The Mechanism of Cornus officinalis Total Glycosides and Cornus Polysaccharide on Myocardial Protection in Rats with Acute Myocardial Infarction

Objective: To investigate effects of Cornus officinalis Total Glycosides (COTG) and Cornus Polysaccharide (CP) on myocardial protection and on expression of mitochondria biogenesis related gene of acute myocardial infarction (AMI) rats, Materials and Methods: Ninety-six SD rats of SPF level were randomly divided into 5 groups: sham operation group, model group, preventive treatment group, COTG treatment group, CP treatment group, and there were 12 cases in each one. By legating the left anterior descending branch of coronary artery method, acute myocardial infarction model was established. The rat of sham operation group and model group was intragastric administered with physiological saline;other groups were given with corresponding drugs. The cardiac function, the myocardial infarct area, the expression of mitochondrial biogenesis genes such as PGC-1α, PGC-1β, NRF-1mRNA and GSK-3β mRNA, GSK-3β Protein Expression were analyzed. Results: The results revealed that compared with model group, myocardial infarction size, LVDs, LVDd, LVESV, LVEDP, and -dp/dt decreased;LVSP increased in preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p < 0.05);LVEDV increased in preventive treatment group (p < 0.05), PGC 1 alpha, and PGC 1 beta;the NRF-1 mRNA expression increased in preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p < 0.05). Compared with CP and COTG treatment group, PGClpha, beta PGC 1, the NRF-1 mRNA expression increased in preventive treatment group (p < 0.05). Compared with the sham operation group, GSK-3 beta mRNA and protein expression increased in model group, preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p < 0.05). Compared with model group, GSK-3 beta mRNA expression reduced in preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p Cornus officinalis total glycosides and Cornus polysaccharides can effectively protect myocardial mitochondria of acute myocardial infarction rats by activating GSK-3β signaling pathways, and reduce the myocardial infarct size, which has great significance for improving cardiac function.

Effects of Cornus Officinal Is Total Glycoside on Cardiomyocyte Apoptosis and Calcium Overload after Hypoxia/Reoxygenation Injury in Rats

Objective: To investigate the mechanism of Cornus officinalis Total Glycosides (COTG) on myocardial protection, by studying effects of COTG on cardiomyocyte apoptosis induced by hypoxia/reoxygenation and calcium concentration in rats. Methods: The myocardial cells of born 1-3d SD rats were isolated by enzyme digestion, cultured for 3 days. Cells were divided into five groups: Control group, H/R group, Cornus officinalis Total Glycosides low-dose group (LDG), Cornus officinalis Total Glycosides middle-dose group (MDG) and Cornus officinalis Total Glycosides high-dose group (HDG). Three drug groups were pretreated with different doses of Cornus officinalis Total Glycosides before hypoxia/reoxygenation treatment. The apoptotic rate was determined by flow cytometry assay, the intracellular free calcium concentration was examined by flow cytometry, and the ultrastructure of myocardial cells was observed under transmission electron microscope. Results: The results revealed that Cornus officinalis Total Glycosides pretreatment decreased apoptosis rate, but the effect of lower dosage is not significant. Furthermore, Cornus officinalis Total Glycosides can attenuate mitochondrial calcium overload, improve mitochondrial morphology and inhibit cardiomyocyte apoptosis caused by H/R. Conclusion: Cornus officinalis Total Glycosides pretreatment can inhibit cardiomyocyte apoptosis and calcium overload during H/R injury. However, the underlying mechanisms require us to further study.

