白鲜皮免疫调节机制的网络药理学分析及验证

本试验旨在探究白鲜皮的免疫调节能力及其机制。通过TCMSP数据库筛选出11个白鲜皮活性成分,利用GeneCard数据库和OMIM数据库预测到318个相关联的靶点基因,通过对药物靶点的筛选,获得63个疾病与药物共同的靶点。通过Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶点网络。使用Perl计算机程序语言对GO功能富集结果进行筛选和KEGG通路富集分析。通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,用1.3、2.6、5.2 g/kg BW(按生药量计)的白鲜皮提取物灌胃免疫抑制小鼠2周后检测小鼠体重、免疫器官指数、血清细胞因子含量、血常规指标。结果显示:白鲜皮中的黄芩素、β-谷甾醇、木犀草素、白鲜明碱、前茵芋碱、槲皮素等化合物通过调节AKT1、IL6、IL1B、JUN、PTGS2、VEGFA等重要靶点,参与调节白细胞介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路,进而起到免疫调节的效果。小鼠免疫抑制试验发现,相比模型组,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物对小鼠的体重没有产生显著影响(P>0.05),但极显著增加了小鼠的肝脏指数和脾脏指数(P<0.01);此外,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物极显著提高了小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白A(IgA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P<0.01)。本研究展现了白鲜皮免疫调节多成分、多靶点作用的特点,可为白鲜皮在畜禽健康养殖中的应用提供科学依据。

白鲜皮中白鲜碱的提取工艺优化研究

通过单因素、正交实验设计优化白鲜皮中白鲜碱的提取工艺,白鲜碱作为对照品,制作标准曲线,采用高效液相色谱仪测定白鲜碱的含量。结果显示以乙醇作为溶剂时,白鲜碱的最佳提取工艺是乙醇浓度为90%,提取时间为1.5 h,料液比为1∶4,温度为70℃,在最佳提取工艺下,白鲜皮醇提取液中白鲜碱的含量为0.94 mg/g。标准曲线回归方程为y=215315x+740.97,R^(2)=0.999,在0.0005~0.02 mg/mL范围内呈良好线性关系。本工艺方法操作简便,易实现,为下一步提取白鲜碱进一步活性研究提供依据。

白鲜皮饮片的质量评价

目的:对市场上生产、经营和使用的白鲜皮饮片进行抽样、检验、质量分析评价,指导市场监管。方法:抽取全国各地市场流通的33批次白鲜皮样品,以《中国药典》2020年版一部白鲜皮项下方法对其性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定等进行研究。结果:33批次白鲜皮饮片的性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定结果均符合限度规定;水分测定值总体趋势偏小,浸出物和含量测定值总体趋势偏大。结论:通过对33批次白鲜皮饮片的质量分析与评价,得出市场上的白鲜皮饮片质量良好。

白鲜皮水提物改善迟发型变态反应性肝损伤的作用机理

白鲜皮水提物能作用于2 ,4 ,6三硝基氯苯所致迟发型变态反应的效应相,有效地改善迟发型变态反应性肝损伤,在肝损伤12 h 分离的肝非实质细胞和肝细胞共培养体系中,白鲜皮水提物预处理肝非实质细胞明显地阻断了上清中谷丙转氨酶的释放,作用呈量效关系和时效关系,而预处理肝细胞则无影响。同样,白鲜皮水提物对Con A 引起的脾淋巴细胞增殖无抑制活性,诱导相给药对肝损伤亦无保护作用。

超声波辅助提取白鲜皮多糖的动力学模型研究

目的：构建超声波辅助提取白鲜皮多糖的动力学数学模型。方法：将提取的药材颗粒假想成球形,通过Fick第二扩散定律推导出动力学模型,然后进行多糖超声波辅助提取试验。将得到的数据与推导的模型进行拟合,求得速率常数（k）、相对萃余率、表面扩散系数（Ds）、表观活化能（Ea）等动力学参数。结果：试验数据与构建的动力学模型方程相关性良好,白鲜皮多糖的超声波辅助提取过程符合动力学方程ln[（ C∞-C）/C∞]= π~2 Dst/R^2＋ ln（ π~2/6）动力学参数的研究结果,并确定323 K温度下提取30 min是超声波辅助提取白鲜皮多糖的最佳工艺。结论：试验所得的方程能较好描述超声波辅助提取白鲜皮多糖的过程,可用于工业生产的放大优化。

