蛹虫草产β-葡萄糖苷酶与α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性分析及转化人参皂苷Rg1与Rc应用

通过鉴定筛选得到1株高产β-葡萄糖苷酶的长白山虫草属真菌蛹虫草。研究碳源、氮源及pH值对菌株产β-葡萄糖苷酶、α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶、虫草酸与生物量的影响规律,从而获得高产生物活性物质的培养条件,并对蛹虫草转化人参皂苷Rg1与Rc的路径与转化率进行了研究。采用紫外检测法测定β-葡萄糖苷酶与α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活力,超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法鉴定转化产物中人参皂苷的组成,利用高效液相色谱法测定虫草素含量及人参皂苷的转化率。结果表明:蛹虫草在碳源为纤维二糖、氮源为牛肉膏、pH 8、培养120 h条件下有较高β-葡萄糖苷酶活力((74.70±0.09)U/mL)。在碳源为乳糖、氮源为蛋白胨、pH 4、培养72 h条件下有最高的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活力((11.55±0.01)U/mL)。蛹虫草转化人参皂苷Rg1的路径为Rg1→Rh1和Rg1→F1,转化Rc路径为Rc→Rd→Rg3→CK和Rc→CMc。经过168 h的转化,人参皂苷Rg1转化率为54.9%,Rc转化率达到83.44%。本研究为提高药食两用真菌蛹虫草生物转化人参皂苷效率提供了理论基础,也为蛹虫草和人参食品、药品开发提供了一定理论支持。

HPLC法测定蛹虫草转化杜仲的主产物含量及单因素优化

目的：创立HPLC法同时测定蛹虫草转化杜仲发酵产物中虫草素和松脂醇二葡萄糖苷两种有效成分的分析方法,并对影响虫草素和松脂醇二葡萄糖苷产量的培养基及条件进行优化。方法：采用Agilent TC-C18（250 mm×4.6mm,5μm）,柱温20℃,紫外测定波长277 nm,水（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,进样体积10μL。通过单因素试验初步优化蛹虫草转化杜仲的培养基和培养条件。结果：在该色谱条件下,虫草素、松脂醇二葡萄糖苷分别在0.0046-0.0690（r=0.9990）,0.0270-0.4050（r=0.9990）内线性关系良好,加样回收率95%-105%,RSD〈2%。蛹虫草转化杜仲发酵培养的最佳条件为添料量20%、生长因子VE、接种量40%、培养温度25℃、培养时间18 d。结论：建立的HPLC法精密度、重复性及稳定性均良好,结果准确,可为蛹虫草转化杜仲发酵产物质量标准控制提供可靠的检测依据,并对蛹虫草转化杜仲的规模化生产提供参考。

蛹虫草菌糠对黄粉虫生长发育的影响

以麦麸、玉米面、蛹虫草菌糠为原料,配制成7种不同比例的饲料饲养黄粉虫,观察黄粉虫的生长发育情况并测定其各项经济指标(幼虫体长、体重、头宽、蛹重、化蛹率、蛹历期、幼虫及蛹的死亡率、孵化率、幼虫历期、羽化率)的影响。结果表明:不同处理的蛹虫草菌糠对黄粉虫的体重、头宽、蛹重、化蛹率、幼虫历期有极显著影响,但对体长、蛹历期、幼虫死亡率、孵化率、羽化率无显著影响;饲料中添加30%的蛹虫草菌糠对黄粉虫头宽、蛹重、化蛹率、孵化率、羽化率、死亡率等指标影响效果显著。

富硒蛹虫草对小鼠降血脂和抗氧化作用的影响

目的探讨富硒蛹虫草的降血脂和抗氧化作用。方法昆明种雄性小鼠60只,随机分4组(n=15只/组):正常对照组、高脂模型组、普通蛹虫草组、富硒蛹虫草组。用不同的饲料持续喂养5周,每周的固定时间称量小鼠体质量1次,第5周断头取血后解剖小鼠,检测血清总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果富硒蛹虫草组与高脂模型组相比,T-CHO和TG的含量降低,HDL-C的含量升高,均达到了显著水平(P<0.05);LDL-C含量降低(P>0.05);GSH-Px和SOD活性升高,MDA含量降低,均达到了显著水平(P<0.05)。并且富硒蛹虫草的降血脂与抗氧化作用均高于普通蛹虫草。结论富硒蛹虫草具有良好的降血脂和抗氧化作用。