山茱萸总苷抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞系HK-2凋亡和氧化损伤

目的探究山茱萸总苷(COG)调节E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路对高糖诱导的人肾小管上皮细胞系HK-2的凋亡和氧化损伤的影响。方法将人肾小管上皮细胞系HK-2分为对照组(control,5.5 mmol/L)、模型组(HG,30 mmol/L)、山茱萸总苷低、中和高剂量组(L-COG、M-COG、H-COG),加入Nrf2通路抑制剂后,HK-2细胞分为H-COG组、ML385组。CCK8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、活化的胱天蛋白酶(cleaved-caspase3)、Nrf2/HO-1通路蛋白表达,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)含量,ELISA法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、白介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果与对照组比较,模型组细胞活性、Bcl-2蛋白表达、GSH-Px及SOD活性明显降低,凋亡率、Bax、Nrf2、HO-1及cleaved-caspase3蛋白表达、ROS、IL-6、TNF-α含量明显增加(P<0.05);与模型组比较,L-COG、M-COG、H-COG组细胞活性、Bcl-2蛋白表达、GSH-Px、SOD活性明显增加,凋亡率、Bax、Nrf2、HO-1及cleaved-caspase3蛋白表达、ROS、IL-6、TNF-α含量明显降低(P<0.05)。与H-COG组比较,ML385组细胞活性、Bcl-2蛋白表达、GSH-Px活性、SOD活性明显增加,凋亡率、Bax及cleaved-caspase3蛋白表达、ROS、IL-6、TNF-α含量明显降低(P<0.05)。结论山茱萸总苷可能是通过抑制Nrf2/HO-1通路减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化应激和炎性反应,进而减轻细胞凋亡。

山茱萸总皂苷的提取分离与含量测定

目的 :考察不同提取方法对山茱萸总皂苷测定的影响 ,为准确测定山茱萸皂苷的含量提供可行方法 .方法 :①甲醇回流法 ;②乙醚脱脂 甲醇回流提取法 ;③超声法 ;④大孔树脂法 ;⑤乙醇回流法 .上述方法分别用人参皂苷Re、齐墩果酸作对照 ,比色法测定不同提取液中总皂苷的含量 .结果 :① ,② ,③和⑤提取法所测总皂苷含量分别为 :5 .95 % ,6 .98% ;2 .87% ,3.12 % ;3.80 % ,3.92 % ;6 .17%和8.13% .④法测定总皂苷含量为 1.5 2 %和 1.73% .结论 :不同提取方法对山茱萸总皂苷含量的测定有较大的影响 .

RP-HPLC法测定山茱萸环烯醚萜总苷中马钱苷和莫诺苷含量

目的建立反相高效液相色谱法测定山茱萸环烯醚萜总苷中马钱苷和莫诺苷含量的方法，为完善山茱萸环烯醚萜总苷的质量评价提供依据。方法色谱柱：Lichrosphere C18柱（4．6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-水梯度洗脱（0～12min，乙腈比例由10％增加到55％）；流速1.0mL／min；柱温30℃；检测波长240nm。结果马钱苷和莫诺苷分别在o．088-0．528μg（r=0.9998）和0.088-0．352μg（r=0．9995）之间范围内线性关系良好；平均回收率（n=6）分别为98．7％（RSD=1．3％）、98．6％（RSD=0.8％）。结论所建立的方法简便、准确、分离效果好、重复性好。可以用干控制山菜萤环烯醚萜总菩的席号．

7种山茱萸总皂苷提取分离方法效果比较

目的:考察不同提取方法对山茱萸总皂苷含量测定的影响。方法:分别采用无水乙醇回流提取、无水乙醇回流正丁醇萃取、体积分数为70%乙醇回流提取、体积分数为70%乙醇回流提取正丁醇萃取、水提取、超声波提取和超临界CO2提取方法,以人参皂苷Re作对照品,比色法测定提取液中山茱萸总皂苷的含量。结果及结论:不同提取方法对皂苷含量有较大的影响,超临界CO2提取技术无溶剂残留,操作温度低,对环境友好,提取效率高,皂苷含量是传统溶剂提取的1.5～2.0倍,有较好的应用前景。