白鲜皮提取物体外抗白念珠菌生物膜作用及相关基因的研究

目的:研究白鲜皮提取物在体外对白念珠菌生物膜及相关基因的影响。方法:M27-A2测定白鲜皮提取物对白念珠菌的最小抑菌浓度(MIC);XTT法评价白鲜皮提取物对白念珠菌生物膜形成及细胞黏附的影响;实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测白鲜皮提取物作用后,ALS3、HWP1基因表达情况。结果:白鲜皮提取物对白念珠菌的MIC为128μg/m L;对生物膜的SMIC50和SMIC80分别为256μg/m L和512μg/m L;与空白对照组相比,不同浓度白鲜皮提取物(16~512μg/m L)对培养1、2、3、4 h的白念珠菌细胞黏附均有明显抑制作用(P<0.05);qRT-PCR结果显示药物作用后ALS3、HWP1基因表达降低(P<0.05)。结论:白鲜皮提取物对体外白念珠菌生物膜有较明显的抑制作用,其机制可能通过抑制ALS3、HWP1等相关基因的表达,从而抑制Ras/c AMP通路的功能。

白鲜皮提取物抗湿疹实验研究

目的:通过动物实验模型观察白鲜皮提取物的抗过敏和止痒作用。方法:建立动物瘙痒和Ⅳ型变态反应模型,以致痒组胺总量和小鼠耳廓肿胀度为指标,观察白鲜皮提取物抗过敏疗效。结果:白鲜皮提取物高、中剂量组致痒阈值高于空白对照组,白鲜皮提取物高剂量组较空白对照组显著降低2,4-二硝基氯苯致敏所导致的小鼠耳廓肿胀度。结论:白鲜皮提取物可以对抗Ⅳ型变态反应和提高致痒阈值,对湿疹的治疗有一定意义。

“白鲜皮-地肤子”喷雾膜剂提取工艺优化研究

目的:确定“白鲜皮-地肤子”煎煮液的最佳提取工艺。方法:以地肤子中地肤子皂苷Ic得率和干膏得率为考查指标。在单因素实验基础上,利用回流提取和正交设计优选了“白鲜皮-地肤子”提取液的最佳工艺。结果:优选出的提取工艺为:提取1.5 h,浸泡20 min,加8倍量75%乙醇进行提取。结论:该工艺使白鲜皮、地肤子药材药用价值得到更大的发挥,煎煮液稳定可靠,有较大的研究意义。

白鲜皮提取物外用抗炎作用实验研究

目的：研究白鲜皮提取物外用抗炎的药效及药量之优选,为皮肤接触性炎症临床合理用药提供参考。方法：以白鲜皮人体外用量30 g/60 kg为实验参考。用水提醇沉法提取白鲜皮有效成分。选用小鼠耳廓二甲苯致炎的经典模型,并涂抹不同剂量白鲜皮提取物于小鼠肿胀耳廓,通过对左右耳圆片称重计算肿胀度,并经过拟合获得药物量效曲线。结果：二甲苯致炎模型的最佳给药剂量为40μL,最佳致炎时间为0.5 h。白鲜皮提取物用量在11-60 g/kg范围内的肿胀抑制作用显著（P〈0.01）。结论：白鲜皮提取物有较强的抗炎作用,其最佳用量为10.1 g/kg,临床推荐抗炎用量为50.5 g/60 kg。

