中非生物碱类化学成分的研究

对黄连属植物云南黄连Coptis teeta wall.根茎的乙醇提取物进行反复硅胶、凝胶、反相柱色谱和制备型高效液相色谱分离纯化,运用波谱学方法鉴定了12个化合物,分别为3,5,7-三羟基-6,8-二甲基黄酮(3,5,7-trihydroxy-6,8-dimeth-ylflavone,1),阿魏酸(ferulic acid,2),Z-咖啡酸硬脂醇酯(Z-octadecyl caffeate,3),原儿茶酸(protocatechuic acid,4),丹参素甲酯(methyl-3,4-dihydroxyphenyl lactate,5),3,4-二羟基苯乙醇(3,4-dihydroxy phenethyl alcohol,6),3,5-dihydroxyphenethyl al-cohol-3-O-β-D-glucopyranoside(7),(+)-落叶松树脂醇[(+)-lariciresinol,8],woorenosideⅠ(9),woorenosideⅡ(10),longi-folroside A(11),(+)-syringaresinol-4-O-β-D-glucopyranoside(12)。所有化合物均为首次从云南黄连中得到,其中化合物1,4,7,11首次从该属植物中得到。

HPLC鉴别西藏黄连和云南黄连中的生物碱

目的建立鉴别西藏黄连和云南黄连的方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil C18(150 mm×6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.02 mol.L-1KH2PO4溶液(30:70,内含SDS 1.275 g.L-1),流速1 ml.min-1,检测波长268 nm,柱温30℃。结果云南黄连中非洲防己碱、药根碱和巴马汀的含量明显高于西藏黄连,且含少量的表小檗碱,西藏黄连中表小檗碱的含量未达检测限。结论非洲防己碱、药根碱和巴马汀可以作为鉴别西藏黄连与云南黄连的特征性成分。

云南黄连的传统种植及其在生物多样性保护中的价值

运用民族植物学原理,采用野外面上调查、定点社区调查和文献研究相结合的方法,调查了云南西北部高黎贡山地区傈僳族对云南黄连(Coptisteeta)的混农林种植历史和方式,总结了他们认知、利用、管理和保护这一名贵药用植物的传统知识和经验及其与生物多样性保护的关系。结果表明:130年前,傈僳族为了持续利用云南黄连,以原始宗教信仰为基础,逐渐形成了对云南黄连种植森林的禁忌崇拜,通过“习惯法”、“头人”调解等来规范对云南黄连的种植与管理,形成了一套行之有效、并且具有一定科学意义的种植、抚育和采收的黄连混农林可持续利用种植系统。除非森林毁坏,这种农地没有休耕期,傈僳族超过50%的现金收入来源于云南黄连种植。相比之下,当地其他几种传统的土地利用方式下的物种多样性低得多,比如,几乎没有乔木层,灌木的种类和盖度较低等。草本层除作物外,其他植物被挤到地角和田边。这种种植方法是使当地群众经济利益和生物多样性保护得到兼顾和协调发展的一个范例,对于当地生物多样性的保护和经济植物的可持续利用起到了推动作用。

HPLC法同时测定云连药材中6种生物碱的含量

目的:建立同时测定云连药材中6种生物碱含量的方法。方法:色谱柱为Xtimate～(TM)C_(18),流动相为30 mmol/L碳酸氢铵溶液(含0.1%三乙胺和0.7%氨水)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果:药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的检测质量浓度线性范围分别为0.85～16.96 mg/L(r=0.999 9)、1.25～24.96 mg/L(r=0.999 8)、2.05～40.96 mg/L(r=0.999 9)、3.65～72.96 mg/L(r=0.999 9)、2.88～57.60 mg/L(r=0.999 9)、13.25～264.96 mg/L(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3.0%;加样回收率分别为97.14%～102.14%(RSD=1.93%,n=6)、97.00%～102.00%(RSD=2.06%,n=6)、98.18%～101.82%(RSD=1.79%,n=6)、96.15%～101.28%(RSD=2.06%,n=6)、96.88%～101.88%(RSD=1.87%,n=6)、99.31%～103.76%(RSD=1.89%,n=6)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于云连药材中6种生物碱含量的同时测定。

云南黄连花粉活力和柱头可授性研究

通过扫描电子显微镜观察花粉粒的形态特征,采用I2-KI染色法测定云南黄连花粉活力,并通过联苯胺+过氧化氢反应液和3%的过氧化氢测定其柱头可授性。结果表明:云南黄连的花粉粒为近圆球形,具有萌发孔,表面具有刺状雕纹;花粉活力一天中最强的时间段是13∶30—15∶30,最强的时期是散粉时期;I型(雌蕊长于雄蕊)的云南黄连柱头可授性高于II型(雄蕊长于雌蕊)的。在散粉初期,云南黄连普遍具有较高的柱头可授性。