山茱萸总苷抗类风湿关节炎免疫作用机理的初步研究

目的 :探讨山茱萸总苷抗Ⅱ型胶原 (CⅡ )诱导的类风湿关节炎的免疫作用机理。方法 :建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎 (CIA)大鼠模型 ,对山茱萸总苷对大鼠在免疫诱导期、关节炎急性期、慢性缓解期血清中CⅡ抗体的水平、腹股沟引流淋巴结细胞IFN γ的自发分泌和刺激性分泌以及淋巴结细胞的特异增殖能力的影响进行动态观察。结果 :山茱萸总苷对类风湿关节炎有明显的防治作用 ,特异性抑制免疫大鼠抗CⅡ抗体的产生、腹股沟淋巴结Th1型细胞因子IFN γ的分泌及细胞增殖。结论 :山茱萸总苷抗类风湿关节炎的免疫作用机理之一是抑制CⅡ特异性体液免疫和Th1型细胞免疫。

山茱萸总苷对刀豆蛋白A诱导免疫性肝损伤的保护作用

目的:观察山茱萸总苷(TGCO)对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:将60只C57BL小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、TGCOH组、TGCOM组、TGCOL组,每组10只;正常组和模型组以0.2 mL/10 g生理盐水灌胃,阳性对照组给予联苯双酯150 mg/kg灌胃,TGCOH组、TGCOM组、TGCOL组给予TGCO溶液460、230、115 mg/kg灌胃,1次/d,连续14 d。末次给药后2 h,正常组尾静脉注射生理盐水,其余各组尾静脉注射Con A制备小鼠免疫性肝损伤模型。8 h后称重,处死小鼠,计算各组小鼠肝、脾系数并取肝组织进行HE染色观察病理学变化;检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;检测肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OTC)含量。结果:与模型组比较,各浓度TGCO组小鼠肝组织的病变程度较轻,血清ALT、AST水平及肝组织中TNF-α、IFN-γ、IL-1、IL-6、OTC含量均降低,肝组织中SOD水平升高(P<0.05)。结论:TGCO对免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与降低转氨酶,提高抗氧化能力和抑制TNF-α、IFN-r、IL-1、IL-6生成有关。

山茱萸籽总黄酮的响应曲面法优化微波辅助提取工艺的研究

目的:利用微波辅助提取技术对山茱萸籽总黄酮的提取工艺进行研究。方法:以芦丁为对照品,采用紫外-分光光度法测定山茱萸籽中总黄酮的含量,以总黄酮含量为考察指标,采用响应曲面优化法(RSM)优化山茱萸籽总黄酮的提取工艺。结果:优化的山茱萸籽总黄酮微波辅助提取工艺参数为:微波功率350W,乙醇体积分数50%,液料比20mL/g,提取时间13min。在此最佳条件下,山茱萸籽总黄酮的一次提取率为6.68%。结论:山茱萸籽含有较高的总黄酮含量,所确定的提取工艺提取率高、速度快、操作简便。

大孔吸附树脂纯化山茱萸总皂苷的动态洗脱条件研究

运用单因素试验和正交试验研究了山茱萸总皂苷在HPD-300大孔吸附树脂上的动态洗脱工艺,经极差分析和方差分析确定了其最佳操作条件。结果表明,最佳蒸馏水洗脱条件为:水洗流速1.0BV/h,用水量2.2BV,水洗时间2.2h;最佳洗脱剂洗脱条件为乙醇浓度50%,洗脱流速2.0BV/h,洗脱剂用量4.5BV。