白鲜皮多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究

目的:研究白鲜皮多糖的超声波辅助最佳提取工艺及其抗氧化活性。方法:采用超声提取法提取白鲜皮中的多糖,通过单因素实验,研究料液比、提取时间、提取次数、提取功率和提取温度对白鲜皮多糖提取率的影响,并进行正交实验。以白鲜皮多糖对DPPH自由基和羟自由基的清除率为指标,维生素C为阳性对照,进行抗氧化活性研究。结果:当料液比为1∶15,提取时间为90 min,提取温度为70℃时,白鲜皮多糖的提取率最高,为10.39%,提取率高于水煎煮法的8.95%。体外抗氧化实验结果显示,随着白鲜皮多糖浓度的增加,它对2种自由基的清除效果都增强。结论:超声波辅助提取法适合用于白鲜皮多糖的提取,且优于水煎煮法;白鲜皮多糖具有理想的抗氧化活性。

正交试验法优选白鲜皮配方颗粒提取工艺

目的:优选白鲜皮配方颗粒的提取工艺。方法:以梣酮转移率及干浸膏得率为考察指标,采用正交试验法考察加水量、浸泡时间、提取时间、提取次数4个参数对提取工艺的影响。结果:提取次数是白鲜皮配方颗粒提取工艺的关键因素,其次是加水量、浸泡时间和提取时间。结论:白鲜皮配方颗粒的最佳提取工艺为浸泡1h,第1、2次加水量分别为8倍、6倍,两次提取时间均为1.5h。

白鲜皮化学对照品黄柏酮的提取工艺研究

目的优选出白鲜皮中对照品黄柏酮的最佳提取工艺。方法采用高效液相色谱法测定黄柏酮含量,采用单因素水平考察乙醇溶剂浓度(65%～95%)、料液比(1∶6～1∶12)、提取时间(1～4 h)、提取次数(1～4次)对黄柏酮提取率的影响;分别对乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数等因素,设计四因素、三水平正交试验法,确定黄柏酮最佳的提取工艺。结果在单因素考察中,乙醇的最佳浓度范围是75%～95%,最佳的料液比范围是1∶8～1∶12,最佳的提取时间范围是1～3 h,最佳的提取次数范围是1～3次。正交试验极差结果分析表明,所考察的因素中,对白鲜皮中黄柏酮提取率的影响程度,从大到小依次为:料液比>提取次数>溶剂浓度>提取时间;黄柏酮的最佳提取工艺为用8倍量95%的乙醇提取2次,每次1 h。按照优化后的提取工艺,黄柏酮的提取率为4.192 mg/g。结论本提取工艺可行,具有工艺流程简单、提取率高的优点。

白鲜皮黄酮类物质分析、富集及在卷烟中的应用

建立了白鲜皮提取物中芦丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚和异鼠李素5种黄酮物质通过高效液相色谱法检测的方法,来分析白鲜皮来源对其黄酮物质含量的影响;并采用AB-8型大孔树脂对白鲜皮提取物中黄酮类成分进行富集,评价富集后的白鲜皮提取物在卷烟中的应用效果。试验采用ZORBAX ECLIPSE PLUS C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相A相为0.35%乙酸水溶液,流动相B相为75%甲醇水溶液,梯度洗脱,流速为0.80 m L/min,VWD检测波长为283 nm,柱温为35℃。检测方法显示:5种黄酮物质测得的线性范围为0.05~500 mg/L;检出限(S/N=3)在0.004~0.08 mg/kg之间,加标回收率(N=6)在85.96%~107.52%之间,检测方法灵敏有效。检测结果表明,不同来源白鲜皮得到的白鲜皮提取物中芦丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚、异鼠李素5种白鲜皮提取物黄酮物质的总含量以辽宁朝阳产白鲜皮提取物最高。经大孔树脂富集后,各产地白鲜皮黄酮类物质含量显著增加。卷烟加香应用结果表明,辽宁朝阳产白鲜皮提取物经大孔树脂富集后,能与烟香协调,增加烟气圆润、绵长感,改善余味。