不同生态区云南黄连居群的染色体核型比较

采用根尖压片和卡宝品红染色法,对分布于高黎贡山的东、西坡不同生态带的8个云南黄连居群进行染色体核型比较分析。结果表明,8个居群染色体数目均为2n=2x=18,核型基本一致,除东坡一个居群为3A型外,其余均为2A型;总体上同一生态区域内各居群的核型表现出较大的相似性,但不同生态区域的居群间却存在较大的差异,主要为近端部和端部着丝点染色体的有无及数目在东西坡居群间存在较大变化;东坡居群的不对称程度均较西坡高。

云南黄连的研究进展

就云南黄连的植物学形态特征、生境特征、资源现状、引种驯化、栽培技术及采收加工等进行了综述,并针对云南黄连资源现状,对云南黄连亟待解决问题进行了探讨,旨在为深入研究云南黄连奠定基础。

不同采收期云南黄连中有效生物碱含量测定

通过比较不同采收季节云南黄连根茎、须根、叶中3种生物碱的含量,确定适宜的采收时间。采用高效液相色谱法,以云南黄连主要有效成分小檗碱、药根碱、巴马汀含量为评价指标,研究7个不同采收时间段云黄连根茎、须根、叶中有效成分含量变化,得出有效成分在根茎中含量最高,须根次之,叶片最低;有效成分在药用部位根茎中的含量在10月及11月最高,云南黄连的最佳采收期为10～11月的结论。

西藏黄连和云南黄连原植物的研究

通过对西藏黄连和云南黄连的产区调查研究,首次揭示了两者之间在植物形态特征上的区别,并与文献所载的印度黄连加以比较,澄清了长期以来认为西藏黄连和云南黄连为同一植物的问题。

雅连和云连中生物碱的含量测定

目的:分析雅连和云连在质量标准方面的区别,指导雅连和云连的质量标准制定。方法:采用高效液相色谱法。结果:雅连中含有表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱4个生物碱,云连中则含有黄连碱、巴马汀和小檗碱3个生物碱,未发现药根碱和表小檗碱。结论:利用高效液相色谱法比较雅连和云连中的生物碱种类并利用其种类的差异可为区分黄连品种提供依据。

云南五种毛茛科植物的核形态研究兼论星果草属和鸡爪草属的系统位置(英文)

本文对产于云南的5种毛茛科植物进行了核形态研究。升麻(Cimicifuga foetida L.)的静止核和有丝分裂前期染色体分别属于复杂中央染色微粒型和中间型,中期染色体大,核型公式为2n=16=10m+4sm+2st;滇川翠雀花(Delphinium delavavi Franch.)染色体较大,核型公式为2n=16=4m+6sm+6st;星果草(Asteropyrum peltatum(Franch.)Drumm.et Hutch.)的静止核和分裂前期染色体分别为复杂中央染色微粒型和中间型,中期染色体较大,为R型,核型公式为2n=16=10m+4sm+2st;云南黄连(Coptis teeta Wall.)的静止核为简单中央染色微粒型和复杂中央染色微粒型的过渡类型,分裂前期染色体为近基型和中间型的过渡类型,中期染色体较小,为C型,核型公式为2n=18=14m+4sm;粉背叶人字果(Dichocarpum hypoglaucum W. T.Wang et Hsiao)的静止核和前期染色体分别属于简单中央染色微粒型和近基型,中期染色体很小,豆状,T型,数日为2n=24。其中星果草的核型、粉背叶人字果的染色体数目、滇川翠雀花和云南黄连的染色体数日和核型为首次报道。本文还指出了张芝玉认为鸡爪草属(Calathodes)的染色体属于T型的观点是错误的。鸡爪草属的染色体属于R型。根据上述结果并结合有关资料,本文重点讨论了星果草属和鸡爪草属的系统位置,认为星果草属与黄连属和人字?