星点设计-效应面法优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的制备工艺

目的:优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的制备工艺,并对其进行表征。方法:采用逆相蒸发法制备山茱萸总环烯醚萜苷脂质体。采用高效液相色谱法测定山茱萸总环烯醚萜苷脂质体中马钱苷和莫诺苷含量。以总皂苷(以马钱苷和莫诺苷总和计)包封率为指标,通过单因素试验筛选制备山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的主要工艺因素后,采用星点设计-效应面法优化药物与磷脂的质量比(药脂比)、胆固醇与磷脂的质量比(胆脂比)和水合介质pH值。利用达尔文激光粒径测定仪测定最优处方下所制脂质体的Zeta电位和粒径,并在透射电镜下观察其形态。结果:确定最优处方的药脂比为0.026、胆脂比为0.107、水合介质pH为5.78。所制3批脂质体的平均包封率为11.63%(n=3),与预测值11.48%的相对误差为1.29%;平均粒径为(80.87±0.27)nm,Zeta电位为(-13.60±5.32)mV,脂质体外观呈球形或类球形。结论:优化后山茱萸总环烯醚萜苷脂质体制备工艺简单,所制脂质体粒径较小。

三七总皂苷/山茱萸总皂苷组分对犬冠状动脉结扎缺血心肌的保护作用研究

目的观察三七总皂苷/山茱萸总苷组分(PNS/TGCO)不同剂量对犬冠状动脉结扎造成心肌梗塞模型的保护作用。方法杂种犬随机分为模型对照组,PNS/TGCO大(40 mg/kg)、中(20 mg/kg)、小(10 mg/kg)剂量组、血塞通胶囊组(20mg/kg)。采用结扎麻醉犬冠状动脉左前降支造成急性心肌缺血梗塞损伤,十二指肠给药后,可显著减少冠脉结扎所致的∑-ST、N-ST抬高,用硝基四氮唑蓝染色,观察心脏梗塞范围,检测血清中肌酸磷酸激酶(CPK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化。结果 PNS/TGCO组分大、中组可显著降低犬冠脉结扎后心肌缺血的程度,缩小心肌缺血的范围;显著降低犬冠脉结扎后血清LDH、CPK活性。结论 PNS/TGCO组分对急性心肌缺血犬具有明显的保护作用。

不同栽培品种山茱萸药材中多糖的含量测定

采用硫酸-苯酚法测定不同栽培品种山茱萸药材中多糖的含量.7个栽培品种33份样品测定结果显示,我国山茱萸产区的5个主流品种:椭圆形果型、圆柱形果型、长圆柱形果型、长梨形果型、短圆柱形果型中多糖的含量差异较小,山茱萸多糖可以作为山茱萸药材的质量控制指标,为山茱萸药材的质量评价提供依据.

基线等比增减设计法优选PNS/TGCO组分对实验性气虚血瘀型冠心病的影响研究

目的:初步探索三七总皂苷(PNS)和山茱萸总苷(TGCO)配伍治疗气虚血瘀型冠心病的作用及特点。方法:采用基线等比增减设计法拟定PNS/TGCO组合配比,观察不同比例组合的有效组分对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血的影响以及对正常小鼠耐缺氧时间的影响。结果:处方1、2、3及血塞通有一定改善大鼠心肌缺血程度的作用,处方4、5、6与对照组比较无显著性差异;处方3、4、5、6有一定抗小鼠缺氧的作用,处方1、2及血塞通组与对照组比较无显著性差异。结论:处方3既有一定改善大鼠心肌缺血的作用又有一定抗小鼠缺氧的作用,为PNS/TGCO治疗气虚血瘀型冠心病有效组分的最佳配比。

山茱萸总苷及其含药血清对MSCs增殖的影响

[目的]探讨山茱萸总苷及其含药血清对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。[方法]分离、培养大鼠MSCs,分别加入山茱萸总苷及其含药血清,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度山茱萸总苷及其含药血清对大鼠MSCs增殖的影响。[结果]大鼠灌胃1 h后采血所得含药血清以20%的浓度干预时具有最佳的促MSCs增殖作用,山茱萸总苷最佳促MSCs增殖浓度为625μg/mL。[结论]山茱萸总苷及其含药血清可促进大鼠MSCs增殖。