人工培养蛹虫草多糖的分离纯化及其结构的初步研究

目的人工培养蛹虫草多糖类成分的提取与纯化。方法采用SephadexG 10 0柱色谱法进行了分离纯化 ;通过理化常数测定、化学和光谱分析等方法研究了其化学结构特征。结果分离得到CPS 1、CPS 2和CPS 33种多糖 ,其单糖组成分别为 :CPS 1:鼠李糖 木糖 甘露糖 葡萄糖 半乳糖 (1∶6 .4 3∶2 5 .6∶16 .0∶13.8) ;CPS 2 :鼠李糖 葡萄糖 半乳糖 (1∶4 .4 6∶2 .4 3) ;CPS 3为只含葡萄糖的均一多糖。 3种多糖的分子量分别为 2 30 0 0、12 90 0和 5 0 0 0。CPS 1主要含有β糖苷键 ,CPS 2和CPS 3主要含有α糖苷键。 结论CPS 1为一种含有 5种单糖 ,糖苷键为 β构型的多糖 ;CPS 2是一种含有 3种单糖 ,糖苷键为α构型的多糖 ;CPS 3是一种仅含葡萄糖。

蛹虫草药理作用及化学成分研究进展

随着蛹虫草市场需求的不断扩大,蛹虫草作为一种药食两用菌已经被广泛接受。文章从蛹虫草的药理作用、化学成分及人工栽培3方面展开论述,为蛹虫草进一步研究与开发提供一定的理论依据。

高效液相色谱法同时测定蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量

采用高效液相色谱法建立同时测定蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法,并对样品提取条件进行优化。以超纯水-甲醇(84:16,V/V)为流动相,流速1.0mL/min,经色谱柱XBridgeTM C18(4.6mm×250mm,5μm)分离,柱温30℃,进样量10μL,紫外检测波长254nm。腺苷和虫草素的空白回收率分别为99.13%和99.18%,加标回收率分别为95.78%和94.35%。经单因素及正交试验,最终确定的优化提取条件为提取液为水、提取时间40min、提取温度30℃、超声功率700W、提取次数1次。样品前处理及分析方法操作简便、回收率高、重复性好。

蓝光诱导蛹虫草菌丝类胡萝卜素的积累

蛹虫草(CordycepsmilitarisL·)在培养时受蓝光诱导,其菌丝体中有高产量的类胡萝卜素积累。当温度为25℃且蓝光光照强度为6·5μmol·m-2·S-1时,菌丝体的类胡萝卜素含量在含蚕蛹粉的培养基上24h达到最高峰的495·5μg/gFW;而在不含蚕蛹粉的培养基上72h才达最高峰414·1μg/gFW。蛹虫草菌丝类胡萝卜素的积累也受蓝光光照强度的影响,最适光照强度可随培养时间的不同而有所变化。此外,黑暗培养时间的长短和温度也可共同影响蛹虫草菌丝产类胡萝卜素时对蓝光的敏感性。

超高压技术提取北虫草多糖的工艺研究

在常温条件下使用超高压技术提取北虫草多糖,采用正交试验设计对提取工艺条件进行优化。结果表明最优提取工艺条件为溶剂45%乙醇、压力400MPa、料液比1:35(g/ml)、提取时间5min,此条件下北虫草多糖提取率为10.13%。该方法不仅可以快速高效地提取出有效成分,而且保持其生理活性,为天然产物有效成分的提取提供了一种崭新的提取方法。

北虫草培养基中多糖的闪式提取工艺研究

为实现北虫草[Cordyceps militaris(L.Fr.)Link]培养基的高效利用,采用闪式提取技术从北虫草培养基中提取多糖。通过单因素试验考察了闪式提取的液料比、提取时间、转速对提取效果的影响,利用正交试验法,优化了北虫草培养基中多糖提取的工艺。结果表明,提取时间和转速对多糖提取效果有显著影响,最佳提取工艺为液料比35∶1(m L∶g),提取时间12 min,转速8 000 r/min。在该条件下,闪式提取多糖得率为3.52%,略高于传统热水回流提取的得率,且只需在室温下进行,提取时间大大缩短,说明闪式提取是一种快速有效提取北虫草培养基中多糖的方法。