雅连、味连和云连愈伤组织诱导及培养条件的优化

以雅连、味连和云连的茎段和叶片为外植体诱导愈伤组织,优化培养条件.结果表明:以带叶柄叶片为外植体愈伤组织诱导率最高,为87.5%;将外植体用乙醇(体积分数75%)浸摇30 s后用氯化汞(体积分数0.1%)浸摇10 min时雅连和云连外植体污染率最低,分别为16%和19%;将外植体用乙醇浸摇30 s后2次用氯化汞浸摇10 min时味连外植体污染率最低,为10%;质量浓度0.5 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸与质量浓度2.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤组合适于雅连愈伤组织诱导,质量浓度0.5 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、质量浓度2.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤和质量浓度0.5 mg/L萘乙酸组合适于味连和云连愈伤组织诱导;在黑暗、温度(25±2)℃和湿度60%~70%中愈伤组织诱导率最高,为74%.优质的黄连愈伤组织培养体系的建立,为高效且遗传稳定性好的黄连再生体系的建立奠定基础.

HPLC法同时测定云黄连中四种生物碱的含量

目的:建立同时测定云黄连中四种生物碱含量的高效液相色谱方法。方法:采用Agilent ZORBAX Extend-C_(18)(250mm×4.6 mm,5μm),流动相:0.05 mol·L^(-1)KH_2PO_4(含0.2%三乙胺,用H_3PO_4调pH至2.0):乙腈为75:25,流速:1.0 ml·min^(-1),检测波长345 nm,柱温30℃,进样量10μl。结果:药根碱、黄连碱、巴马汀及小檗碱分别在0.012 6～0.126 0、0.025 1～0.251 0、0.012 6～0.126 0及0.137 6～1.376 0μg范围内呈良好线性关系(r≥0.999 4);四种生物碱的平均回收率(n=9)分别为99.49%、99.02%、98.83%、99.08%;RSD分别为1.62%、1.20%、1.36%、1.39%。结论:该方法简便、准确,分离效果好,可用于云黄连的质量控制。

施用磷肥与复合肥对云黄连生长性状、产量和品质的影响

【目的】药用植物施肥措施的研究对于提高药材产量、保证药材品质均具有重要的意义。【方法】采用林下随机区组试验设计,测定施用磷肥和复合肥对云黄连生长性状指标、产量和品质的影响。【结果】磷肥的单独施用(35 kg/hm2)对云黄连生长的促进作用较小,而磷肥与复合肥混合施用[25 kg/hm2过磷酸钙和10 kg/hm2复合肥m(N)∶m(P)∶m(K)=18∶9∶5]可显著促进云黄连生长(P<0.05)。【结论】在保证云黄连优良品质的前提下,磷肥与复合肥混合施用能极显著地提高产量。本研究可为制定合理的云黄连规范化栽培管理措施提供科学的理论依据和实践基础。

云黄连根化学成分的研究

目的研究云黄连根的化学成分。方法云黄连根茎甲醇提取物乙酸乙酯部位采用硅胶柱、薄层色谱和制备型HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到14个化合物,分别鉴定为methyl orsellinate(1)、7⁃hydroxy⁃6⁃methoxy⁃2H⁃1⁃benzopyran⁃2⁃one(2)、豆甾⁃4⁃烯⁃3⁃酮(3)、阿魏酸甲酯(4)、berbithine(5)、3,5,7⁃三羟基⁃6,8⁃二甲基黄酮(6)、3,4⁃二羟基苯乙醇(7)、8⁃oxyberberine(8)、药根碱(9)、巴马汀(10)、表小檗碱(11)、小檗碱(12)、coptisonine(13)、黄连碱(14)。结论化合物1~4为首次从该植物中分离得到。

云南黄连市售品质量评价

目的建立测定云南黄连中黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱等单体生物碱和总生物碱含量的高效液相色谱（RP-HPLC）法和紫外分光光度（UV）法,比较不同商品来源云南黄连质量的差异。方法 HPLC法采用色谱柱Venusil MP C_（18）柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.2%冰醋酸（三乙胺调p H=5.05）梯度洗脱,检测波长345 nm;UV法于349 nm波长处测定总生物碱吸光度。联合上述方法对10批云南黄连药材进行测定,并对测定结果进行聚类分析。结果黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱进样量分别在0.200 0～2.000 0,0.092 4～0.924 0,1.278 0～12.780 0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r≥0.999 5）,平均加样回收率依次为98.61%,97.35%,99.03%,RSD分别为1.28%,1.52%,1.19%（n=6）。UV法测总生物碱质量浓度在5.112～25.560μg/m L范围内与吸光度呈良好的线性关系。采用聚类分析能将不同产地的10批云连药材分为3类。不同地区商品云南黄连生物碱含量存在显著性差异。结论该法准确、可靠、重复性好,对市场上云南黄连的质量状况起到良好的评价作用,可为进一步系统研究云南黄连奠定基础。