山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响

目的:观察山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响,探讨其抗心肌细胞凋亡的作用机制。方法:将原代培养3 d的心肌细胞采用液体石蜡封闭法建立缺氧/复氧模型,分为正常组、缺氧/复氧模型组(缺氧2 h/复氧1 h)及药物干预组(缺氧/复氧前24 h及缺氧同时给予山茱萸总苷预处理),药物浓度分别为0.1、1.0、10 g/L.。电镜下观察各组心肌细胞线粒体的形态。结果:与正常对照组比较,模型组心肌细胞线粒体肿胀、膜破裂、嵴溶解融合或有电子致密颗粒沉积,给予山茱萸总苷干预后,中、高剂量组心肌细胞超微结构损伤程度明显改善,肌纤维排列基本整齐规则、线粒体完整、嵴清晰及未见空泡形成,低剂量组与模型组差异不明显。结论:山茱萸总苷可以抑制缺氧/复氧损伤对乳鼠心肌细胞超微结构的破坏,保护线粒体,可能是通过阻断心肌细胞凋亡线粒体通路去实现对心肌细胞的保护作用。

大孔吸附树脂对山茱萸总黄酮的分离纯化研究

目的:研究并优化大孔吸附树脂分离纯化山茱萸总黄酮。方法:先以总黄酮含量为考察指标,从3种不同型号的树脂中筛选出分离纯化山茱萸总黄酮的最佳树脂,再对最佳树脂吸附工艺参数进行全面优化。结果:HPD-600型大孔吸附树脂对山茱萸总黄酮的吸附与解析性能较好,确定最佳洗脱条件为50%乙醇洗脱,溶剂用量5BV。结论:HPD-600型大孔吸附树脂可有效地分离纯化山茱萸总黄酮。

Box-Behnken设计-响应面法优化山茱萸叶总三萜提取工艺

目的:优化山茱萸叶总三萜提取工艺。方法:在山茱萸叶充分溶胀的基础上,采用加热回流法提取其总三萜。在单因素试验中考察乙醇体积分数、液料比、提取时间和提取次数对山茱萸叶总三萜含量的影响;以齐墩果酸为对照品,采用紫外-可见分光光度法测定总三萜含量。在单因素试验的基础上,固定提取次数为3次,以总三萜含量为响应值,以乙醇体积分数、液料比、提取时间为响应因素,采用Box-Behnken设计-响应面法优化山茱萸叶总三萜的提取工艺并进行验证。结果:山茱萸叶总三萜的最佳提取工艺为乙醇体积分数73%、液料比38∶1(mL/g)、提取时间60 min。3次验证试验结果显示,山茱萸叶总三萜的含量分别为6.92%、6.91%、6.84%,平均含量为6.89%(RSD=0.63%),与预测值(7.28%)的相对误差为5.36%。结论:优化的提取工艺稳定、可靠,可用于山茱萸叶总三萜的提取。

山茱萸的免疫药理研究——Ⅱ.总甙部分抑制免疫反应的体外效应

本文显示山茱萸总甙部分,体外抑制小鼠和人的混合淋巴细胞反应,抑制细胞毒性T细胞的诱导和增殖,抑制白细胞介素2受体表达,同时与环孢霉素A进行了比较。总甙部分对小鼠混合淋巴细胞反应的抑制效应,除剂量外,还与刺激和反应淋巴细胞来源小鼠种系有关,推测总甙部分影响主要组织相容性抗原。

超声波和溶剂法提取山茱萸中总皂甙的工艺研究

本文通过溶剂法和超声法对山茱萸中总皂甙的提取工艺进行了研究,以提取温度、提取时间、95%乙醇用量等为因素,选用L16(43×26)和L9(34)正交表进行试验。结果表明,超声波的提取效率高于溶剂提取,大大缩短提取时间,优化工艺条件是:提取温度为85℃,提取时间为120min,95%乙醇用量为50ml。在此条件下,总皂甙的提取效率较高,其水解产物人参二醇含量可达5.16mg/g。