药用真菌蛹虫草遗传多样性的SCoT分析

目的：研究药用真菌蛹虫草的种质资源遗传多样性。方法：采用非加权平均距离聚类法（UPGMA）结合主坐标分析法（PCoA）对27株不同来源的蛹虫草菌株的SCoT分子标记条带进行研究。结果：从36个引物中筛选出8条重复性好、条带清晰的引物进行PCR扩增,共扩增出59条条带,其中55条具有多态性,多态性比率为94.33%,平均多态性条带数为6.875。经NTSYSpc软件分析,27株蛹虫草菌株间的遗传相似系数在0.383～0.933之间,说明SCoT标记能够揭示蛹虫草种质间较高的遗传多样性。通过UPGMA法和PCoA法分析,27株蛹虫草分别分成6组和3组,菌株的遗传多样性与其来源有一定的相关性。结论：SCoT分子标记适用于药用真菌蛹虫草种质资源的多样性研究。

蓝光诱导下蛹虫草胞内多糖的单糖组成及虫草素和虫草多糖含量分析

目的:探讨蓝光诱导对蛹虫草Cordyceps militaris L.菌丝体和子实体中胞内多糖的单糖组成以及虫草素和虫草多糖含量的影响。方法:以蛹虫草为材料,使用气相色谱检测蓝光照射144 h后菌丝体及子实体中多糖的单糖组成;并在蓝光照射下的不同时间段分别取样,以检测菌丝体及子实体中虫草素和虫草多糖的含量。同时观察蛹虫草菌丝体和子实体在蓝光照射诱导过程中的生长情况。结果:蛹虫草菌丝体多糖是一种含有4种单糖的杂多糖;子实体多糖是一种含有5种单糖的杂多糖。在菌丝体多糖的检测试验中,无论是蓝光照射还是黑暗培养,两组的多糖含量变化规律几乎相似,都是在一定的时间段开始发生变化。在子实体多糖的检测中,无论是蓝光照射还是白光对照,两组多糖含量的变化规律也基本相同。在菌丝体以及子实体虫草素的检测中,虫草素含量在两组实验中均呈现出明显的上升趋势。结论:蓝光诱导对蛹虫草胞内多糖中单糖的组成种类和数量有一定的影响。而且蓝光诱导对蛹虫草中虫草素和虫草多糖含量的提高有一定的促进作用。蓝光有利于蛹虫草的形态建成,促进子实体的分化和生长发育。该项研究首次报道了蓝光诱导对蛹虫草多糖中单糖组成的种类和数量的影响,为进一步研究蓝光诱导对蛹虫草活性物质的代谢奠定基础。

北虫草不同部位超氧化物歧化酶(SOD)酶活力的比较

目的:对北虫草菌丝体、子座的超氧化物歧化酶(SOD)酶活力进行对比实验,在水提取和丙酮分级提取两种方法中选择效果更好的一种。方法:利用水、丙酮分别对北虫草不同部位的超氧化物歧化酶(SOD)进行提取,邻苯三酚自氧化法检测其酶活性。结果:北虫草菌丝体的SOD酶活性和蛋白含量均明显高于子座,并且丙酮分级提取的效果更优。结论:北虫草各部分的SOD酶活性和蛋白含量各不相同,不同提取方法效果也有差异。

蛹虫草培养液成分研究(Ⅰ)

目的对人工蛹虫草培养液的化学成分进行研究。方法采用常压、加压硅胶柱色谱、制备色谱进行分离 ,通过理化和波谱分析方法鉴定化合物结构。结果目前从氯仿部分分离得到 9个化合物 ,鉴定了其中的 5个化合物 ,分别为 :环 (苯丙氨酸 脯氨酸 ) [cyclo (L phenylalanyl L prolyl) ,Ⅰ ];环 (亮氨酸 脯氨酸 ) [cyclo (L leucyl L prolyl) ,Ⅱ ];环 (缬氨酸 脯氨酸 ) [cyclo (L valyl L prolyl) ,Ⅲ ];环 (丙氨酸 脯氨酸 ) [cyclo (L alanyl L prolyl) ,Ⅳ ];7,8 二甲基 异咯嗪 (7,8 dimethyl iso allox azine ,Ⅴ )。结论这 5个化合物均是从蛹虫草培养液中首次分离 ,且化合物Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ

木耳虫草胶囊对高脂血症大鼠的降血脂作用

采用高脂饮食法复制高血脂动物模型。研究木耳虫草胶囊对饮食性高脂血症大鼠的降血脂功能。动物试验设置空白对照组、高脂模型对照组、木耳虫草胶囊-低、中、高剂量处理组;木耳虫草胶囊-低、中、高3个剂量组分别灌胃27.0、54.0、81.0mg·kg^(-1)·d^(-1)木耳虫草胶囊28d,空白对照组和高脂模型对照组灌胃等体积生理盐水;观察木耳虫草胶囊对高脂血症大鼠血清、肝脏脂质代谢和小肠吸收代谢的影响。与高脂模型对照组比较,木耳虫草胶囊低剂量组低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)降低,中剂量组总胆固醇(TC)降低,高剂量组TC、LDL-C、甘油三酯(TG)均显著降低(P<0.01),同时各处理组血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)与模型对照组的HDL-C没有差异;中、高剂量组能极显著降低动脉粥样硬化指数(AI);各处理组的肝脏指数、肝小叶结构和脂肪变性的严重程度较模型对照组改善;各处理组的小肠绒毛高度和隐窝深度的比值较模型组明显减小。木耳虫草胶囊具有辅助降低血脂、胆固醇、甘油三酯功能和降低动脉粥样硬化指数的作用,并可部分改善高脂饮食对肝脏的损害,降低绒毛高度和隐窝深度的比值,从而减少饲料中脂肪的吸收。

蛹虫草子实体和蛹虫草根醇提物抗氧化活性的对比

蛹虫草根作为人工蛹虫草的副产品未得到有效利用。本试验以10 mL体积分数70%乙醇分别提取1 g蛹虫草子实体和蛹虫草根,分析了二者的醇溶性总糖、还原力和清除自由基的能力。结果表明:蛹虫草子实体的醇溶性总糖含量为蛹虫草根部2倍;蛹虫草根部醇提物还原力和清除DPPH自由基能力要明显高于蛹虫草孢子头子实体醇提物;后者清除羟自由基的能力稍强于前者。说明人工蛹虫草根有潜在的开发利用价值。

人工蛹虫草药材高效毛细管电泳指纹图谱研究

目的:利用高效毛细管电泳(HPCE)技术建立人工蛹虫草药材的指纹图谱。方法:采用50 cm×75μm毛细管柱,以0.5 mmol/L硼砂溶液为缓冲液,运行电压为20 kv,检测波长为254 nm,柱温25℃。结果:建立的指纹图谱中共有11个共有峰,且方法学考察符合规定的标准。结论:该法准确简便,可作为控制人工蛹虫草中药材内在质量的有效手段。

罐组式动态逆流提取蛹虫草多糖的工艺研究

目的建立罐组式动态逆流提取蛹虫草多糖的方法。方法通过单罐单因素实验,正交设计分析提取时间、提取温度和料液比对蛹虫草多糖提取的影响;设计罐组式动态逆流提取装置,重点探讨料液比和提取级数对多糖提取得率的影响。结果罐组式动态逆流提取虫草多糖的条件为:提取时间150 min,温度90℃,料液比1∶15和级数为5级,提取率88.8%,显著高于单罐提取率79.5%。结论蛹虫草多糖的罐组式动态逆流提取工艺节省能源,缩短生产时间,提取率较高。

人工培养蛹虫草高效液相色谱指纹图谱的初步研究

目的建立人工蛹虫草药材的高效液相色谱指纹图谱。方法利用Agilent ZOBAXSB-AqC18(250mm×4.0mm,5μm)色谱柱,甲醇5%～60%为流动相梯度洗脱,分析时间30min,检测波长260nm,进样量1μL,体积流量1.0mL/min;对样品超声提取条件以及流动相、检测波长等色谱条件进行了系统优化设计。结果建立的指纹图谱中有11个共有峰,且方法学考察符合规定的标准,并以"中药色谱图分析和数据管理系统"软件对11个人工蛹虫草样品进行了相似度评价。结论该法准确简便,可作为控制人工蛹虫草药材内在质量的有效手段。

反相高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷和虫草素的含量

建立一种新的反相高效液相色谱方法,用于蛹虫草中腺苷和虫草素的定性定量分析。样品经水超声提取,以终浓度20mmol/L柠檬酸、40mmol/L醋酸、20mmol/L三乙胺的混合溶液-乙腈(体积比98:2)为流动相,流速1.0mL/min,色谱柱CapcellpakC18(150mm×4.6mm,5μm)分离,柱温40℃,进样量10μL,紫外检测波长260nm。在此条件下,腺苷在1～1000μg/mL范围内有良好的线性关系(Y=33574X+54.526,R2=0.9999),检测限0.2μg/mL,回收率93.75%～96.90%,RSD为0.116%;虫草素在2～1000μg/mL范围内有良好的线性关系(Y=34385X+23.103,R2=1.0000),检测限0.2μg/mL,回收率92.03%～97.35%,RSD为0.104%。该方法样品处理简便、分离度高、杂质干扰小、回收率高、重复性好,能够对蛹虫草中腺苷和虫草素进行准确的定性定量分析。